实验脯氨酸含量电导率的测定

实验脯氨酸含量电导率的测定第1页，共15页，2023年，2月20日，星期六植物对胁迫的响应机制渗透调节（脯氨酸、甘氨酸甜菜碱、可溶性糖）活性氧代谢（抗氧化酶、抗氧化小分子）胁迫蛋白（热激蛋白、抗冻蛋白等）离子平衡和区域化（盐胁迫）水通道蛋白（盐胁迫）类黄酮、苯丙氨酸（紫外胁迫）第2页，共15页，2023年，2月20日，星期六脯氨酸含量的测定第3页，共15页，2023年，2月20日，星期六前言

逆境条件下（干旱、盐碱、热、冷害、冻害）,植物体内脯氨酸（proline,Pro）含量会显著增加，并且积累指数与植物的抗逆性有关，因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。第4页，共15页，2023年，2月20日，星期六

酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm波长下具有最大吸收峰。用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色,再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。实验原理第5页，共15页，2023年，2月20日，星期六材料、仪器及试剂（一）、实验材料小麦幼苗：对照、100mM、200mMNaCl处理48h；5%、15%PEG-6000处理48h（二）、仪器设备天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅第6页，共15页，2023年，2月20日，星期六主要试剂1.3%磺基水杨酸；2.冰醋酸；3.甲苯；4.2.5%酸性茚三酮溶液（60ml冰醋酸、16.4ml磷酸加蒸馏水定容至100ml，再加入2.5g茚三酮，溶解后避光保存）；5.脯氨酸标准母液：精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入500ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度50μg/ml。第7页，共15页，2023年，2月20日，星期六方法及步骤（一）样品的测定

1．称取不同处理的小麦叶片各0.5g，于2.5ml3%磺基水杨酸试管中，沸水浴中提取10min。

2．吸取1ml上清于另一试管中，加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml2.5％的酸性茚三酮，混合液于沸水中显色30min。第8页，共15页，2023年，2月20日，星期六3.冷却后加入4ml甲苯，摇荡30S，萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在520nm比色。

4.用0.5-5µg/mlL-脯氨酸作标准曲线。第9页，共15页，2023年，2月20日，星期六（二）标准曲线的绘制1．标准液中脯氨酸浓度50µg/ml。2．取6个50ml容量瓶，分别加入脯氨酸原液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，用蒸馏水定容至刻度并摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0µg/ml。第10页，共15页，2023年，2月20日，星期六3．分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml2.5％的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。4．冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。5．轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。第11页，共15页，2023年，2月20日，星期六五、结果计算根据标准曲线计算出脯氨酸的浓度,然后换算出样品中脯氨酸的含量（µg脯氨酸/gFW）。脯氨酸含量（µg.g-1）＝c×(v／a)／wC为由标准曲线查得脯氨酸含量µg；V为提取液总体积ml;a为测定液体积ml；W为样品质量g第12页，共15页，2023年，2月20日，星期六逆境胁迫对植物质膜透性的影响

电导率法第13页，共15页，2023年，2月20日，星期六原理植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。第14页，共15页，2023年，2月20日，星期六实验步骤1、取0.2g对照和盐或PEG6000处理的小麦叶片，切成约1cm小段；2、用双蒸水冲洗3遍以除去表面粘附的电解质；3、加10ml双蒸水，25℃振荡温育1小时，期间经常摇动，测定此时的电导率为C1；4、将盛有根的试管100℃煮沸15min，冷却到室温后，测定此时的电导率为C2；5