疟疾血检技术培训专家讲座

全球基金疟疾项目

镜检技术培训（二）户县疾病预防控制中心年3月28日疟疾血检技术培训第1页疟原虫检验技术

采集血样血片制作血片染色疟原虫镜检疟疾血检技术培训第2页采集血样采血部位：耳垂或无名指，取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针快速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒米大小,薄血膜血量为厚血膜二分之一或1/3。疟疾血检技术培训第3页厚血膜：用推片一角，取血一小滴（约4－4.5微升），置于平置载玻片上，由里向外一个方向旋转，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。薄血膜：以推片一端中部取血一小滴，使血滴与载玻片接触，血液沿推片边缘向两侧展开，将推片与载玻片保持300-450，均匀而快速适当地用力向前推成舌形薄血膜。血片制作（一）厚血膜薄血膜疟疾血检技术培训第4页血片制作（二）标准疟疾厚薄血膜片：把载玻片分成六等份，把厚血膜涂在从右到左第三格中央，薄血膜涂在第四格前缘至第六格中部，第一、二格备贴标签编号用。厚、薄血膜间用蜡笔划线分开厚血膜血量不宜过多或过少薄血膜平整,无皱折和空泡.显微镜下红细胞单层排列疟疾血检技术培训第5页血片制作（三）不一样血片涂布法：标准血片门诊发烧病人血片居民普查血片疟疾血检技术培训第6页血片染色（一）染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法

WHO推荐使用吉氏染色法疟疾血检技术培训第7页血片染色（二）吉氏原液配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(纯)

50ml甲醇

(纯)

50ml把吉氏粉置于研钵中，加少许甘油充分研磨,

然后边加边磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，重复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，充分摇匀，置于65℃温箱中24小时，或室温阴暗处1-2周后过滤，备用。整个染色液配制时间不能少于5个小时时间越长染色效果越好。疟疾血检技术培训第8页血片染色（三）吉氏染液配制：把吉氏原液用PH7.0±0.2缓冲液稀释，百分比约为1:15～20，稀释后方可用于厚薄血片染色。吸收原液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果.疟疾血检技术培训第9页血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸馏水进行溶血，到血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：①薄血膜固定时，甲醇不可触碰未溶血厚血膜。

②厚血膜溶血时，蒸馏水不可触碰薄血膜。疟疾血检技术培训第10页血片染色（五）血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定厚、薄血膜上，室温染色30分钟，用缓冲液冲洗洁净。血片晾干后镜检。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加缓冲液5ml，混匀后，滴加于厚、薄血膜上染色5分钟，用缓冲液冲洗，晾干后镜检。疟疾血检技术培训第11页血片染色（六）3.成批血片染色：将已固定血片插入染色缸，加入吉氏染液浸没血片，对厚、薄血膜同时染色30分钟。注意：假如吉氏染液是从市场上购置成品试剂，请严格按照说明书操作。疟疾血检技术培训第12页血片染色（七）血片染色结果：染色质量好血片：显微镜下核呈红色，胞浆呈蓝色，薄血膜平整，红细胞单层排列。假如血片偏红,说明染液偏酸性假如血片偏蓝,说明染液偏碱性

吉氏染色血片外观疟疾血检技术培训第13页血片染色（八）血片制作与染色注意事项：１、载玻片必须清洁无油污；２、固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜；３、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面进行溶血，以防厚血膜染色后颜色发黑，影响镜检；４、血片充分干燥后方可染色，预防冲洗染液时厚血膜脱落。5、未染色血膜放置时间夏天不宜超出48小时，冬天不宜超出72小时，不然厚血膜会自然固定，影响镜检。疟疾血检技术培训第14页疟原虫镜检（一）

厚血膜

薄血膜

优点血量多，面积小，原虫较为集中。原虫检出率高血量少，面积大，干燥快红细胞完整，原虫形态极少变形。用于观察原虫形态与判别虫种。缺点原虫在干燥过程中皱缩，红细胞消失，原虫变形较大，原虫判定困难血量比厚血膜少许多，但面积是厚血膜8-10倍。检验费时，原虫检出率较低用途用于疟疾病人检验虫种、虫期判定及初学者教学标本疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点疟疾血检技术培训第15页显微镜下厚血膜读片次序疟原虫镜检（二）读片次序：显微镜镜下按由上而下、之字形次序读片疟疾血检技术培训第16页疟原虫镜检（三）镜检疟原虫结果判断：阴性血片：①检验全部厚血膜视野未查见疟原虫；②最少检验100个厚血膜视野未查见疟原虫（临床病人）。阳性血片：检出各期疟原虫（环状体、裂殖体、配子体）。混合感染：在一个血膜上有2种以上疟原虫感染称为混合感染，较常见是间日疟原虫与恶性疟原虫混合。镜检判断P.v+P.f混合感染：必须是看到P.v各期原虫和P.f配子体。疟疾血检技术培训第17页间日疟和恶性疟判定关键点疟原虫镜检（四）疟疾血检技术培训第18页疟原虫镜检（五）疟原虫形态特征：间日疟（P.vivax）判定关键点红细胞通常涨大薛氏点显著成熟环状体粗大滋养体胞浆有阿米巴样伪足血片中可见各期原虫形态成熟裂殖体约含12-24个裂殖子

