微生物的培养基一专家讲座

微生物包含哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,多数个体十分微小(<o.1mm)生物总称。通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有甚至没有细胞结构.且体内普通不含有叶绿素.不能进行光合作用.

原核

原生生物界真菌界病毒界真核微生物的培养基一专家讲座第1页微生物的培养基一专家讲座第2页病毒

微生物的培养基一专家讲座第3页SARS病毒禽流感病毒微生物的培养基一专家讲座第4页朊病毒（蛋白质病毒）微生物的培养基一专家讲座第5页真菌微生物的培养基一专家讲座第6页如图是酵母菌电子显微镜下形态结构酵母菌和霉菌青霉微生物的培养基一专家讲座第7页

了解相关培养基基础知识，进行无菌技术操作，进行微生物培养。

一、课题目标：

掌握培养基制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：微生物的培养基一专家讲座第8页（2）按培养基物理形态分：液体培养基半固体培养基固体培养基一基础知识:（3）按培养基功效分：P12基础培养基选择培养基判别培养基（1）按培养基化学成份分：·天然培养基·合成培养基·半合成培养基阅读书本P8第三段分别说出它们优点、缺点。微生物的培养基一专家讲座第9页各种培养基详细配方不一样，但普通都包含哪些成份？答：不论哪种培养基，普通都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质。

注：另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,比如:生长因子(即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。

微生物的培养基一专家讲座第10页微生物的培养基一专家讲座第11页二无菌技术：无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。阅读P8---P9说出消毒和灭菌有何不一样？1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)惯用消毒方法：微生物的培养基一专家讲座第12页1、灼烧灭菌:2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)惯用灭菌方法：微生物的培养基一专家讲座第13页分类定义方法灭菌法杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂高效消毒法杀灭一切致病微生物紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等中效消毒法杀灭除芽孢外致病微生物超声波、碘类、醇类、酚类低效消毒法杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子无菌技术：微生物的培养基一专家讲座第14页常

识1．无菌技术包含：（1）对试验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行

灭菌

；（3）为防止周围微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰附近

旁进行；（4）防止已灭菌处理材料用具与

周围物品

相接触。2．消毒方法：（1）日常生活经惯用到是

煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温液体，则使用

巴氏

消毒法（作简明介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用

紫外线进行物理消毒。（4）试验操作者双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。3．灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用

灼烧

灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是

干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽

灭菌法，所用器械是

高压蒸汽灭菌锅。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用

紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。微生物的培养基一专家讲座第15页三、试验操作1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）微生物的培养基一专家讲座第16页【补充】培养基配制标准：①目标要明确：依据培养微生物种类、培养目标等确定培养基类型和配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物质浓度和百分比要适宜。比如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。微生物的培养基一专家讲座第17页1．配制：计算、称量、熔化2．调整pH：用3%HCI/NaOH调整

pH7．0---7．23．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。分装三角烧瓶量以不超出三角烧瓶容积二分之一为宜。4．包扎：操作步骤:微生物的培养基一专家讲座第18页5．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

6．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.7．无菌检验：将灭菌培养基放入37℃温室中培养24—48小时，以检验灭菌是否彻底。微生物的培养基一专家讲座第19页倒平板:微生物的培养基一专家讲座第20页菌种保留1、暂时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保留。

2、长久保留：甘油冷冻管藏法微生物的培养基一专家讲座第21页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？问题讨论

答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？

答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。注意:微生物的培养基一专家讲座第22页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。

答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。微生物的培养基一专家讲座第23页选择培养基加入青霉素培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐培养基:

分离金黄色葡萄球菌不加氮源无氮培养基:

分离固氮菌不加含碳有机物无碳培养基:

分离自养型微生物加入青霉素等抗生素培养基:

分离导入了目标基因受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷培养基:

分离杂交瘤细胞微生物的培养基一专家讲座第24页2、纯化大肠杆菌:接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法

平板划线法:经过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线操作,将聚集菌钟逐步稀释分散到培养基表面.

在数次画线后,能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体,这就是菌落.微生物接种技术微生物的培养基一专家讲座第25页微生物的培养基一专家讲座第26页划线后培养一段时间后微生物的培养基一专家讲座第27页微生物恒温培养微生物的培养基一专家讲座第28页微生物恒温培养微生物的培养基一专家讲座第29页问题讨论

1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？

答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。微生物的培养基一专家讲座第30页

2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。微生物的培养基一专家讲座第31页四、课题结果评价

（一）培养基制作是否合格假如未接种培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致观察与统计培养12h与24h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯。微生物的培养基一专家讲座第32页本课题知识小结:微生物的培养基一专家讲座第33页【典例解析】

例1．关微生物营养物质叙述中，正确是:A.是碳源物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量

解析：不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况分析。对于A、B选项，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D微生物的培养基一专家讲座第34页例2．下面对发酵工程中灭菌了解不正确是:A.预防杂菌污染B.毁灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前答案：B

解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步骤。A说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生物（杂菌），所以是正确；B是错误，因为灭菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。C是正确，因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发酵所用微生物是灭菌后专门接种，灭菌必须在接种前，假如接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。微生物的培养基一专家讲座第35页编号成份含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例3．右表是某微生物培养基成份，请据此回答：（1）右表培养基可培养微生物类型是

（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

.用于培养金黄色葡萄球菌.自养型微生物

含碳有机物

微生物的培养基一专家讲座第36页（3）若除去成份②，加入（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成份共有

类。（5）不论何种培养基，