肾活检组织光镜和免疫荧光标本的制备及检查_第1页
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文档简介

肾活检组织光镜和免疫荧光标本的制备及检查第1页/共22页前言光镜、免疫荧光、电镜观察肾活检组织结构对诊断各种类型的肾小球疾病有重要意义标本处理及制片质量的好坏，与诊断的难易及准确与否有着极为密切的关系必须重视标本制备中的每个细小环节第2页/共22页准备工作生理盐水浸透纱布（潮湿拧不出水）纱布及编号的胶布置培养皿备用清洁5ml小瓶，加光镜固定液3ml（10％的中性福尔马林溶液），盖塞紧后备用清洁5ml小瓶内加冷电镜固定液3ml置冰瓶（4%戊二醛）第3页/共22页肾活检标本的初步处理第4页/共22页取材判断皮质组织皮髓交界组织皮质-髓质-皮质组织仅取得髓质组织则为取材不成功第5页/共22页取材判断判断已取组织：肾组织，肌肉、脂肪、结缔组织等用解剖显微镜或放大镜判断肾组织部位（皮质和髓质，有无肾小球），及时与术者联系肾皮质色淡，见分布不规则，朦胧的红色小点（肾小球）。随经验积累，可肉眼判定立即置肾组织于蜡板上，迅速测量其长度（cm），记录、分割，迅速固定取标本部位、量重要。如无肾小球或皮质<1cm，考虑再次穿刺第6页/共22页标本分切法取组织长1.5cm~2.0cm最佳（1次）小镊子将组织轻置蜡板上，镜下观察、量长度锐利刀片切割组织1mm、2mm及4mm数段先供电镜标本，要求皮质1mm（肾小球1个）其次免疫病理，需组织约2mm（肾小球3~5个）余组织供光镜（肾小球>10个）第7页/共22页标本分切法肾活检穿刺组织的分取肾活检穿刺组织的分取LM：光镜；IF：免疫荧光；EM：电镜第8页/共22页标本的处理光镜分切后的组织平放蜡板上（勿扭曲）小镊子沾少许光镜固定液于组织表面，约30″组织稍硬后，再将整条组织放入固定液内（这样固定的组织平整、不易弯曲，便于切出完整的切片）第9页/共22页标本的处理免疫荧光及免疫酶标分切后的组织迅速置预冷的培养皿内的湿纱布中置冰瓶即送至恒温冷冻切片机内（<-30℃）进行包埋、切片如不能即切片，标本必须置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置时间不宜>2d第10页/共22页标本的处理电镜将分切后的肾组织即浸4%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶内送至电镜室第11页/共22页注意事项短时完成观察和分切标本，注意保持肾组织湿润，切勿使其干涸解剖显微镜光源不宜太强，否则观察组织易干涸，不易看清肾小球免疫荧光用的肾组织必须避免接触固定液，尤其含酒精固定液（避免影响冰冻切片结果）；电镜和光镜固定液不得互相混淆动作轻柔夹取未固定组织，勿牵扯组织，避免人为因素造成组织细胞变形第12页/共22页肾活检标本光镜检查第13页/共22页第14页/共22页HEPASPASMMasson第15页/共22页肾活检标本免疫荧光检查第16页/共22页第17页/共22页MN-IgG

IgAN-IgALN-IgM第18页/共22页免疫荧光电镜常用染色HEPASMassonPAM-Masson刚果红油红“O”光镜IgAIgG第19页/共22页小结按指南要求安全开展肾活

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