单克隆抗体制备技术课件_第1页
单克隆抗体制备技术课件_第2页
单克隆抗体制备技术课件_第3页
单克隆抗体制备技术课件_第4页
单克隆抗体制备技术课件_第5页
已阅读5页，还剩23页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

第六讲单克隆抗体制备技术1（一）单克隆抗体的概念

单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体。1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术，这项技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度准确的新纪元。23

单抗与多抗的不同

项目常规免疫血清抗体McAb抗体产生细胞多克隆性单克隆性抗体的结合力特异性识别多种抗原决定簇特异性识别单一抗原决定簇免疫球蛋白类别及亚类不均一性，质地混杂同一类属，质地纯一特异性与亲和力批与批之间不同特异性高，抗体均一有效抗体含量低高用于常规免疫学实验可用单抗组合应用沉淀反应容易形成一般难形成5表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体67单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备2、骨髓瘤细胞的准备3、细胞融合4、选择性培养5、抗体分泌细胞的筛选6、克隆化过程7、单克隆抗体的制取8致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态抗原接种：方式——体内、体外剂量——0.5-100g

次数——视抗原而定间隔——视抗原而定佐剂——视抗原而定收集时间：末次接种后72h10骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态细胞株保持HGPRT缺陷状态HGPRT：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶11致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心1000rpm10min50%PEG1ml培养液10ml离心1000rpm7min37。C摇动、由慢渐快1min、静止1.5min加入HAT培养液悬浮细胞，置于培养孔内13选择性培养随机融合后的细胞类型HAT选择培养原理14随机融合后的细胞类型细胞组合

HGPRT

生长状态淋巴细胞+骨髓瘤+长期生长淋巴细胞+淋巴细胞+短期生长骨髓瘤+骨髓瘤—不能生长未融合淋巴细胞+短期生长未融合骨髓瘤—不能生长15抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求：多——大量样品一次检测快——迅速取得检测结果准——检测结果可靠性高灵——检测方法灵敏度高常用筛选方法：

ELISA、IFA等17克隆化过程概念：建立单一细胞克隆方法：有限稀释法克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞18有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔19多抗与单抗制剂的比较多抗单抗单抗（血清）（腹水）（培养上清）特异性抗体含量（mg/ml）0.1-10.5-50.005-0.025无关Ig含量（mg/ml）100.5-1—其他血清蛋白大量极少—均一性—++特异性多决定簇单决定簇单决定簇稳定性较好略差略差重复性差好好21单克隆抗体的特性1、理化性状高度均一2、抗原结合性高度特异3、生物活性高度单一22杂交瘤技术制备单抗23单抗的应用

2．在免疫学基础研究方面对抗体结构和氨基酸顺序的分析应用单克隆抗体对淋巴细胞表面标志以及组织细胞组织相容性抗原的分析:用单克隆抗体对淋巴细胞CD抗原进行分析，可以对淋巴细胞进

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论