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文档简介

萃取1、安排定律安排常数安排系数萃取因子2、1〕溶剂萃取:〔或微溶〕的溶剂中的溶解度或安排系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中,经反复屡次萃取,局部化合物提取出来。〔〕操作连续化,速度快,生产周期短;对热敏物质破坏少;承受多级萃取时,溶质浓缩倍数大,纯化度高。〕由于有机溶剂使用量大,对设备和安全要求高。需要各项防火防水措施;〔2〕溶剂萃取会产生乳化现象。2〕双水相萃取原理:当两种分子聚合物之间存在相互排斥作用时,即一种聚合物分子的四周将聚拢同种分子而排斥异种分子,当到达平衡时,即形成分别富含不同聚合物的两相。〔〕强化相际传质;自然分相时间段,传质与平衡过程速度快,回收率高,能耗低;含水量高,在接近生理环境的体系中进展萃取,不易造成生活活性物质失活或变性。易于连续操作,设备简洁,并且可直接与后续提纯工序相连接一般不存在有机溶剂残留问题,对环境污染小。缺点:成相聚合物本钱较高,大多数年度较大,不肯定量掌握,水溶相聚化合物难以挥发,使得需要反萃取,高聚合物回收困难。液膜萃取:原理:是由水溶液或有机溶剂构成的液体薄膜,将与之不相溶的液体分隔开来,是其中一侧中的液体中的溶质选择性透过液膜进入另一侧,从而实现溶质间的分别,做到萃取和反萃取,及目标产物的分别和回收。〔〕集成萃取和反萃取过程;提高分别速度;降低设备投资和操作本钱。〔〕〔2〕影响因素多,难以掌握。反胶团萃取;原理:是利用外表活性剂在有机相中形成的反胶团,从而在有机相内形成分散的亲水性微环境,使生物分子在有机相〔萃取相〕内存在于反胶团的亲水微环境中,消退了微生物分子,特别是蛋白类生物活性物质难溶解在有机相或有机相中发生不行逆变性的现象。1〕选择性能好,分别效果高;可提高萃取速度,与规模化的生产;分别条件温顺,是生物物质有较高的活性收率;分别料液处理简洁,操作便利;流等发生。缺点:其争论历史较短,技术尚不成熟。超临界流体萃取原理:利用超临界流体在临界温度和压力下,其密度近于液体,粘度接近于气体,溶解力量加强等的特别的理化性质,使其在超临界状态下,与其待分别的物料接触,萃取出目的产物,然后通过升温或降压的方法使得目标产物得以分别。〕萃取速度高于液体萃取,特别适用于固态物质的分别和提取;接近常温条件下操作,能耗低于一般的精馏法,适用于热敏感性和易氧化性物质的分别;传热速度快,易于掌握温度;适用于非挥发性物质的分别;压力和温度可成为萃取过程受调整的参数。缺点:该技术是几十年来才进展的一项高技术,技术理论不成熟;其工艺要求较高,有关技术人员有待培育;萃取过程在高压下进展,对设备和整个系统耐压行要求高。吸附分别技术和理论固定床:优点:流体在介质层中根本上呈平推流,反混小。柱效率高。进展。流化床:优点:A、压降小,可处理高粘度或固定颗粒的粗料液;B、不需要特别吸附剂,设备操作简洁;缺点:存在严峻的反混,特别是高径比很小的流化床,使床层理论塔板数降低,吸附剂的利用率降低。膨胀床:优点:A、膨胀床中吸附剂例子的混合程度低,吸附效率高;B、兼有固定床、流化床的优点,流化的固相介质根本可以悬浮在床内的固定位置,流体流淌状态以平推流的方式流经床层,吸附效率高;C、集料液澄清,目标产物浓缩和分别纯化为一体的生物集成分别技术。缺点:A、膨胀床操作比较简单和繁琐,需要肯定的手工掌握,对操作人员的技能和娴熟程度要求较高;B、膨胀床吸附直接处理含有细胞碎片的料液,料液中的核酸、细胞碎片可与介质之间产生相互作用,造成介质颗粒聚拢;C、由于料液含有大量的细胞碎片、脂类、核酸等成分,介质污染严峻,需要严格的清洗,再生操作。移动床:吸附操作中固相连续输入和排出吸附塔与料液形成逆流接触流淌吸附操作。模拟移动床:是一种利用吸附原理进展液体操作的设备,它以逆流连续操作方式,通过交换固定床吸附设备的物料进出口位置,产生相当于吸附剂连续向下移动,而物料连续向上移动的效果。液相色谱理论板模型:相间到达一次平衡。通常将溶质到达一次安排平衡的色谱柱段成为一个理论版,该色谱柱的高度称为理论版当量高度分别度:

