重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座

试验二主要功效微生物筛选及生物学特征重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第1页主要功效微生物农业微生物（磷细菌）环境微生物（重金属抗性细菌）工业微生物（生物表面活性剂产生菌）医药微生物（放线菌）筛选系列稀释，平板培养，选择性培养基生物学特征菌落特征，菌体特征，革兰氏反应，功效大小等重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第2页1、磷细菌筛选磷细菌(也称溶磷细菌或解磷细菌)：主要是指土壤中一类溶解磷酸化合物能力较强细菌总称，能够分为无机磷细菌和有机磷细菌。本试验利用无机磷培养基直接从土壤中筛选无机磷细菌，培养出目标菌菌落周围会产生透明溶磷圈。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第3页材料和器具样品：土壤培养基：无机磷培养基培养基配方：去离子水1000ml、葡萄糖10克、(NH4)2SO40.1克、KCl0.2克、MgCl2•6H2O5克、Ca3(PO4)25克、MgSO4•7H2O0.25克；pH7.0，115℃灭菌25min。其它器具：500ml烧杯、250ml三角瓶、试管、酒精灯、涂布棒、1ml和100μl移液枪及枪头、灭菌锅、显微镜、载玻片等。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第4页试验步骤配制无机磷培养基100ml，取250ml三角瓶，向其中加入100ml去离子水和几颗小玻璃珠，再取三只试管各加9mL去离子水，将准备好上述材料在115℃下灭菌25分钟。灭完菌好待培养基冷却到60℃左右倒平板6块。称取土壤样品1g，加入到加有玻璃珠100ml无菌水中，震荡30分钟，配成10-2菌悬液。吸收1mL菌液加入到装有9mL无菌水试管中，震荡均匀，配成10-3菌悬液。如法依次制成10-4、10-5菌悬液。吸收各稀释度菌悬液100μL加入到冷却平板中，稀释涂布，倒置放入30℃恒温培养箱中培养。待菌体长出，观察细菌菌落形态和溶磷菌溶磷圈。并测量溶磷菌菌落直径和溶磷圈直径，计算比值，定性比较各溶磷菌落溶磷能力。制片，革兰氏染色，镜检，观察菌体形态等特征。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第5页2、重金属Cu抗性细菌筛选样品：土壤培养基：1/10LB(1000ml)酵母膏0.5g蛋白胨1g氯化钠1gpH7.0

琼脂2%，配制600ml，分装至3个250ml三角瓶，灭菌待用无菌水准备100ml无菌水置于250ml三角瓶中，内加5颗玻璃珠，灭菌待用。准备3根试管，每根加入9ml无菌水，加塞，灭菌待用。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第6页抗性平板制备将灭菌后1/10LB培养基融化，待温度适宜后，与CuSO4溶液混匀，制成终浓度为2mg/L、5mg/L、10mg/L含铜筛选平板，待用。Cu2:200ml培养基+40ulCuSO4Cu5:200ml培养基+100ulCuSO4Cu10:200ml培养基+200ulCuSO4土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养选择10-3、10-4、10-5稀释度，分别吸收100ul土壤稀释液，分别加入Cu2、Cu5、Cu10抗性平板中，每个稀释度设置三个重复，用涂布棒涂布均匀。(3x3x3=27)观察抗性平板上长出菌落，比较三种浓度抗性平板，将外观形态一致视为同一个菌以确定抗性范围。挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到细菌进行形态描述。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第7页3、生物表面活性剂产生菌筛选生物表面活性剂（Biosurfactants)）是一类由微生物合成、结构不一样表面活性分子，含有一定表/界面活性，集亲水基和疏水基结构于一分子内部两亲化合物。在工业领域如采油和能源工业、药品和化装品、食品、环境工程等中广泛应用。一些生物表面活性剂含有抗生性和溶解红血球特征，这些特征被用于建立血平板筛选模型。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第8页样品：土壤培养基：血平板无菌水土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养观察血平板上长出菌落，比较溶血圈大小。挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到细菌进行形态描述。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第9页4、放线菌筛选及其对金黄色葡萄球菌抑制作用放线菌产生抗生素对细菌含有抑制作用，能够将放线菌菌液涂布在混有金黄色葡萄球菌培养基中培养一段时间，观察放线菌周围产生抑菌圈。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第10页样品：土壤培养基：LB培养基，高氏1号培养基双层平板制备：将灭菌后LB培养基融化，待温度适宜后，与金葡菌液混匀，倒入培养皿，制成底层含菌培养基。凝固后，在上层倒入高氏1号。土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养观察平板上长出菌落，比较抑菌圈大小。挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到细菌进行形态描述。重要功能微生物的筛选和生物学特性专家讲座第11页试验结果

1.观察菌落并将试验结果统计下表不一样溶磷菌落菌落形态溶磷能力形状大小颜色透明粘稠边缘形状菌落直径(mm)溶磷圈直径(mm)圈径/菌径123……菌革染特征形态有没有芽孢122.选取（不一样形态）菌落1-2个