高效液相色谱法培训课件

高效液相色谱法培训课件1第1页，共99页，2023年，2月20日，星期三高效液相色谱法（HPLC）是60年代末以经典液相色谱法为基础，引入了气相色谱的理论与实验方法，流动相用高压泵输送，采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的分离分析方法。与气相色谱法相比具有：适用范围广，样品预处理简单，分离效率高，流动相选择范围广，检测方法多为非破坏性的，流出组分可回收等优点。第一节概述第2页，共99页，2023年，2月20日，星期三HPLC液-固吸附液-液分配正相色谱反相色谱一般反相色谱离子对色谱离子抑制色谱离子交换色谱一般离子交换色谱离子色谱氨基酸分析空间排斥色谱凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱假相色谱胶束色谱环糊精色谱亲合色谱，手性色谱，毛细管电泳键合相色谱第3页，共99页，2023年，2月20日，星期三正相色谱（normalphase）流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅胶柱。常用流动相为极性小的有机溶剂。反相色谱（reversedphase）流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有：ODS(C18)，C8，C2。常用流动相为甲醇-水，乙腈-水。第4页，共99页，2023年，2月20日，星期三离子抑制色谱（ionsuppressionchromatography）——调节流动相的pH值，抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解度，改善峰形，以达到分离有机弱酸和弱碱的目的。离子对色谱（ionpairchromatography）——将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物，从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度，改善分离效果，达到分离目的。常用反离子有：季铵盐——用于酸类

烷基磺酸盐——用于碱类第5页，共99页，2023年，2月20日，星期三离子色谱法（ionchromatography）离子色谱是由经典的离子交换色谱发展起来的一种液相色谱技术，利用物质在离子交换柱上迁移的差异而达到分离，用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱，可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。第6页，共99页，2023年，2月20日，星期三空间排斥色谱（stericexclusion）也称凝胶色谱，依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而分离，类似于分子筛作用。在一定分子线团尺寸内，分子越大，保留时间越短。凝胶渗透——以有机溶剂为流动相凝胶过滤——以水溶液为流动相对于相同化学组成的高分子化合物，其分子尺寸大小与分子量成正比，因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。第7页，共99页，2023年，2月20日，星期三胶束色谱(micellarchromatography)表面活性剂在水中超过某一浓度（临界浓度）时，多余的表面活性剂不再溶解，聚集而成胶束（胶粒）。以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系，不是真溶液；流动相中不含有机溶剂。因胶束色谱法的流动相是多相分散体系，在整个色谱体系中又增加了一相，故也被称为假相色谱（pseudophasechromatography）。第8页，共99页，2023年，2月20日，星期三手性色谱(chiralchromatography)用于分离手性药物对映体的一种有效技术，可分为直接法和间接法两类：直接法手性固定相法（chiralstationaryphase;CSP)手性流动相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA)间接法—手性试剂衍生化法

chiralderivatizationreagent,CDR)第9页，共99页，2023年，2月20日，星期三第二节高效液相色谱仪色谱柱进样阀流动相检测器高压泵脱气装置第10页，共99页，2023年，2月20日，星期三高效液相色谱仪组成输液系统进样系统分离系统检测系统数据记录处理系统第11页，共99页，2023年，2月20日，星期三溶剂

色谱泵自动进样器

HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统液相色谱流程图第12页，共99页，2023年，2月20日，星期三第13页，共99页，2023年，2月20日，星期三启动液相色谱仪器的流程开启HPLC系统各个设备的电源打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自检后，打开计算机启动色谱管理软件准备流动相过滤，脱气色谱泵排气用新配制的流动相灌注泵第14页，共99页，2023年，2月20日，星期三液相柱---保留值与pH的关系pH变化值0.1RS变化值1.6色谱柱：ZorbaxStableBondC184.6*250mm,5um流动相：27%甲醇：73%磷酸pH：2.5&2.6温度：50℃流速：1.0mL/min.第15页，共99页，2023年，2月20日，星期三2.流动相类别

按流动相组成分：单组分和多组分按极性分：极性、弱极性、非极性按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱

第16页，共99页，2023年，2月20日，星期三对溶剂的要求水：去离子水自动纯水仪纯净水商品瓶装水溶剂:

色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）试剂:分析纯第17页，共99页，2023年，2月20日，星期三不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。

第18页，共99页，2023年，2月20日，星期三过滤：0.45um或更小孔径滤膜

目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动

过滤与脱气第19页，共99页，2023年，2月20日，星期三第20页，共99页，2023年，2月20日，星期三第21页，共99页，2023年，2月20日，星期三流动相的保存有机溶剂流动相：

