BDFACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤corr-ZYH-

BDFACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤一开1）先开净化交流稳压电源，其次打开110V稳输出电源，再次打开流式胞仪，最后打开计算机。2）向拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，先将减阀（红色箭头所示）方向调在VENT位（箭头向），再加入超纯水，保持水位在鞘液桶的3/4左，加好后拧紧桶盖并将减压阀方向调在RUN位置。二开软、辑验件1）屏幕下点击（第四个图标）启动软件桌面会出现件，可点击实验文件的左上角的放大钮（绿色），将实验文件窗口放大。2）工具板点击散点图图示。在实验文件的空白区点击，拖曳对角线至适当大小，然后放开鼠标。出现散点图对话方框（当所要编辑的图窗口被选中时，会在其四角出现四个小黑块）。3）出现的点图对话方框中点击PlotSource选择AcquisitionandAnalysis(收取、分析)，确认X和Y轴数设为FSC-H1024SSC-H10244）屏幕上Plots菜中选择DotPlot功，可复制一个同样大小的散点图，在出现的对话方框内选择X：FL1-H1024；如果是双标Y轴择FL2-H1024(根据实验检测样品确定所选通道，本步骤选FL1/FL2来明，如果是单标Y轴择。点击OK，FL1/FL2的点图出现。完成可将重制图移至原图右方。说：点图Dotplot）又称二维散点图是流式分析最常用图谱，它可以显示两个独立

参数的相互关系。在图中，横坐标X和纵坐标Y参数分别设为FSC-H1024SSC-H1024双荧光标记时，第二图XY参数分别设为、FL2-H1024，X轴为荧光强的相对值，单位是道数Y轴通常表示荧光或散射强度的相对值。仪器使用者可因实验需求来修改所有图谱中显示之参数。修改动作为轻击图谱上X和Y轴数，并依需要选择之FSC细大小，SSC：细胞折射率FL1：FITC绿荧光，FL2：PE橙荧光FL3：红色荧光）。5）工具板选择四象限工具，在FL1/FL2散图上拖动Quadrant的心将它设定在（x，y＝（101，10）处，这些象限将指定阴性阳性区域。6）工具板点击直方图图示，在实验文件的空白区点击，拖曳对角线至适当大小，然后放开鼠标。单色荧光只需一个直方图，和第二个散点图一样，横坐标选择FL-1纵坐标默认为Counts；若是双色荧光，需画2直方图，一个横坐标选择FL-1-1024，另一个横坐标选择FL-2-1024；7）上面直图中画出M1，其中M1代表隐性数目（一般标示是10阳性数目（除M1以所有的部分）。

，M2代8）Stats菜中选择QuadrantStats象限统计））步骤中的点图将分为四个象限。三建仪和算之通从Acquire单中选择快键Win+b)，此时会出现AcquisitionControl对方框。四仪设文注：验数据质量，取决于最适化仪器设定文件。仪器设定文件不能在数据收取后再更改，研究人员必须在第一次就使用正确的仪器设定文件。仪器设定文件（Instrumentsettings）含号器高压Detector/Amps，阈值Threshold），荧光补偿（Compensation）等仪器条件的组合。一般而言，仪器设定的序为Detector/Amps--。

1）查现有器条件，从Cytometer单中选择Detectors/Amps。出现Detectors/Amps窗。在Detectors/Amps窗确认FSC与SSC（根据实验样品确定，一般细胞选择，细菌选择）其它FL1-3LOG（对数放大），将其拖至空白区2）Cytometer单中选择Threshold，现Threshold窗在Threshold窗：确认FSC为设阈参数，初步确认预设阈值52将其拖至空白区。3）Cytometer菜中选择，认所有预设数值皆为零。将其拖至空白区。五上品设仪使仪器处于HighRUN，样品管支撑架左，上阴性对照管样品，支撑架回位。确认AcquisitionControl窗中Setup需打叉或打勾即不储存数据，用于仪器设，点击Acquire。1、节FSC/SSC探测（压观察FSC/SSC图变化。压(Voltage)预设为E00可调节AmpGain从1.009.99使要细胞群得以清楚显示（细胞较大，将FSC电设置于E-1；较小细胞，将FSC电压设置于E01）。调节SSC电使要细胞群得以清楚呈现。调节FSC/SSC图原则，在于能得到一独立离散的细胞族群，该细胞群不与其它族群、细胞碎片有重迭现象。调整定位后，点击AcquisitionControl窗中的。2、Gating圈细胞检品中，常含有大小不同、性质相异的细胞群体。我们常用前方散射FSC与侧方散射（SSC的二维位图，即散射图谱ScatterPlot，来圈选出不同细胞群的范围，选择性显示出有意义的细胞群体，如下图圈选白血球之淋巴细胞族群。1）工具板选择多边形的Region，FSC/SSC散图上划淋巴细胞R1区（下图）。分析样品时，区域内细胞应会呈现成红色，可移动或改变形状来圈选有意义的细胞。如果要删除R1区，可以在工具列中点选Gates→Regionlist以鼠标点选，按Delete删除R1域。删除区后，可用绘图工具板，重画R1。

