微生物实验四微生物实验

微生物实验四微生物实验第1页，共19页，2023年，2月20日，星期六一、目的要求

1、识别细菌的形态特征（观察细菌的形态、大小、色泽、透明度和边缘特征。2、掌握细菌涂片方法及革兰氏染色步骤，并在显微镜下观察细菌的形态。3.学习巩固显微镜操作技术及无菌操作技术第2页，共19页，2023年，2月20日，星期六二、基本原理

第3页，共19页，2023年，2月20日，星期六革兰氏染色

结晶紫、碘液媒染时，由于细胞壁带负电荷、吸收碱性染料，G＋，

G－和都吸收碱性染料，在细胞结合结晶紫碘液复合物。

第4页，共19页，2023年，2月20日，星期六酒精脱色时，G＋菌细胞壁厚，含有较厚的肽聚糖，又由于有短肽作肽桥且短肽几乎都相连，肽聚糖的强度高，整个细胞壁结构紧密，因此遇酒精时，结晶紫碘液阻留在细胞壁内；

G－酒精使外膜类脂溶解，只剩肽聚糖层，而G－肽聚糖层薄而松散，不能阻挡复合物逸出，细胞壁变成无色，第5页，共19页，2023年，2月20日，星期六再用红色染料复染，则G＋因已结合紫色染料难以吸咐红色染料，成紫色或结合微量红色染料而成紫红色。而G－菌则重新吸附红色染料由无色变红色。第6页，共19页，2023年，2月20日，星期六Staphylococcusaureus金黄色葡萄球菌Escherichiacoli大肠杆菌革兰氏染色示意图步骤G＋菌

G－菌

1.固定2.结晶紫3.碘液5.沙黄4.脱色杂色文字第7页，共19页，2023年，2月20日，星期六阳性菌阴性菌革兰氏染色法第8页，共19页，2023年，2月20日，星期六三、实验材料

（一）药品生理盐水结晶紫染液卢戈氏碘液95%乙醇蕃红（复红）香柏油二甲苯（二）菌种枯草芽孢杆菌大肠杆菌第一大组自制菌种（三）其它物品显微镜擦镜纸载玻片吸水纸盖玻片第9页，共19页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容1.大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、自接菌种（可疑细菌）革兰氏染色。

涂片、干燥、固定——结晶紫初染1分钟，水洗—碘液（媒染）冲去残水并覆盖1分钟，水洗——95%的乙醇脱色30秒，水洗——蕃红复染1-2分钟，水洗——干燥，油镜观察前进第10页，共19页，2023年，2月20日，星期六2.观察大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、自接菌种的细胞形态，画图。红色G－菌红色G+菌第11页，共19页，2023年，2月20日，星期六涂片在载玻片的一角贴上标签纸，写上菌株的名称。在中间滴一滴生理盐水，用无菌环，无菌操作分别由枯草芽孢杆菌、大肠杆菌，自制平板上挑取适量的菌苔，将沾有菌苔的接种环置于载玻片上的生理盐水中涂抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。若是液体培养物图片，可用接种环蘸取1-2环直接涂于载玻片上。第12页，共19页，2023年，2月20日，星期六涂片活跃生长期的幼培养物老龄培养物结构松弛，G+——G-涂片不可过厚，以免脱色不全，造成假阳性，也妨碍观察菌体的形态第13页，共19页，2023年，2月20日，星期六干燥、固定先用吸水纸吸去部分水珠，菌面朝上，用酒精灯的外焰部分干燥。以手背面不感觉烫，看不到明显的液体为宜。第14页，共19页，2023年，2月20日，星期六初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1-2min钟后倾去染液，水洗至流出水无色。媒染：先用卢戈氏碘冲去水迹，再用碘液覆盖1min倾去碘液，水洗至流出水无色。第15页，共19页，2023年，2月20日，星期六脱色将玻片上残留水用吸水纸吸去，用95%乙醇脱色30s。脱色不足：阴性菌误染成阳性菌脱色过度：阳性菌误染成阴性菌第16页，共19页，2023年，2月20日，星期六油镜观察1)转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。慢慢转动粗调螺旋，使载物台上升，并及时从侧面注视使物镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。

2)左眼看目镜，微微转动粗调螺旋，下降载物台(注意：此时只准下降载物台，不能向上调动)，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。

3)如果镜头已离开油滴又尚未发现标本时，可重新按上述步骤操作直到看清物象为止。第17页，共19页，2023年，2月20日，星期六五、实验结果和思考题1.绘出油镜下观察的三种菌株的