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文档简介

实验九法鉴定人类性别第1页，共11页，2023年，2月20日，星期六实验原理PCR（聚合酶链式反应）是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。1985年，美国PE公司KaryMullis（1993年诺贝尔化学奖）PCR的过程及参数设置：①变性②退火③延伸PCR的主要成分：①模板：双链或单链DNA分子②引物③四种dNTP④TaqDNA聚合酶⑤反应缓冲液：Tris.Cl、KCl、Mg2+DYZ基因位于Y染色体长臂，参与精子的生成。第2页，共11页，2023年，2月20日，星期六实验目的1、了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术2、应用PCR方法进行人类性别的鉴定第3页，共11页，2023年，2月20日，星期六实验材料人体毛囊细胞。第4页，共11页，2023年，2月20日，星期六实验设备与药品1、设备：PCR仪、高速离心机、电泳仪及电泳槽、移液器各型枪头及离心管、凝聚成像系统等。2、药品：PCR各成分、1.5％琼脂糖、1×TAE、溴酚蓝、DNA染料、DNAmark等。第5页，共11页，2023年，2月20日，星期六实验步骤一、DNA模板准备

取一支1.5ml的EP管，加入50ulddH2O；取两根带毛囊的头发，将毛囊端浸在ddH2O中，盖上EP管盖；100℃煮沸10min后，立即转入0℃冷藏10min；12000离心5min，得上清液放置。第6页，共11页，2023年，2月20日，星期六二、PCR扩增体系（50ul体系）

5ul模板DNA32.6ulddH2O 5ul10×PCRBuffer2ul25mmol/LMgCl2 2ul引物Y3 2ul引物Y4 1uldNTPs0.4ulTaqDNA聚合酶（5U/ul）45×9

293.4ul45ul18ul18ul18ul9ul50ul第7页，共11页，2023年，2月20日，星期六三、扩增

放入PCR仪，设定扩增参数：（1）94℃预变性3min；（2）94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min；35个循环（3）72℃延伸8min；（4）4℃保存。第8页，共11页，2023年，2月20日，星期六四、电泳检测取10ul扩增产物，加入溴酚蓝3ul，在1×TAE电泳缓冲液中，用1.5％琼脂糖电泳分析（100V，45min），电泳后在成像系统下观察照相，检查反应产物及长度。第9页，共11页，2023年，2月20日，

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