G试验侵袭性真菌病的辅助诊断方法

内容目录一、真菌感染概一、真菌感染概述二、真菌与葡聚糖三、鲎试验与G试验四、G试验——临床意义五、“生物探针”介绍六、“生物探针”操作流程七、“生物探针”的临床比对八、G试验的影响因素现在是1页\一共有77页\编辑于星期日湛江安度斯生物有限公司是查尔斯河公司设在中国的子公司，是中国细菌内毒素检测试剂的最大供应商，也是中国细菌内毒素检测领域的技术领导者和创新先锋；世界著名的美洲鲎试剂（LAL）生产企业——美国CR恩度斯弗公司（CharlesRiverEndosafe,Inc.），也是查尔斯河实验室公司的子公司湛江安度斯的简介现在是2页\一共有77页\编辑于星期日CharlesRiverLaboratories作为全球最大的实验动物公司，CharlesRiverLaboratories一直是全球实验动物商业化繁育和市场供应的领导者，拥有分布在北美、欧洲和日本的15个分设施和遍布全球的销售网络；已成为一个生物医学前临床产品和服务的主要供应商。现在是3页\一共有77页\编辑于星期日库珀博士CREndosafe（恩度斯弗）公司是美国著名三大鲎试剂企业之一,有国际知名权威学者詹母斯弗.库珀博士(Dr.JammesF.Cooper)创建。库珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱。1971年他与Lein及Banger等人提出以鲎实验法检查热源，并率先证明了鲎实验法作为注射药品热源检查的敏感方法的价值。1972年他协助美国(TheparentralDrugAssociation)的鲎试剂.他一直主持着美国非经肠道药物协会(TheparenteralDrugAssociatoin)的鲎实验应用促进工作,以及每年一届的美国南卡罗纳州查尔顿的鲎实验学术会议。现在是4页\一共有77页\编辑于星期日库珀博士创建的Endosafe公司现以成为美国鲎试剂(LAL)市场最大的供应商.该公司的鲎试剂以其良好的稳定性,广泛的适用性以及优越的抗干扰性能享誉国际医药工业界.现在是5页\一共有77页\编辑于星期日一、真菌感染概述真菌感染：真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染；深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器的感染。6现在是6页\一共有77页\编辑于星期日美国死于感染性疾病的十大原因820围产期828真菌101053胃肠道1305围产期91259结核1277肝胆管82370真菌1377胃肠道74596肝胆管1402细菌性脑膜炎65577心脏2333肺结核513,413肾脏/泌尿道2486心脏416,524HIV/AIDS8006肾脏/泌尿道322,396败血症9438败血症287,181呼吸道56,966呼吸道1死亡人数感染类型死亡人数感染类型19971980真菌感染的死亡率上升了3.4倍（死亡率：0.7~2.4/100,000）7现在是7页\一共有77页\编辑于星期日EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称IFD；是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。是真菌感染致死的重要原因侵袭性真菌病(InvasiveFungalDisease,IFD)8现在是8页\一共有77页\编辑于星期日侵袭性真菌病已变得越来越常见9现在是9页\一共有77页\编辑于星期日侵袭性真菌感染的诊断标准G试验可作为拟诊病例的微生物学标志10现在是10页\一共有77页\编辑于星期日主要可引发侵袭性真菌病的疾病肿瘤类：胃癌，肝癌，肝内胆管癌，肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤11现在是11页\一共有77页\编辑于星期日二、真菌与葡聚糖2023/4/21121.某些真菌的细胞壁结构现在是12页\一共有77页\编辑于星期日2.细胞壁含有葡聚糖组分的真菌：

