华中农业大学作物遗传育种展业博士资格考试题库整理

.博资考试．述通基型析含及其遗研中作SNPSNPPCRNP2.请简（1）农物体改的理（）花粉物体良方（3）如何用代物术段高体良效QTL3.如利生物术基组研的果服统种法缺23QTL..

.4.关分的原，见题解方，作育中应1,,QTLLD2L,RFLP3LD123QTLs1,235.列一生物术抗和逆种的用Bt2009．述种于录分植基因达技及原和用mRNAsmallRNANONcoding用高通总，将的成获得用第二代reads直接RPKM值先组装转然后RPKM值RPKM万比对均的基..

.）转5UTRs区域鉴定2）发现序列差异：如融合基因鉴定、编码序列多态性研究3简述种于蛋质平析物因达方技原及用常用的方法有双向凝胶电泳联合质谱方法、鸟枪法LC-MS谱鉴定、抗体芯片方法等。双向凝胶电泳联合质谱的原理是：第一向根据蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-分离，把复杂蛋白质混合物中的蛋白质在二维平面上分开。凝胶染色后可以利用图像分析系统成像，然后通过分析软件对蛋白质点进量析，并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。通过专门的蛋白质点切割系统，可以将蛋白质点所在的胶区域进行精切割接着对胶中蛋白质进行酶消酶切后的消化物经脱/浓缩处理后就可以通过点样系统将蛋白质点样到特定的材料的表面MALDI-TOF后些蛋白质就可以在质谱系中进行分析，从而得到蛋白质定数据，通过与已有的数据库进行比对确定候选蛋白。鸟枪法LC-MS质鉴定的本原理是：蛋白质混合物经过简单或不经过SDS分就被酶切消化成肽段混合物，肽段混合物经过高效液相色谱分离形成较简单的组分，然后将其导高分辨率质谱仪中进行质量分析。肽段在质谱仪中经离子化后，带上一定量的电荷，通过质量析器的分析，可检测个肽段的质量与电荷的比值。通过与数据库匹配进行肽段鉴定，最后再从定的肽段推导可能的蛋白。抗体芯片方法：抗体芯片是蛋白芯片的一种，它的基因原理是首先制备目标蛋白的特异性的抗体，将不同的蛋白样品用荧光分子标记，再与抗体芯片杂交，杂交信号强弱反应了蛋白的表水品高低。这三种技术可用于分析作物的不同品种，或不同生理、病理条件下蛋白组的表达差异，有助于鉴定出影响作物品质、抗逆性、产量等性状的重要蛋白质。列举种用的二测技平，述基原及在物传育技中应。进入21世后公的454术公的Solexa技术和ABI公的SOLiD技术为标志的第二代测序技术诞生了。（1技原理①待文的构建。把待测序列用喷雾(打成的片段并在小片段两端加上不同的接头，构建单链DNA(ssDNA)库。②PCR。将这些ssDNA与磁珠在一起孵育、退火，由于磁珠表面含有与接头互补的寡聚核苷酸序列，因此ssDNA特异地连接到磁珠上。同时孵育体系中含有PCR反应试剂，因此可以保证每一个与磁珠结合的小片段都会在各自的孵育体系内独立扩增，扩增产物仍可以结合到磁珠上。反应完成后，破坏孵体系并富集带有磁珠。经过扩增反应，每一个小片段都将被扩增大约万倍，从而达到下一步测序反应所需的模板量。③测序。预先用Bacillusstearothermophilus聚酶和单链结蛋白处理带有的磁珠，然后将磁珠放置在板上板上含有很多直径约为的小孔测反应采用焦磷酸测序法一种含有比PTP板小孔直径更小的磁珠放入小孔动测序反应序应以磁珠上量扩增的为模板次反应入一种进行合成反应。如果这种能与待测序列配对，则会在合成后释放焦磷酸基团。释放的焦磷酸基团会与反应体系中的ATP硫化酶反应形成ATP。成的ATP和荧光素酶共同氧化反应体系中的光素分子并发出荧光。测序反应产生的荧光信号由放置在PTP板一的CCD照机记录再经过计算机分析转换为测序结果。由于每种在反应中产生的荧光颜色不同，因此可以根据荧光的颜色来确定被测分子的序列。（2Illumina公司的Solexa技术①待测文的构建把待测序列打断成200-500bp的片段，并在小片段两端加上不同的接头，建ssDNA文。②这些随地附着在流动槽表面的channel上向反应体系中..

