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DB37DetectionandidentificationofwheatyellowmosaicvirusandChinesewheatmosaic山东省质量技术监督局发布小麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒检测技术规程本标准适用于冬小麦叶片组织中小麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病GB/T6682分析实验室用水规格SN/T1666水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通RT-PCR方法和实小麦黄花叶病毒wheatyellowm中国小麦花叶病毒Chinese逆转录-聚合酶链式反应reversetranscriptionpolymerasechainreact小麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒的血清学特性与分子生物学特性是该病毒检测方法的主要依5.1仪器和设备：b)洗板机；）；j)样品冷藏柜（2℃~8℃);m)磁力搅拌器；）；）；b)血清学和分子生物学检测试剂配制见附录A。采集5g～10g。样品采集后，在冷藏条件下（2℃~8℃)运送至实验室。如果样品在2d内检测，可RT-PCR检测及测序验证。阴性对照、阳性对照作相同的），），WYMV-F:5′-CAGAAGGAGGAAGCTCGACT-3′WYMV-R:5′-CGTGCTTGTTTCGCAACTTC-3′CWMV-F:5′-GGCCGTGAAATCTGGTTATCWMV-R:5′-TCTGTTTCTATCTGGCCAGC 8.1.1.2在满足了质量控制要求后，结果原则上可判断如a)样品OD405值/阴性对照OD405值>2，判为阳性；a)检出小麦黄花叶病毒或未检出小麦黄花叶病毒；b)检出中国小麦花叶病毒或未检出中国小麦花叶病毒。A.1间接酶联免疫吸附测定A.1.1包被缓冲液（pH9.6）碳酸钠（Na2CO3）1.59g，碳酸氢钠（NaHCO3）2.93g，溶解于900mA.1.2PBST缓冲液（pH7.4）0.2g，0.5mLTween-20，溶解于900mL蒸馏水中，用盐酸调节pH至7.4，蒸馏水定容至10A.1.3抗体缓冲液）（A.1.4底物稀释缓冲液（pH9.8）二乙醇胺9.7mL，氯化镁（MgCl2）0.01g，溶解于80mL蒸馏水中，用盐酸调节pH至9.8，用蒸馏A.1.5底物溶液（现配先用）A.1.6抗血清A.1.7酶标抗体A.2斑点酶联免疫吸附测定A.2.1PBS磷酸盐缓冲液（pH70.2g，溶解于900mL蒸馏水中，用盐酸调节pH至7.2，蒸馏水定A.2.2PBST缓冲液（pH7.4）0.2g，0.5mLTween-20，溶解于900mL蒸馏水中，用盐酸调节pH至7.4，蒸馏水定容至10A.2.3封闭液A.2.4底物稀释缓冲液（pH9.5）Tris·Cl12.11g，氯化镁（MgCl2）2.38g，氯化钠（NaCl用氢氧化钠调节pH至9.5，用蒸馏水定容A.2.5底物溶液（现配先用）NBT

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