（1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。

（2）细胞壁有葡聚糖组分2023/4/2113现在是13页\一共有77页\编辑于星期日这类真菌有：

念珠菌

曲霉菌

耶氏肺孢菌

镰刀酶

隐球菌接合菌.......2023/4/2114现在是14页\一共有77页\编辑于星期日北京301医院尸检结果（77～97年）肺真菌病发生率3.7％(38/1027)隐球菌病、接合菌病占真菌病比例不高15现在是15页\一共有77页\编辑于星期日当人体深部受这类真菌感染时，真菌在代谢过程会不断释放出葡聚糖。检查患者的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含量明显高于非感染者。因此，葡聚糖可作为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。2023/4/2116现在是16页\一共有77页\编辑于星期日三、鲎试验与G试验1.鲎（Hòu，后）试验2023/4/2117现在是17页\一共有77页\编辑于星期日

鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已有三亿多年的历史，人们称它为“活化石”。雌雄2023/4/2118现在是18页\一共有77页\编辑于星期日研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细胞）中含有一种特殊的凝固酶原。这种凝固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质激活为凝固酶，从而导致一系列的生化反应。这两种物质就是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和(1-3)--D葡聚糖。2023/4/2119现在是19页\一共有77页\编辑于星期日

人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂（LAL或TAL）。通常称使用鲎试剂检测脂多糖（LPS）或-葡聚糖（-G）的试验为鲎试验（LALTestorTAL

Test）。2023/4/2120现在是20页\一共有77页\编辑于星期日2.鲎试验反应机理21现在是21页\一共有77页\编辑于星期日3.鲎试验的应用应用I：细菌内毒素检查(BacterialEndotoxinTest,BET)2023/4/2122现在是22页\一共有77页\编辑于星期日研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒素(Endotoxin)的组分。2023/4/2123现在是23页\一共有77页\编辑于星期日

内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质。革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗器械。因此注射药品和医疗器械都要求必须作细菌内毒素检查（BET）。2023/4/2124现在是24页\一共有77页\编辑于星期日应用II：

革兰氏阴性菌脂多糖检测2023/4/2125现在是25页\一共有77页\编辑于星期日细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当人体深部感染革兰氏阴性菌时，细菌会在体内不断释放内毒素（脂多糖）。检查患者的血液（血浆）、腹水、尿液及脑脊液，会发现脂多糖明显高于非感染者。脂多糖检测对败血症、严重器官衰竭的快速辅助诊断有临床价值。2023/4/2126现在是26页\一共有77页\编辑于星期日应用III：

真菌(1-3)--D葡聚糖检测2023/4/2127现在是27页\一共有77页\编辑于星期日

医学上通常把用于检测真菌葡聚糖的鲎试验称为G试验。这是取葡聚糖的英文名称Glucan的首字母来命名该试验。2023/4/2128现在是28页\一共有77页\编辑于星期日需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有葡聚糖组分，在隐球菌感染患者的血液中却检测不出葡聚糖异常。这可能与隐球菌具有特殊的细胞被膜有关。因此G试验不适合对隐球菌感染的检测。2023/4/2129现在是29页\一共有77页\编辑于星期日四、G试验——临床意义30现在是30页\一共有77页\编辑于星期日G试验的临床意义31现在是31页\一共有77页\编辑于星期日G试验的临床意义32现在是32页\一共有77页\编辑于星期日33现在是33页\一共有77页\编辑于星期日34现在是34页\一共有77页\编辑于星期日G试验应用科室35现在是35页\一共有77页\编辑于星期日五、“生物探针”介绍36现在是36页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”介绍37现在是37页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”介绍38现在是38页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”介绍39现在是39页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”介绍40现在是40页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”功能快速定量的临床检测方法，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以判断的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于对感染的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效判定。可检测标本：血浆、血清、尿液、腹水、脑脊液等41现在是41页\一共有77页\编辑于星期日六、“生物探针”操作流程42现在是42页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程43现在是43页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程44现在是44页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程45现在是45页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程46现在是46页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程47现在是47页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程48现在是48页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程49现在是49页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”操作流程数据可接入LIS系统等50现在是50页\一共有77页\编辑于星期日侵袭性真菌感染的临床检测方法对比51现在是51页\一共有77页\编辑于星期日产品特点灵敏度高快速检测方法严谨准确性高特异性好临床符合率高52现在是52页\一共有77页\编辑于星期日七、“生物探针”的临床比对J厂家的-G试剂、LPS试剂均无特异性53现在是53页\一共有77页\编辑于星期日最低检测限最低浓度重复性厂商 安度斯 最低检测限 10pg/ml编号 检测结果(pg/ml) 阴性(pg/ml)