.添加未标记的核苷酸和酶Bridge扩增反应扩增将桥型扩成桥型dsDNA。④将桥型dsDNA变成ssDNA继扩增。经过不断的扩增变性循环，每一sDNA都在各自的位置达到能支持下一步测序反应所需信号强度的模板量测序方法采用边合成边测序的方法（反体系中同时添加DNA聚酶接引物和带有碱基特异荧光标记的种dNTP。由于这些dNTP的3´羟基被化学方法保护，因而每合成反应都只能添加一个dNTP在dNTP被添加到合成链上后，所有未使用的游离和聚酶会被洗脱加入激发荧光所需的缓冲液，用激光激发荧光信号，用光学设备完成荧光信号的记录，再通过计算机分析转化为测结果。（3）ABI公的SOLiD技①待测文的构建把测列打断成很小的片段，并在小片段两端加上不同的接头，构建库。。与技术的PCR类，将带接头的ssDNA固定在磁珠表面行扩增对增产物进行3’端饰连酶序系加入连接酶、通用测序引物和具有3’-XXnnnzzz-’构的八聚核苷酸。在这个八聚核苷酸中，第1和第上的碱基是确定的，并根据种类的不同在第上加了不同的荧光标记。当八聚核苷酸由于第第2位对而被连接酶连接上时，会发出荧光。在记录下荧光信息后，通过化学方法在第5和之间进行切割，淬灭荧光信号，以进行下个位置的测序。通过这种方法，每次测序的位置都相差五位，即第一次测第第2位第二次测第第7位在到尾后，将新合成的链变性、洗脱。而后用通用测序引物进行第二轮测序。第三代测序技术：基于边合成边测序的思想，将待测序列随机打断成小片段并在末端加上Poly(A)用末端转移酶在接头末端加上荧标记。用小片段与表面带有寡聚的平板杂交。然后，加入聚酶和光标记的进合反应，每一轮反应加一种dNTP将参与合成的和聚合酶洗脱测上一步记录的杂交位置上是否有荧光信号，如果有则说明该位置上结合了所加入的这种。过不断地重复合成、洗脱、成像、淬灭过程完成测序。传统种是通提一配力特配力提杂种种量潜，代子种是过良因聚和积良因互来高交产潜力你认这种点否盾我应如应这观来导交种种F1全基组略年全基因组选择的概念被提出即估计全基因上所有标记或单倍型的效应从而得到基因组估计育种值。与传统的标记辅助选择的最大区别在于，全基因组选择不仅仅依赖于一组显的分子标记，而是联合分析群体中的所有标记，以进行个体育种值的预测。与传统的分子标记助选择相比，全基因组选择有两大突破，一是基因组定位的双亲群体可以直接应用于育种；二更适合于改良由效应较小的多基因控制的数量性状。农作物复杂性状的分子育种需要操控许多因素，其中包括植物生长、发育和对各种生物和非生物逆境条件的反应。通过全基因组策略分子标记辅助育种的操作更加容易，并由此产生革命..