疟疾血检技术培训第19页疟原虫镜检（六）疟原虫形态特征：恶性疟（P.falciparum）判定关键点：红细胞不涨大小滋养体（环状体）纤细,常有多重感染，环状体内可有2个核

环状体可贴在红细胞边缘

血片中没有其它发育期大滋养体配子体呈新月形或腊肠形成熟裂殖体约含16-32个裂殖子可出现茂氏点疟疾血检技术培训第20页镜检示教以下血片采自现症病例疟原虫镜检（七）疟疾血检技术培训第21页疟疾血检技术培训第22页疟疾血检技术培训第23页间日疟环状体疟疾血检技术培训第24页2.Intermittentfever;arrivedfromIndia2monthsago.间日疟滋养体疟疾血检技术培训第25页3.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.America,AsiaandAfrica.Generalmalaise.恶性疟雄配子体疟疾血检技术培训第26页4.Unspecifiedoverseastravel.Presentedwithtemperature38.4C三日疟裂殖体疟疾血检技术培训第27页5.MalerecentlyreturnedtoAustraliaafterbackpackingthroughAsia.Historyofflulikesymptoms.白细胞疟疾血检技术培训第28页6."NewAustralian"previouslyfromMalaysia.Intermittenttemperaturesandheadaches.白细胞疟疾血检技术培训第29页7.Achesandpains,withfever.?GlandularFever,?malaria.间日疟裂殖体疟疾血检技术培训第30页恶性疟环状体疟疾血检技术培训第31页18.RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.间日疟裂殖体疟疾血检技术培训第32页19.PatienthasbeenholidayingintheDominicanRepublic,nowfeverish.恶性疟雄配子体疟疾血检技术培训第33页21.AmemberoftheUNforcesinEastTimor.Presentedwithhightemperature.恶性疟雌雄配子体疟疾血检技术培训第34页间日疟裂殖体疟疾血检技术培训第35页恶性疟雌配子体疟疾血检技术培训第36页间日疟裂殖体疟疾血检技术培训第37页血检质量考评

试验室条件血检工作要求考评标准疟疾血检技术培训第38页试验室条件人员：各单位最少有1名专职或兼职经过疟原虫检验技术培训人员。熟悉疟疾血片制作，疟原虫镜下特征，能负担疟疾血检工作。环境：试验室相对独立，可做疟疾血检。设备：显微镜、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。试剂：吉氏染液、甲醇、二甲苯、镜油。疟疾血检技术培训第39页血检工作要求制订《疟原虫镜检试验室管理制度》、《疟原虫镜检操作规程》对血检对象进行认真登记，填写《疟原虫镜检记录表》，按接样次序编号。编号：医院名称代码＋序号。保留镜检过全部血片，以备上级抽样复查，经上一级机构同意后方可清洗。阳性血片须专员管理。血液标本有潜在生物危害，在试验室血检工作、标本保留中应严格恪守《试验室生物安全通用要求》。疟疾血检技术培训第40页县（市/区）全球基金疟疾项目发烧病人疟原虫血检记录表血检单位：、序号姓名年纪性别居住地址外出史及地点职业发病日期体温（oC)临床初诊血检日期血检方法血检结果检验人署名血样编号镜检RDT阴性PfPvPmPo混合1234累计疟疾血检技术培训第41页疟原虫血检考评标准(1)项目检验内容质量标准考评分值好分值中分值差分值血片制作厚血膜(25分）血量（5分）4～5цl5略多或略少3过多或过少1位置（5分）玻片右1/35稍偏右4偏右过多3直径（5分）0.8～1.0cm50.7～0.8或1.0～1.2cm3<0.7或>1.2cm1外观(10分)圆形厚膜均匀,边缘整齐10圆形稍不均不整齐8厚薄不匀影响着色5薄血膜(25分）血量（5分）1～1.5цl5略多或略少3过多或过少1位置（5分）直径（5分）外观(10分）玻片1/2～1/3处5稍偏右或偏左4偏右或偏左过多32.5～2.0cm5稍大或稍小3过多或过少1舌状厚薄均匀10舌状稍不均5厚薄不匀呈波浪型3考评标准疟疾血检技术培训第42页疟原虫血检考评标准（2）项目检验内容质量标准考评分值好分值中分值差分值血片染色质量(15分)外观（5分）蓝紫色5深蓝色3红色或灰白色2镜下(10分)白细胞、疟原虫胞浆蓝色，核红色10染色过深，原虫胞浆与核均呈深蓝色8染色过浅，胞浆蓝色不易显见，核淡红5血片清洁度(10分)外观（5分）光洁无油灰5稍有油污2油灰粘连2镜下（5分）无沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有杂菌2疟疾血检技术培训第43页疟原虫血检考评标准（3）项目检验内容使用标准扣分标准考评分值显微镜使用（25分）使用前（10分）显微镜洁净，有绸布遮盖，接物镜不与聚光器对接显微镜稍有灰（-2分），无绸布遮盖