室温下密封，避光保存缓冲盐流动相：

当日现配现用：低温下密封保存，一般不超过3天防止微生物生长有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：低温密封保存防止有机相的挥发选用适宜的容器第22页，共99页，2023年，2月20日，星期三流动相的保存有机溶剂流动相：

室温下密封，避光保存缓冲盐流动相：

当日现配现用：低温下密封保存，一般不超过3天防止微生物生长有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：低温密封保存防止有机相的挥发选用适宜的容器第23页，共99页，2023年，2月20日，星期三1．梯度洗脱的特点（1）改善分离,加快分析速度；（2）改善峰形,减少拖尾,有利于痕量组分的检测；（3）增加峰容量；（4）强烈滞留的组分不容易残留在柱上,保持柱性能长期良好；（5）下次分析时,流动相需要一段平衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有差异,可能会引起基线漂移第24页，共99页，2023年，2月20日，星期三2．梯度洗脱的主要条件①A流动相/弱溶剂组成；②B流动相/强溶剂组成；③梯度时间；④梯度曲线：线性、凸型或凹型等。强溶剂

A%time125第25页，共99页，2023年，2月20日，星期三第26页，共99页，2023年，2月20日，星期三梯度：低压混合低压梯度用单泵产生梯度，泵前（低压端）混合对脱气要求高不易调节梯度的滞后体积如设计不当，梯度的

