siRNA与癌症治疗的探究演示文稿

siRNA与癌症治疗的探究演示文稿现在是1页\一共有18页\编辑于星期一优选siRNA与癌症治疗的探究ppt现在是2页\一共有18页\编辑于星期一siRNA的简介

小干扰RNA（SmallinterferingRNA；siRNA）有时称为短干扰RNA（shortinterferingRNA）或沉默RNA（silencingRNA），是长度20到25个核苷酸的双股RNA，在生物学上有许多不同的用途。目前已知siRNA主要参与RNA干扰（RNAi）现象，以带有专一性的方式调节基因的表达。此外，也参与一些与RNAi（RNAinterference核糖核酸干扰）相关的反应途径，例如抗病毒机制或是染色质结构的改变、阻断细胞内可能发生的有害活动，如肿瘤细胞的生长，但是要成功地将siRNA传送到特异性的细胞中而不对其它细胞产生不利影响还一直是个难题。本次现在是3页\一共有18页\编辑于星期一siRNA的结构siRNA通常是一段长21个核苷酸的双股RNA（dsRNA），其两股分别在RNA的两端超出另一端2个核苷酸，图示如下：

每一股各有一个5'磷酸基末端与一个3'羟基末端。此结构经dicer作用而得，dicer是RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)。此外，siRNA也可经由多种不同转染（transfection）技术导入细胞内，并对特定基因产生具专一性的基因敲除（knockdown）效果。本质上，任何已知序列的基因都可以、也因此是经过适当剪裁而具有序列互补性的siRNA的作用对象。这使siRNA成为研究基因功能与药物目标的一项重要工具。现在是4页\一共有18页\编辑于星期一RNAi

RNA沉默是存在于生物中的一种古老现象,是生物抵抗异常DNA(病毒、转座因子和某些高重复的基因组序列)的保护机制,同时在生物发育过程中扮演着基因表达调控的角色，它可以通过降解RNA、抑制翻译或修饰染色体等方式发挥作用，因此在治疗癌症肿瘤中有很大的应用前景。现在是5页\一共有18页\编辑于星期一siRNA发挥RNAi作用的过程siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于Dicer的RNA酶。

另外，还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默。现在是6页\一共有18页\编辑于星期一归纳siRNA的特点

依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点。

2长度约在22nt左右。1是RISC组分。4

生成需要Argonaute家族蛋白存在3

植物体内也存在内源的siRNA。5现在是7页\一共有18页\编辑于星期一siRNA在RNAi应用中的缺陷

在RNAi实验中，化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内，但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点：siRNA进入细胞后容易被降解；进入细胞siRNA在细胞内的RNAi效应持续时间短。针对这种情况，出现了质粒、病毒类载体介导的siRNA体内表达。该方法的基本思路是：将siRNA对应的DNA双链模板序列克隆入载体的RNA聚合酶III的启动子后，这样就能在体内表达所需的siRNA分子。这种方法总体的优点在于不需要直接操作RNA，能达到较长时间的基因沉默效果。现在是8页\一共有18页\编辑于星期一质粒表达siRNA的优点通过质粒表达siRNAs大都是用PolIII启动子启动编码shRNA(smallhairpinRNA)的序列。选用PolIII启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA，遇到4—5个连续的U即终止，非常精确。当这种带有PolIII启动子和shRNA模板序列的质粒转染哺乳动物细胞时，这种能表达siRNA的质粒确实能够下调特定基因的表达，可抑制外源基因和内源基因。采用质粒的优点在于，通过siRNA表达质粒的选择标记，siRNA载体能够更长时间地抑制目的基因表达。当然还有一点，那就是由于质粒可以复制扩增，相比起其它合成方法来说，这就能够显著降低制备siRNA的成本。现在是9页\一共有18页\编辑于星期一此外，带有抗生素标记的siRNA表达载体可用于长期抑制研究，通过抗性辅助筛选，该质粒可以在细胞中持续抑制靶基因的表达数星期甚至更久（比如Clontech（现属于Takara）的RNAi-Ready表达载体）。另外带有荧光标记的siRNA表达载体也受到研究者的重视与欢迎，因为带荧光标记的表达载体，可以让研究人员通过荧光标记很容易观察到载体的转染效率及目的基因的沉默效率。可通过荧光显微镜观察含有\shRNA的细胞或通过流式细胞仪富集被转染的细胞。同时荧光蛋白的表达与shRNA的表达是独立的，因此不影响shRNA基因沉默的效果。带有标记的siRNA表达载体现在是10页\一共有18页\编辑于星期一研究人员将编码人类端粒酶RNA（humantelomeraseRNA，hTR），长67bp的寡核苷酸引入pSIREN——一种重组腺病毒构建中的穿梭载体。然后将U6-RNA启动子和siRNA编码insert从pSIREN上剪切下来，亚克隆进pAdeno-X，构建出了质粒pAd-hTR。接着研究人员将pAd-hTR转染进哺乳动物细胞系HEK-293，获得了携带有hTR靶向的siRNA（Ad-hTR-siRNA）的腺病毒。通过一系列的实验，研究人员证明了Ad-hTR-siRNA介导的端粒酶沉默在HeLa细胞中的作用。同时将Ad-hTR-siRNA与Ad-NT-siRNA进行比对，发现前者能极大的降低HeLa细胞中hTRmRNA水平（by70.21%），和端粒酶活性（by58.87%）。而且会引起HeLa细胞凋亡。利用Ad-hTR-siRNA进行皮下肿瘤异种移植治疗可以减缓肿瘤的生长，其中至少部分是由于体内细胞凋亡（P<0.05）。总而言之，这些研究结果证明了hTRsiRNA在HeLa细胞系中有效和特异的端粒酶的敲除，从而指出了这种siRNA表达重组腺病毒系统在癌症基因治疗方面的前景。siRNA病毒载体减缓肿瘤生长现在是11页\一共有18页\编辑于星期一siRNA在卵巢癌治疗中的实验探究siRNA在胃癌治疗中的实验探究siRNA与癌症的实验siRNA在其他癌症治疗中的应用现在是12页\一共有18页\编辑于星期一

