亲脂性物质分析半制备课件

中药与天然产物活性成分的分离纯化——技术与策略生命科学与生物药物的发展基因组蛋白质组次生代谢产物组DNARNA蛋白质（酶）次生代谢产物基因工程药物中药活性成分天然产物活性成分色谱中药与天然产物研究存在的问题化学成分复杂有效成分种类很多：生物碱、甙、黄酮、醌、多酚、内脂、香豆素、萜、有机酸、寡糖、多糖、环肽、甚至蛋白质数种有效成分并存，并一起作用合成前体相同，配基链长不等手性特征差异含量很低中药与天然产物分离纯化技术提取溶剂分配超临界萃取气相色谱液相柱色谱高速逆流色谱分离操作分析或半制备，亲脂性物质分析，低沸点物质分析、制备、生产，亲水性、亲脂性物质分析、半制备，亲脂性物质New色谱技术的应用天然产物色谱纯化理论滞后研究方法替代生产工艺的模式工艺技术单一

正相层析（硅胶和大孔树脂）反相层析（C柱）、配合结晶技术存在的问题需要全面发展色谱技术

大孔吸附树脂离子交换色谱分子排阻色谱亲和色谱

反相色谱高速逆流色谱分离纯化策略涉及分离技术选择的因素

提取的方法提取物或混合物样品的复杂程度样品的制备样品的极性样品的稳定性样品的溶解度样品量分离技术的互补性配合各种色谱技术是解决问题的最佳途径分离纯化策略——亲水性化合物大孔吸附树脂离子交换色谱亲水性分子排阻色谱亲和色谱分离纯化策略——亲水性化合物大孔吸附树脂快速、高效、成本低适宜于单味药某类成分某极性段的单向提取不方便、不适于工艺放大：以聚苯乙烯为骨架，含有小分子致孔剂、交联剂等，在提取物中有较大残留。吸附量下降至30％以上则不宜于再使用。主要用于含生物碱、皂苷、蒽醌、水溶性酚性物质等中药单方或复方。分离纯化策略——亲水性化合物离子交换色谱典型的高选择性层析，分辨率高，载量大，工艺控制简单，规模容易放大具有显著的浓缩效果，能够从含量低的大量样品中捕捉目标，适合于初步纯化再生能力强多糖、肽类、皂甙等具有生物活性物质，需要温和分离纯化条件生物酸、生物碱等较强极性，对离子交换色谱选择性高的物质阴离子交换阳离子交换pkabindingtocationexchangerbindingtoanionexchanger+-netchargepH102分离纯化策略——亲水性化合物离子交换色谱R-COOH,pKa=5.0pH<5.0,R-COOHpH>5.0,R-COO-R-NH2,pKa=8.0pH<8.0,R-NH3+pH>8.0,R-NH2分离纯化策略——亲水性化合物离子交换树脂有机酸糖糖醇甙类甾类、萜类及多环化合物配糖体小肽氨基酸核苷酸阳离子交换——可以直接从中药的稀酸浸提液中捕捉生物碱从黄连中分离盐酸小檗碱从苦参中分离苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱从虫草中分离虫草素分离纯化策略——亲水性化合物离子交换色谱阴离子交换——可以直接从中药的稀碱浸提液中捕捉生物酸、皂甙、内酯、多酚、醇类等

从葛根中分离葛根素从三七中分离三七素从柴胡中分离柴胡皂甙以及甘草酸、阿魏酸、咖啡酸、阿魏酸等的分离UNOsphereSMacroPrepHighSMacroPrepCMUnoSUNOsphereQMacroPrepHighQMacroPrepDEAEUnoQ

粉防己碱防己诺林碱阳离子交换适合生物碱的纯化分离纯化策略——亲水性化合物离子交换色谱分离纯化策略——亲水性化合物亲水性分子排阻色谱原理分离纯化策略——亲水性化合物亲水性分子排阻色谱按分子量大小分离去除高分子量成分和聚合物小分子较高分辨率分离1001,00010,000100,000Bio-GelP2Bio-GelP4Bio-GelP6Bio-GelP10Bio-GelP30Bio-GelP60Bio-GelP1001,8008004,0001,0006,0001,50020,0002,50040,0003,00060,0005,000100,000100快速分离中小分子有机酸、碱、皂甙、内酯、多酚、醇类等分离纯化策略——亲水性化合物亲和色谱——Affi-Gel硼胶对具有邻/顺式羟基的化合物具有高亲和力，可高效分离糖类，核苷酸，核苷，儿茶酚胺等化合物配基结构亲和机理A、分离环GMP和GMPB、分离各种核苷、碱基OHOHRR分离纯化策略——亲脂性化合物亲脂性分子排阻色谱硅胶反相色谱高速逆流色谱分离纯化策略——亲脂性化合物原理高分辨率亲脂性分子排阻色谱Bio-BeadsS-X介质——

多孔的聚苯乙烯二乙烯微球体Bio-BeadsS-X1Bio-BeadsS-X3600Bio-Beads

S-X81,000Bio-Beads

S-X12400分离纯化策略——亲脂性化合物高分辨率亲脂性分子排阻色谱2,00014,000高分辨率，快速纯化酯类、芳香族，多环、杂环化合物介质可兼容苯、甲苯、二甲苯、四氯化碳、二甲基甲酰胺、酮、二氯甲烷、二氯代苯、全氯乙烯等有机溶剂分离纯化策略——亲脂性化合物1、三硬脂酸甘油酯，8912、三肉豆蔻酸甘油酯，7293、三月桂酸甘油酯，6454、三辛酸甘油酯，4775、三己酸甘油酯，3936、十六烷，2267、十一烷，156Bio-BeadsS-X8分离效果高分辨率亲脂性分子排阻色谱——Bio-BeadsS-X介质分离纯化策略——亲脂性化合物硅胶反相色谱C4：Hi-PoreRP304C18：Hi-PoreRP318分辨率高，为分析首选对样品要求较高高反压，难装填，不适于放大分离纯化新技术——高速逆流色谱（HSCCC）原理高速逆流色谱是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。高速逆流色谱(HSCCC)HighSpeedCountercurrentChromatography

基于萃取原理的一种液液分配分离技术使萃取过程在封闭的环境中进行实现自动化过程分离纯化新技术——高速逆流色谱（HSCCC）高速逆流色谱(HSCCC)：设备HSCCCDuoFlow分离纯化新技术——高速逆流色谱（HSCCC）高速逆流色谱(HSCCC)应用：更适合亲脂性物质，手性分子等条件：螺旋速度溶剂体系的选择成功的案例已从数十种常用中草药中分离纯化出高纯度的活性成分单体上百种，其中包括银杏黄酮苷元异鼠李素和山柰酚、何首乌二苯乙烯苷、葛根素、紫杉醇及其多种类似物、三七苷和三七素、淫羊藿苷、白藜芦醇和白藜芦醇苷、丹参酮、苦参、生物碱、羌活醇、大黄蒽醌类衍生物、沙棘黄酮、强抗氧化物番素、茶叶中的单体儿茶素EGCG、ECG、GCG等等。HSCCC分离茶多酚粗品1、3、4为未知组分，2为EGCG