准确性受影响滞后体积（系统

体积）设计合理第27页，共99页，2023年，2月20日，星期三梯度滞后：系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞后(系统)体积滞后(系统)体积溶剂输送系统(泵)检测器进样器色谱柱梯度混合器溶剂输送系统(泵)高压梯度注意∶滞后体积包括进样器、阻尼器、混合器及其管路比例阀检测器进样器ABCD色谱柱溶剂输送系统(泵)低压梯度阻尼器混合器第28页，共99页，2023年，2月20日，星期三梯度滞后大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟例如：滞后体积为2.0ml，流速1.0ml/min实际梯度会比设置值晚2分钟响应，没有问题对微柱色谱影响更大，同上例但流速0.1ml/min实际梯度会比设置值晚20分钟响应，不能接受滞后体积的不同会使方法转换麻烦滞后体积比文献大或小都会使方法不能重现滞后体积的变化会导致梯度重现性不好普通分析型液相色谱的滞后体积为2~4ml第29页，共99页，2023年，2月20日，星期三滞后体积变化的影响设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化滞后体积随反压变化的后果：梯度的准确性不好，造成：方法的适应性不好用静态梯度混合器；固定滞后体积可明显改善梯度特性梯度百分比保留时间梯度曲线好的梯度滞后曲线保留时间梯度百分比不好的梯度滞后曲线固定滞后体积，改善了梯度性能普通的低压梯度系统第30页，共99页，2023年，2月20日，星期三输液泵多用柱塞往复泵，柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体。如此往复运动，将流动相源源不断地输送到色谱柱中。柱塞往复泵属于恒流泵，流量不受柱阻影响，泵压最高为400kg/cm2。这种泵具有清洗容易，更换流动相方便等优点，但脉动性较大是其缺点。目前多采用双泵补偿法来克服这一问题。第31页，共99页，2023年，2月20日，星期三第32页，共99页，2023年，2月20日，星期三避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物，四氯化碳与异丙醇或四氢呋喃的混合物，含强络合剂的溶液等。过滤——用滤膜过滤或垂熔漏斗过滤脱气——采用超声或过滤的方法注意流动相使用前冲洗使用含酸、碱、缓冲液的流动相后，必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！第33页，共99页，2023年，2月20日，星期三第34页，共99页，2023年，2月20日，星期三第35页，共99页，2023年，2月20日，星期三第36页，共99页，2023年，2月20日，星期三进样阀第37页，共99页，2023年，2月20日，星期三1柱泵324定量圈进样孔6废液5废液Inject6柱泵3214定量圈进样孔废液5废液Load第38页，共99页，2023年，2月20日，星期三注意：使用后应清洗！第39页，共99页，2023年，2月20日，星期三进样注意点进样阀的废液出口端高度必须与进样针在同一水平位置，以免虹吸作用，使样品向针筒方向回流，或从废液口流出。使用前后，要用流动相（不含酸碱等缓冲液）或甲醇或水冲洗针孔，用针孔清洗器）。第40页，共99页，2023年，2月20日，星期三进样方法整个定量圈体积进样——为获得好的精密度，进样量应大于定量圈量的2-5倍以上。由于层流影响，需要有过量的样品液来取代管壁上的流动相（见下图）。SampleMobilephase第41页，共99页，2023年，2月20日，星期三例20l定量圈，进样体积不能超过10l。否则，部分样品将会从出口流失。这是因为由于层流的关系，样品流经管中心的速度是平均速度的两倍。进样前应用流动相冲洗进样孔，以除去前一针留下的样品。注射针必须清洗干净。部分定量圈体积进样——当样品量少时，采用部分体积进样，进样量由微量注射器手动控制，要求：不得超过定量圈体积的1/2量第42页，共99页，2023年，2月20日，星期三检测器紫外检测器可变波长检测器光电二极管阵列检测器荧光检测器电化学检测器蒸发光散射示差检测器质谱第43页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱图minH光谱图nmAA-λ曲线(定性)A-t曲线(定量)第44页，共99页，2023年，2月20日，星期三蒸发光散射检测器是通用检测器，适用于无紫外吸收的化合物。原理：组分先引入已通气体（N2,空气）的蒸发室，加热，使流动相蒸发而被除去，样品组分形成气溶胶而产生光散射，测定散射光强度而获得组分的浓度信号。本法中流动相在检测前已蒸发，故梯度洗脱基线稳定。第45页，共99页，2023年，2月20日，星期三组分的气溶胶喷雾蒸发检测N2光源溶剂泵色谱柱流出物注意：流动相必须是挥发性的，不能含缓冲盐，若调节pH可用氨水、醋酸。第46页，共99页，2023年，2月20日，星期三质谱检测器第47页，共99页，2023年，2月20日，星期三UV-VISDADFluRefraElecConducotherMs检测器使用统计第48页，共99页，2023年，2月20日，星期三HPLC检测器应提供的功能对样品有响应并有一个输出信号应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并且所设计的校正技术应该促进这种关系第49页，共99页，2023年，2月20日，星期三理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音宽的线性范围独立于流动相及操作参数的响应对压力、温度及流速等变化不敏感长时间操作的稳定性低死体积非破坏性选择性第50页，共99页，2023年，2月20日，星期三灵敏度：信噪比灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值（S/N）检测限（LOD）：S/N=2~4定量限（LOQ）：S/N=8~10好的信噪比有利于：更好的色谱峰确认更好的定量更好地完成色谱峰纯度/均一性 6:1NS第51页，共99页，2023年，2月20日，星期三吸光度（AbsorbanceUV/Vis）检测目前实验室中最流行的选择多数公司约75%的检测器是吸光度检测器（其中50%是多波长，25%是PDA）测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失吸光度与样品浓度呈线性关系在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大第52页，共99页，2023年，2月20日，星期三吸光度检测器（UV/Vis）－优点这种检测器简单、可靠多数人熟悉并喜欢这种技术可以作梯度实验并且是非破坏性的大多数有机化合物有一定程度的吸光度一般来说灵敏度还可以AU0.000.050.100.15Minutes0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00Parabensat254nm第53页，共99页，2023年，2月20日，星期三吸光度检测器（UV/Vis）－缺点由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用检测器对某些化合物的检测灵敏度不及其他检测器样品中不同化合物的最大吸收波长不同时，需要使用多波长检测，或使用折衷的波长受流动相组成的影响：用截止波长以上至少5～10nm作为工作波长缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响第54页，共99页，2023年，2月20日，星期三背景吸收对紫外检测器噪音的影响UVSpectrumofEluentswith0.1%TFAAgainstHPLCGradeH2OBlankAU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50nm200.00210.00220.00230.00240.00250.00260.00270.00280.00290.00H20with0.1%TFA50%ACNwith0.1%TFA第55页，共99页，2023年，2月20日，星期三溶剂混合的基线噪音色谱条件色谱柱：

C18,

5µm,3.9x150mmat35ºC.流动相：

A:0.1%TFAinWater. B:0.1%TFAinAcetonitrile.梯度：5-40%Bin35min.流速：1.0mL/min.样品：水（10µLinj.vol.）检测：214nm

图1；好的梯度系统

图2；一般的二元梯度系统

图3；一般的四元梯度系统第56页，共99页，2023年，2月20日，星期三为何如此重要？五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有峰。在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。第57页，共99页，2023年，2月20日，星期三基线噪音对积分的影响1.2241.1831.183Caffeine@271nm第58页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱柱色谱柱有柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成，柱长10～30cm，内径2～6mm，以4.6mm的内径最常用。根据键合基团极性不同，化学键合相可分为非极性、中等极性和极性三类。常用色谱柱有：ODS柱、氰基柱、氨基柱等第59页，共99页，2023年，2月20日，星期三非极性键合相表面基团为非极性烃基，如C18