又称区分率,是表达两种洗脱曲线相邻的溶质相互分别的程度,表达式为:两个相邻洗脱峰之间的距离和两个峰宽的代数平均值之比。凝胶过滤色谱:〔通常为凝胶过滤介质为固定相,是依据料液中溶质相对分子质量的差异进展分别的液相色谱法。原理:在GFC柱中,相对分子质量大的溶质不能进入凝胶介质,而沿间隙孔隙精彩谱柱,其洗脱体积接近柱体积。凝胶过滤介质:SephadexGSepharose。要求:A、亲水性大,外表介质惰性,即介质与溶质之间不发生任何化学或物理相互作用;BpH值和离子强度范围以及化学试剂中保持稳定,使用寿命长;CD、具有良好的机械强度,允许较高的操作压力〔流速。离子交换色谱:的差异进展溶质分别的洗脱色谱法。疏水性相互作用色谱:原理:组成蛋白质的氨基酸中包括一些疏水性氨基酸基团,这些基团大局部处于蛋白质的内部,但有局部疏水基团暴漏于蛋白质外表,在高离子强度下,蛋白质外表的水化层被破坏,更多疏水性局部暴漏在外,这些暴漏在外面的疏水性基团与介质上的弱疏水性基团发生疏水性作用,被固定相吸附,在低离子强度下,这种吸附作用减小,蛋白质从固定相中脱落下来。特点:A、在高盐浓度下疏水性作用较大,HIC可将直接分别盐析后的蛋白质溶液;B、可通过调整疏水性配基链长和密度调整HIC的吸附力;C、吸附剂种类多,选择余地大。色谱聚焦:原理:利用在较宽pH值范围内具有缓冲作用的多缓冲离子交换剂为固定相,同时利用在较宽pH值范围内具有缓冲作用的多缓冲剂为流淌相,所以当相色谱柱输入pHpH值会缓慢地转变,在轴向形成连续的pH梯度,使料液中溶质依据个自的等电点或者吸附或者脱附,主次向下移动,彼此之间得到分别。特点:A0.02的蛋白质;B、具有浓缩溶质作用;C反相色谱:溶质极性〔疏水性〕的差异进展分别纯化的洗脱色谱法。特点:A、反相介质性能稳定,分别效果高;B、应用广泛,可用于分别蛋白质,肽,氨基酸,多糖等;C置换色谱:合位点额亲和力比料液中各组分都要高组分区带。特点:A、置换列中各溶质区带的边界陡直,区分率高;BC、各区带严密相连,色谱柱利用率高,流淌相用量少;D、可以实现多个目标产物的分别纯化,适用于含多个目标产物的物料;E亲和色谱生物亲合作用:生物分子能够识别区分构造和性质格外相近的其他分子种分子相结合,生物分子间的这种特异性相互作用称为生物亲合作用。生物亲和作用的机理:蛋白质的立体构造中含有某些参与亲和作用的部位者该蛋白质的凸起部位恰好能够进入与其发生亲和作用的分子的凹陷部位氢键,疏水性相互作用,陪未见,弱共价键等。亲和吸附介质。操作包括进料、杂质清洗、目标产物洗脱、色谱柱再生。原理:含有目标产物的料液连续通入色谱柱,直至目标产物在色谱柱出口穿透为止,然后利用与溶解原料的溶液组成一样的缓冲液为清洗液,清洗色谱柱,目标产物,即得到纯化的目标产物,最终利用清洗液清洗再生色谱柱。洗脱方法:线性梯度洗脱和逐次洗脱。亲和配基:酶的抑制剂抗体A蛋白凝集素辅酶和磷酸腺苷色素配基过渡金属离子组氨酸肝素制备方法:溴化青活化法环氧基活化法硅胶的活化间隔臂:当配基的相对分子质量较小时,将其直接固定在载体上,会由于载体的空间位生有效的亲和结合。洗脱的方法:特异性洗脱:利用含有与亲和配基或目标产物具有亲和结合作用的小分子化合物溶液为洗脱液,通过与亲和配基或目标产物的竞争性结合,脱附目标产物。非特异性洗脱:通过调整洗脱液的pH值、离子强度、离子种类或温度等理化性质降低目标产物的亲和吸附作用,是较多承受的洗脱方法。电泳和电色谱特性。凝胶电泳:主要利用凝胶的分子筛作用使分子大小不同的电解质得到分别,在凝胶电泳过程中,相对分子质量大的溶质受凝胶阻滞作用大,电泳速度依据溶质相对分子质量的不同,凝胶中会形成含有不同溶质的区带,实现溶质之间的相互分别。等电点聚焦:pH值下呈pHpH值区域,从而形成具有不同等电点的蛋白质区带。二维电泳:同时利用分子尺寸和等电点这两种性质的差

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