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磷酸苯二钠法测定血清碱性磷酸酶的

碱性磷酸酶是一组在碱性环境中水解磷酸酯的酶类，分子量随不同组织来源不同，广泛分布在人体的骨、肾、肠、血清、胆汁等部位，但以骨骼，牙齿、肾和肝中含量较多，正常人血清中的ALP主要来源于肝，少部分来自骨骼。血清ALP测定可用于肝胆系统及骨骼系统疾病的辅助诊断。是临床常做的酶类检验项目之一。测定ALP的方法主要分为二种，一是测定底物解离下的磷酸根来计算酶活力，如β-甘油磷酸钠法，但存在血清本身有磷酸根及磷酸化的缺点；二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合物，这种方法又可分为：1、酚化合物在显色剂的作用下显色比色测定。2、生成的酚化合物本身在一定的条件下就可显色，如磷酸对硝基酚法。【实验原理】碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色的深浅确定ALP活性。单位定义：100ml血清在37度与底物作用15分钟，产生1mg酚为1个金氏单位。操作步骤：1，校正曲线的制作按表操作加入物(ml)B12345酚标准液0.00.20.40.60.81.0蒸馏水1.10.90.70.50.30.1碳酸盐缓冲液1.01.01.01.01.01.0铁氰化钾溶液3.03.03.03.03.03.0相当于金氏单位01020304050立即混匀，于510nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用”0”号管调零，读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。2，标本的测定按表操作加入物(ml)对照管测定管血清-0.1碳酸盐缓冲液1.01.037度水浴5分钟底物溶液(预温至37度)1.01.0混匀,37度水浴15分钟铁氰化钾溶液3.03.0血清0.1-立即混匀，于510nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。【参考值】成人；3-13金氏单位；儿童：5-28金氏单位【方法评价】磷酸苯二钠法与更早应用的甘油磷酸钠法相比具有较大的进步，如水解速度快，故保温时间较短；灵敏度较高；显色稳定；不需去蛋白，操作简便，快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低，操作比较繁琐，灵敏度低。酶单位不是国际单位，受胆红素和溶血的干扰。【临床意义】1，升高：肝胆疾病。主要见于（1）阻塞性黄疸，急、慢性黄疸性肝炎，肝癌等均可引起血清ALP活力不同程度的升高，其中以癌性梗阻最明显。（2）各种骨骼疾病如佝偻病、纤维性骨病、成骨不全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等，由于骨损伤或病变使骨细胞内高浓度的ALP释放入血，引起血清ALP升

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