2）选希望Gate的FL1/FL2散图，从Plots菜中选择在出现对话方框内，将NoGate选G1=R1点击OK。3、节FL1、的探测（压1）击AcquisitionControl窗口中的Restart在Detector/Amps窗中调节FL1、FL2的电压，使NegativeControl细群着落在所选直方图或散点图之10--101处2）Threshold窗，适当地提高FSC阈>52以去除碎片或低阶噪音。唯需意不要切掉主要细胞族群。3）击AcquisitionControl窗中的Pause、Abort。移去阴性对照管，我已设定好有意义细胞群之自体荧光，不要再改动Detector/AmpsThreshold等数值。4、节光偿说明：最适化的最后一步是调节光谱重迭（如单荧实验跳此骤如是2色样本，必要时需调节FL2-%FL1，FL1-%FL2若色本，必要时需调节、FL1-%FL2、FL3-%FL2FL2-%FL3的偿）。1）HighRUN换上单染CD3-FITC管。点击AcquisitionControl窗口中的Acquire。调节FL2-%FL1使FITC阳细胞在FL1/FL2点图的右下象限。补偿调节可通过点击来择直接拖动滑标上下移动。调节完毕，点击AcquisitionControl窗口中的Pause。

2）去单染CD3换上单染CD19-PE管点AcquisitionControl窗中的Restart。调节FL1-%FL2使PE+细胞在FL1/FL2散点图的左上象限。调节完毕，点击AcquisitionControl窗中的Pause。3.最后以CD3-FITC/CD19-PE双染样本上机，点击AcquisitionControl窗口中的Restart确定三群细胞工整垂直。当您已完成色荧光之光谱重迭时，点击AcquisitionControl口中的Pause、Abort。4）去样本，换上管让仪器暂且处于Standby状。关闭窗口。您已完成2色光之最适化。六收实数1）定储存胞总数：预设之「储存细胞总数」为。如需修改，从单中选择Acquisition&Storage，并出现的窗口功，确认CollectionCriteria从10000ofAll，再点击OK

2）找档案匣准备储存数据，本机所有数据都贮存在D盘data盘，按实验日期编排。Acquire菜中选择ParameterDescription，现ParameterDescription对方框。点击，在随后出现对话方框，选择YourFolder」新建活页夹，点击此对话方框的Select’YourFolder（一般用实验日期来命名Folder。3）名即将存之文件名：点击ParameterDescription对方框的File，出文件名编辑窗口，输入文件名（根据实验来决定），点击此对话方框的OK4）Optional如有需要，可选择或在P1-P5后空格中输入相关参数。如P1Size,P2：Granularity,P3CD3FITC。输入参数名会存入实验档中，显示在图谱上。5）数器Counters：Acquire单中选择窗会显示样品析速率、与总数进度6）始收集实验数据LOWRUN（根据Counters来调节速度，一般保持在

700-800/Second，将第一管样品放到检测区，在AcquisitionControl窗口中，将Setup改成Setup，此时CellQuest会自动显示YourFolder文件名为资料文件名。点击“Acquire”便可启动样品之分析测定与数据储存。计算机成功地收取足够数据，会自动储存数据文件文件名.001，并会“嘟”声告知，CellQuest会自动升幂附加档名成文件名002。等待下一指示。7）上超纯，清洗管路，直到Counters持显示0/Second30s(为10-20s)，换上下一管样品，点击Acquire”启动样品之分析测定与数据储存。可继续分析直到所有检品都分析完毕。七退软并机1）检分析完毕后，记SaveAs，储存实验文编辑。

得从屏幕上方File指栏选择件，以备日后使用，不需每次重新

2）品分析毕后，用鼠标从屏幕上方Acquire指栏中，选取DisconnecttoCytometer以断绝计算机与仪器间之联机。之后如不分析数据，您可退出软件File”“Quit”(遇有选项永远选择Don”，进行关机程序。3）2ml10漂白水取