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文档简介
磷酸苯二钠法测定血清碱性磷酸酶的
碱性磷酸酶是一组在碱性环境中水解磷酸酯的酶类,分子量随不同组织来源不同,广泛分布在人体的骨、肾、肠、血清、胆汁等部位,但以骨骼,牙齿、肾和肝中含量较多,正常人血清中的ALP主要来源于肝,少部分来自骨骼。血清ALP测定可用于肝胆系统及骨骼系统疾病的辅助诊断。是临床常做的酶类检验项目之一。测定ALP的方法主要分为二种,一是测定底物解离下的磷酸根来计算酶活力,如β-甘油磷酸钠法,但存在血清本身有磷酸根及磷酸化的缺点;二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合物,这种方法又可分为:1、酚化合物在显色剂的作用下显色比色测定。2、生成的酚化合物本身在一定的条件下就可显色,如磷酸对硝基酚法。【实验原理】碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠,使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物,根据红色的深浅确定ALP活性。单位定义:100ml血清在37度与底物作用15分钟,产生1mg酚为1个金氏单位。操作步骤:1,校正曲线的制作按表操作加入物(ml)B12345酚标准液0.00.20.40.60.81.0蒸馏水1.10.90.70.50.30.1碳酸盐缓冲液1.01.01.01.01.01.0铁氰化钾溶液3.03.03.03.03.03.0相当于金氏单位01020304050立即混匀,于510nm波长处比色,比色杯光径为1.0cm,用”0”号管调零,读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标,相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。2,标本的测定按表操作加入物(ml)对照管测定管血清-0.1碳酸盐缓冲液1.01.037度水浴5分钟底物溶液(预温至37度)1.01.0混匀,37度水浴15分钟铁氰化钾溶液3.03.0血清0.1-立即混匀,于510nm波长处比色,比色杯光径为1.0cm,用蒸馏水调零,读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线,得酶活性。【参考值】成人;3-13金氏单位;儿童:5-28金氏单位【方法评价】磷酸苯二钠法与更早应用的甘油磷酸钠法相比具有较大的进步,如水解速度快,故保温时间较短;灵敏度较高;显色稳定;不需去蛋白,操作简便,快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比,准确度、精密度较低,操作比较繁琐,灵敏度低。酶单位不是国际单位,受胆红素和溶血的干扰。【临床意义】1,升高:肝胆疾病。主要见于(1)阻塞性黄疸,急、慢性黄疸性肝炎,肝癌等均可引起血清ALP活力不同程度的升高,其中以癌性梗阻最明显。(2)各种骨骼疾病如佝偻病、纤维性骨病、成骨不全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等,由于骨损伤或病变使骨细胞内高浓度的ALP释放入血,引起血清ALP升
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