实验二血涂片及染色

实验二血涂片及染色第1页，共21页，2023年，2月20日，星期六【目的】掌握血涂片的制备和染色。【原理】把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的细胞种类及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料的结合能力不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。【器材】载玻片、推片、洗耳球、显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁液。【标本】EDTA，静脉血。第2页，共21页，2023年，2月20日，星期六瑞氏染色法【试剂】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸盐缓冲液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。第3页，共21页，2023年，2月20日，星期六【操作】(1)采血(2)推片，推片与载片夹角30~45°平稳地向前移动，血膜应呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。第4页，共21页，2023年，2月20日，星期六第5页，共21页，2023年，2月20日，星期六(3)干燥:晃动。37℃温箱中促干。(4)染色:将玻片平置于染色架上，滴加(Ⅰ液)3～5滴，约0.5～lmin后，滴加等量缓冲液(Ⅱ液)，摇动玻片混匀。(5)冲洗:5-10min后用流水冲去染液，待干。(6)观察结果:将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。第6页，共21页，2023年，2月20日，星期六一张良好血涂片的要求：

厚薄适宜头体尾明显细胞分布均匀边缘整齐两端和两边留有空隙第7页，共21页，2023年，2月20日，星期六标准血涂片第8页，共21页，2023年，2月20日，星期六血涂片分布不均主要原因：推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁

第9页，共21页，2023年，2月20日，星期六四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分：

①

美蓝（亚甲蓝）：M＋碱性染料，易氧化称为天青。

②伊红：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定细胞形态；蛋白质呈颗粒或网状，增加细胞与染料的接触。H2O甲醇第10页，共21页，2023年，2月20日，星期六四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美蓝（亚甲蓝）：M＋碱性染料

②伊红（曙红）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定细胞形态；蛋白质呈颗粒或网状，增加细胞与染料的接触。H2O甲醇第11页，共21页，2023年，2月20日，星期六

pH的影响：

H＋：碱性染料亲和力下降，增强伊红着色，出现红染OH－：酸性染料亲和力下降，增强美蓝着色，出现蓝染PBS缓冲液：pH6.4－6.8以维持恒定的pH环境第12页，共21页，2023年，2月20日，星期六3.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定细胞0.5~1min

②

染色：加1~2倍PBS缓冲液，混匀染5~10min

③

冲洗：用流水冲去染液或加PBS缓冲液冲洗，待干。第13页，共21页，2023年，2月20日，星期六4.染色结果

①外观：淡紫红色

②镜下：

红细胞――粉红色白细胞――胞核、胞浆及颗粒显示特有的染色特征第14页，共21页，2023年，2月20日，星期六第15页，共21页，2023年，2月20日，星期六第16页，共21页，2023年，2月20日，星期六5.注意事项

①血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落；

②染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好；

③染液不能过少，以防蒸发沉淀；第17页，共21页，2023年，2月20日，星期六④冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长；⑤染色过淡时可复染，复染时先将染料稀释好；

⑥染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色；

⑦分类最佳区域为体、尾交界处。第18页，共21页，2023年，2月20日，星期六4.影响瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置时间；B.溶液的酸碱度；C