检测日期1 10.3

<1.3

3.62 10.1

3 11.0 4 9.8 5 9.8 6 10.8 7 10.1 8 10.0 9 9.6 10 10.3

CV=6.85%11 10.0 12 9.8 13 10.7 14 9.8 15 12.4 16 10.3 17 9.7 18 9.6 19 9.4 20 9.9 21 9.6 现在是54页\一共有77页\编辑于星期日批内精密度现在是55页\一共有77页\编辑于星期日批间精密度现在是56页\一共有77页\编辑于星期日“生物探针”的临床比对评价结论：安度斯产品的综合性能具有明显优势。57现在是57页\一共有77页\编辑于星期日八、G试验的影响因素2023/4/2158现在是58页\一共有77页\编辑于星期日1.检测试剂的灵敏度1.1葡聚糖的量值与标准品2023/4/2159现在是59页\一共有77页\编辑于星期日2023/4/2160

目前G试验中葡聚糖采用的单位为重量单位“pg”。pg是一个非常非常微量的单位。因此G试验是一项非常灵敏的生物检测。当然，越是灵敏精确的检测，越容易受到干扰。现在是60页\一共有77页\编辑于星期日目前葡聚糖没有公认的标准物质！没有国际标准品，没有国家标准品，也没有公认的行业标准品，只有企业的标准品（质控品）2023/4/2161现在是61页\一共有77页\编辑于星期日各企业的葡聚糖标准品的来源不一。有的来自茯苓多糖，有的来自香菇多糖，有的来自海藻多糖。不同来源的葡聚糖对鲎试剂的活性不同。各企业的葡聚糖标准品效价不一。你的1pg可能相当我的10pg。相互之间无可比性。2023/4/2162现在是62页\一共有77页\编辑于星期日无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值。有的是10pg为阳性，有的是100pg为阳性。对参考值的表示各厂家也有所不同。有的以全血含量来表示，有的以检测浓度来表示。2023/4/2163现在是63页\一共有77页\编辑于星期日1.2试验器具对G试验有重要的影响！葡聚糖是自然界广泛存在的一种物质，极容易污染到试验器具。葡聚糖是一种非常稳定的物质，通常的蒸煮高压、辐照等灭菌手段不能彻底破坏葡聚糖。很难找到真正意义的无葡聚糖的器具。2023/4/2164现在是64页\一共有77页\编辑于星期日G试验使用到的实验器具：采血针采血管（瓶）反应试管移液器具（吸头）最主要的污染来自采血管！2023/4/2165现在是65页\一共有77页\编辑于星期日重要建议最好使用厂家供应的专用采血管（瓶）其次是用经厂家检测合格的采血管不能使用未经检测的实验器具2023/4/2166现在是66页\一共有77页\编辑于星期日尊重科学，为患者负责！无效试验是对患者最大的危害！2023/4/2167现在是67页\一共有77页\编辑于星期日2.试剂的生物特异性

如前所述，G试验的检测试验就是鲎试剂。鲎试剂可以对两种物质反应，用于不同的用途。如下图表示。

检测内毒素/脂多糖用于革兰氏阴性菌检测

鲎试剂

检测葡聚糖（G试验）用于真菌检测2023/4/2168现在是68页\一共有77页\编辑于星期日在检测试剂制备上，应根据试剂的用途制备生物特异性强的检测试剂，如：用于检测细菌脂多糖的试剂，不能对葡聚糖产生反应。用于检测真菌葡聚糖的试剂，不能对脂多糖产生反应。2023/4/2169现在是69页\一共有77页\编辑于星期日

遗憾的是，由于技术的原因，并不是所有厂家的试剂都具有生物特异性。有的试剂盒对LPS和-G都反应。有的试剂盒对非检测对象低浓度时可能不反应，较高浓度时会反应。无生物特异