、C8等，主要用于RP色谱。C18是最常用的非极性键合相，将十八烷基氯硅烷与硅胶表面的硅醇基经多步反应而成。R1，R2=H，Cl，CH31（2，3）：1第60页，共99页，2023年，2月20日，星期三根据R1、R2基团，含碳量可分为高碳、中碳、低碳型键合相：高碳R1=R2=CH3

载样量大，吸附性能大；中碳R1=H,≡Si－O－Si(H)－C18H37

R2=Cl≡Si－O低碳R1=R2=Cl∣≡Si－O≡Si－O－≡Si－OSi－C18H37第61页，共99页，2023年，2月20日，星期三中等极性键合相——常见的有醚基键合相，这类键合相根据流动相的极性，可作为正相或反相色谱的固定相，应用较少。极性键合相——可作正相或反相色谱使用氨基键合相：硅胶-氨丙硅烷基[－Si－(CH2)3NH2]氰基键合相：硅胶-氰乙硅烷基[－Si－(CH2)2CN]

键合相色谱pH控制在2-8第62页，共99页，2023年，2月20日，星期三液相色谱的色谱柱第63页，共99页，2023年，2月20日，星期三第64页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱柱的连接Stop_depth长度不合适造成柱前死体积第65页，共99页，2023年，2月20日，星期三锥箍锥度不合适造成渗漏色谱柱的连接第66页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱柱使用与保存所有色谱柱使用缓冲液后必须用柱体积20-30倍的水冲洗色谱柱色谱柱柱体积冲洗体积150×4.6mm2.5ml50ml200×4.6mm3.3ml65ml250×4.6mm4.2ml80ml第67页，共99页，2023年，2月20日，星期三保存色谱柱时用100%甲醇或乙腈，柱两端必须用接头密封。停用数天后最使用时，应先用低流速甲醇冲洗1h左右，然后再换上流动相，否则直接用流动相，柱效会下降，峰形不好。新柱使用前应用甲醇或乙腈冲洗（0.5ml/min）。第68页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱柱失效症状色谱柱压增高峰变宽，拖尾，裂峰塔板数下降，选择性下降，分离度降低保留值减小或增大色谱柱失效的原因进口滤片堵塞吸附了样品杂质柱填充不良，使用久，机械及热冲击造成空洞固定相遭化学侵蚀第69页，共99页，2023年，2月20日，星期三原因压力拖尾塔板数选择性保留值堵塞#####空洞####吸附样品#化学冲击######柱凹陷——出现裂峰现象，填料与色谱柱顶端不齐平，可用相同填料填平凹陷处。压力影响——应避免突然的压力波动与任何的机械与热力冲击，如色谱柱掉在实验台上或骤然改变柱温等。进样过程中转动进样阀太慢引起压力波动，会使色谱峰产生裂隙。第70页，共99页，2023年，2月20日，星期三柱压升高原因强保留样品组分——强吸附组分易聚集在柱进口填料上，严重缩短色谱柱寿命。尤其是生物样品提取物、含油成分等。当严重拖尾峰出现时往往是强保留污染物在柱口处聚集的信号。解决办法使用保护柱可延长分析柱寿命。每天实验后应用强溶剂（例甲醇-水等，至少20-30倍柱体积的量）冲洗色谱柱。并定期进行保养，以低流速的强溶剂较长时间冲洗色谱柱。第71页，共99页，2023年，2月20日，星期三样品纯度差——有微小的颗粒堵塞管路。可用滤膜过滤样品后再进样。样品浓度高——连续进样，造成过载。如果样品吸收度不是太低，使样品浓度在1mg/ml以下较适宜。

流动相中缓冲液浓度过高，有机相比例大——在色谱过程中堵塞管路，析出的盐结晶还磨损泵、进样阀密封圈造成漏液。缓冲液浓度一般控制在20mmol以下较适宜，测定完毕后必须及时用水充分冲洗。第72页，共99页，2023年，2月20日，星期三注意！