德克萨斯州学M.D.Anderson癌症中心的项新研究显示，装载在一微小的脂肪球中的一种分子开关（siRNA）能够渗入卵巢癌肿瘤细胞中“掐死”一种讨厌的蛋白并明显缩小肿瘤的尺寸。该项研究的结果刊登在8月15日的ClinicalCancerResearch杂志上，这项研究还成为该期杂志的封面故事。

小鼠模型实验证实一种强有力的短干扰RNA（siRNA）传递系统能够攻击癌症。SiRNA是一种能用于沉默基因关闭有害蛋白制造的伟大技术。在离体实验中，这种技术的效果很好，但是难点是如何能够让它进入到肿瘤中。因为短的RNA片段在没有被直接注射的情况下无法进入到肿瘤中，并且实验室用的注射方法在临床中是不能适用的。

4/21/2023siRNA在卵巢癌症治疗的发现现在是13页\一共有18页\编辑于星期一这研究组将能靶向一种促进卵巢癌细胞存活和扩散的蛋白质的siRNA转载进一种脂质体（一种脂肪球，体积非常小）中。研究人员对感染了三种人类卵巢癌细胞系的小鼠进行了3到5周的处理。这些小鼠接受了含有FAKsiRNA、对照siRNA或空处理。一些小鼠接受了siRNA脂质体和化疗药物docetaxel。

实验结果显示，接受了FAK沉默脂质体的小鼠的肿瘤重量与对照组相比，减少了44％－72％；联合使用了FAK沉默脂质体和药物docetaxel的小鼠，其肿瘤肿瘤减少了94％－98％。而且这种联合方法对docetaxel抗性卵巢癌细胞系同样有用。

4/21/2023现在是14页\一共有18页\编辑于星期一4/21/2023武汉大学中南医院胃肠科教授邓长生在InternationalImmunopharmacology上发表RNAi文章，解析以siRNA治疗胃癌的新成果。胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在癌症致死原因中列第二。武大中南医院邓长生教授、夏冰教授等在先前的研究中发现了多个易感基因，与湖北汉族人胃癌显著相关，尤其是在湖北汉族人群肿瘤坏死因子基因位点上，检测出一新的等位基因，为胃癌的早期诊断和治疗提供了一项新方法。找到靶位基因后，邓长生教授等尝试用最新的RNAi技术治疗胃癌。邓教授研究小组以survivin为靶位设计siRNA，构建了一个Psilencer2.1-surivinsiRNA质粒，并将该质粒导入胃癌MGC-803细胞系中，同时还将该细胞系注入裸鼠体内，观察该siRNA的效果。结果发现，小鼠细胞内的surivin基因转录的mRNA量显著下降，并且surivin蛋白表达量也下降，癌细胞凋亡率升高。总的来说，该siRNA靶位可有效的抑制胃癌细胞增殖，可能成为胃癌的潜在治疗靶位。siRNA在胃癌症治疗的发现现在是15页\一共有18页\编辑于星期一4/21/2023Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员，Survivin具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤和胚胎组织，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关。Survivin是目前发现最强的凋亡抑制因子，Survivin功能复杂，具有抑制细胞凋亡，促进细胞转化并且参与细胞的有丝分裂、血管的生成和肿瘤细胞耐药性的产生等作用。目前，Survivin已成为研究的热点。Survivin在人类各种肿瘤组织癌细胞中含量很丰富，但在正常细胞中却几乎不存在。体内外研究表明，Survivin可在多种转化细胞系中表达，并见于所有人类最常见的肿瘤组织，包括肺癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌。Survivin蛋白质结构现在是16页\一共有18页\编辑于星期一靶向survivin的siRNA对胃癌BGC-823细胞增殖的影响

设计并合成3条靶向survivin的小分子干扰RNA(siRNA),构建表达性干扰RNA质粒(shRNA)shRNAsurvivin-1、shRNA-survivin-2和shRNA-survivin-3,分别转染胃癌BGC-823细胞,实时定量PCR检测干扰RNA沉默survivinmRNA表达效果,Westernblot观察对胃癌BGC-823细胞survivin蛋白质表达的抑制,MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测细胞生长抑制率,流式细胞计数检测各组细胞周期和凋亡率,探讨干扰RNA对胃癌BGC-823细胞生长的影响。4/21/2023现在是17页\一共有18页\编辑于星期一结果在体外,shRNA-survivin-1有效沉默人胃癌BGC-823细胞survivinmRNA的表达,使survivinmRNA相