.影响全因组策略的分子标记助育种利用全基因组测序和全基因组分子标记对代表性的或者全部遗传资源和育种材料进行分析，有效地考虑分子育种中面临的各种基因组和环境因素。大模高密度的基因型鉴定和全基因组选择是该策略的两个重要组成部分通和精确的表型鉴定和环境测e-typing是全基因组策略的重要组成部分全基因组策略的基本策略包1）基于种子的因型鉴定简化分子标记辅选择低育种成本加规模和提高效）选择性基因型鉴定和表型鉴定合合池分析捕获和育种相关的大多数重要因素）灵活的基因型鉴定系统）结合连锁作图和作图方法进行标-状关联分析）基于序列进行分子标记开发、等位基因发掘、基因功能研究和分子育。最被发现是因为它作为细菌的适应性免疫系统用RNA引导的核酸酶来剪切外来的基因元件。目前为止，在细菌和古生物中一共发现了三类系，它们都由基因、非编码RNA和个特殊的重复元构成的（crRNA阵列组成。在利用系统进行基因编辑时Cas9可以被引导至不同目的基因的序列而编辑不同的目的基因此外利系已经在不同的生物体和细胞系中成功进行了基因编辑，在这个过程中，为了保证基因编辑的最大成功率，通常要根据物种的不同，对要进行优化系通过特异性设计针对目的基因序列20核苷酸大小的引物将Cas9特异性地引导至目的基因序列，在操作时间上大大缩短。设计针对靶基因的引物大约就花费1-2周时间，而目的基因敲除的细胞系在2-3周即获得；系也存在脱靶效应。目前为止，科研工作者对其主要缺点的解决办法是，通过生物信息学预测出多个容易脱靶的潜在点，从而在sgRNA设过程中开这些潜在脱靶位点。请抗棉的制例阐基工育的般程（1）目的基因或的得。获得途径：①根据基因表达产物—蛋白质进行基因克隆②从基因组mRNA序克隆基因；目前使用的棉花抗虫基因的源包括苏云金芽孢杆菌的t因和胰蛋白酶抑制基因。（2）含有目的基因或的组质粒的构建。构建步骤：从原核生物中获取目的基因的载体并进行改造，利用限制内切酶将载体切开，并用连接酶把目的基因连接到载体上，获得NA重体。（3受体材料的选择和再生系统的建立。良好的植物基因转化受体系统应满足以下条件：高效稳定的再生能力；受体材料要有较高的遗传稳定性；具有稳定的外植株来源；对筛选剂敏感。（4转基因方法的确定和外源基因的转化：转化方法包括基因枪法、农杆菌介导法、花粉管通道法。（5转化体的筛选与鉴定。为了有效选择出这些真正的转化细胞，必须使用特异性的选择标记基因进行标记，转化体的鉴定根据检测水平的不同分为、录水平和翻水平的鉴定。如全描述个种法如谱混或回择的程（1）系谱法，从杂种的一次分离世代（单交F，复交F1开始，进行连续性的单株选择，直到选得性状优良而又整齐一致的系统，升入产量比较试验。系谱法基本程序杂一（以组合为小区种植每区自作物自由授粉，异花植物组合间隔离、组合内自由授粉F1一般不做选择，按组合混收留种b、杂种二代是剧烈分离的世代，也是注重选择的世代，入选的目标株应单株自交留种c、杂种三代F3：按选的单株后代（株系）为小区分别播种，每小50株10个小区设以CK，淘汰不良株系优系中选优株自交，单株留种。系内高度一致者可升级鉴定。F4后均重复作，优系中选优株自交直致系内纯合一致、品种比较试验条一致、三次重复、设置对照、保护行。入选最佳品系f区试验在品比试验方法相似的基础上按不同地区多点设置一般由省或省级以上品种审定委员会安排，相应级别种子管理部门组织实施。或：程序：亲本选配，配置组合；点播、组合编号，评定优良组合、淘汰不好组合，拔除假杂、杂株、劣株，分组合混收，脱粒；按组合点播，确定优良组合，选优良单株，分株收获和脱粒..

.编号F2中选单株点播种成株，选出优良系统，再从中选择优良单株，分株收获、脱粒；按系统把中选单株播成系统，选优良单株，分株收、脱粒，少量稳定品系，进行产量试验；边试验边选择；稳定品系，进行生产试验，繁殖种子，示范推广。优点能早集中精力于优良株可及时组织试验示范繁殖系间的亲缘关系十分清楚，便于查源，便于研究。缺点：中选率低，多基因控制的性状易丢失；工作繁重。（2混合法：在自花授粉作物的杂种分离世代，按组合混收种植，不加选择，直到估计杂种后