一旦柱压升高，应停止测定，用水冲洗数小时或更长时间，待压力下降后再测定，如果不清楚堵在哪一段，则应逐级检查，换泵头上滤芯，保护柱等。第73页，共99页，2023年，2月20日，星期三柱效低的原因频繁更换流动相组成——加速柱效降低。最好一根色谱柱使用的流动相成分和pH值相近，如始终在酸性条件下或碱性条件下工作。色谱柱的选择不合适或使用时间久更换色谱柱（厂家，型号）进样操作不当转动进样阀时应一次转到位，不能过慢或停顿，否则易造成裂峰。第74页，共99页，2023年，2月20日，星期三样品溶剂与流动相成分不匹配样品溶剂与流动相成分不匹配，造成前沿峰或倒峰。如样品用纯甲醇作溶剂，而流动相中甲醇比例很低，这样易出现前沿峰，改变样品溶剂成分或比例，使醇-水比例接近于流动相。前沿峰倒峰第75页，共99页，2023年，2月20日，星期三结果不能重现表现为同一样品溶液连续进样所得峰面积相差大，引起这种情况时，可从以下几方面来查找原因：泵、进样阀、管路漏液——造成峰面积变化。检测器灵敏度改变——如果同一样品两次进样峰面积相差10倍或更大倍数，则最可能的原因是检测器的灵敏度被无意中改变，软件的灵敏度改变不会影响峰面积的积分数值。第76页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱软件积分方式是否一致——尤其是对于色谱峰较复杂的，积分时基线稍有变化将造成峰面积大的变化，如果两峰不是基线分离，则峰切割方式对峰面积有很大影响，有时候采用峰高较峰面积误差小。垂直切割基线切割第77页，共99页，2023年，2月20日，星期三样品溶液的稳定性有些样品在流动相条件下不稳定，放置后会产生杂质峰，应注意。例如有一样品在流动相溶液中不稳定，配制后于不同时间进样，发现在主峰后会产生一杂质峰，该杂峰随时间而迅速增大。将流动相中缓冲液换成水后，样品测定液放置15h后仍稳定。第78页，共99页，2023年，2月20日，星期三HPLC法在药物分析中的应用鉴别采用标准品对照法检查中国药典规定了5种测定方法含量测定中国药典规定了2种定量方法在进行HPLC测定时，中国药典规定要进行系统适用性试验第79页，共99页，2023年，2月20日，星期三系统适用性试验柱效

n=5.54(tR/Wh/2)2分离度

R=拖尾因子

T=重复性取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%2(tR2-tR1)W1+W2W0.05h2d1(R≥1.5)(T=0.95～1.05)其中分离度和重复性是更具实际意义的参数(ChP.2005)第80页，共99页，2023年，2月20日，星期三定量分析方法内标法内标物要求：样品中不含有的组分。保留时间与待测物相近，但分离度R≥1.5。（理化性质相近）有足够的纯度。

第81页，共99页，2023年，2月20日，星期三外标法---标准对照法

C样=A样/A标×C标第82页，共99页，2023年，2月20日，星期三日常维护和常见色谱故障溶剂及样品的准备－－过滤溶剂的目的湿防止固体颗粒损伤仪器或柱头；未经过滤的溶剂或者溶剂瓶中生长微生物，，都会降低溶剂入口过滤头的寿命，并影响泵的性能，一般要求两天过滤一次。注意：过滤水相或有机相应该选用不同的滤膜－－聚四氟乙烯几乎可以过滤所有的溶剂、酸和碱－－尼龙66可以和大多数的有机物、水相容，但是建议不要用于强酸、二氯甲烷和DMF－－纤维素滤膜用于水相83第83页，共99页，2023年，2月20日，星期三溶剂脱气的方法－－氦气脱气－－真空脱气－－回流加热脱气－－超身脱气（最为常用）避免使用的溶剂－－卤化物碱金属溶液及相应的酸溶液－－高浓度的无机酸如硝酸、硫酸－－能形成自由基的试剂及其混合物－－四氯化碳和异丙醇或THF混合液－－含强络合剂的溶液84第84页，共99页，2023年，2月20日，星期三色谱柱的平衡为了确保分析结果的再现性，对于反相柱应使用5～10倍柱体积的流动相平衡色谱柱。注意：新装到系统的色谱柱需要进行初始化。先断开柱子和检测器间的管路，用流动相将色谱柱中的原有流动相或气泡移出色谱柱，然后再将色谱柱和检测器间的管路接好。85第85页，共99页，2023年，2月20日，星期三保护色谱柱过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液柱子不使用时，两端密封注意柱子使用的pH范围不要高压冲洗柱子，不要高温下过长时间的使用硅胶键合相86第86页，共99页，2023年，2月20日，星期三常见色谱故障－基线噪音可能的原因－检测池脏－检测器灯能量下降－由泵引起的脉冲－检测器上的温度效应－检测池中有气泡通过87第87页，共99页，2023年，2月20日，星期三常见色谱