邻二氮菲分光光度法测定微量铁课件

邻二氮菲分光光度法测微量铁

一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。⒈确定适宜的条件的原因：将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。配合物的lgK稳

=21.3，摩尔吸光系数ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3+

+2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H+

+2Cl-测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜，用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。金属一EDTA络合物与其它络合物一样，在溶液中存在着离解平衡，其平衡常数用稳定常数(形成常数)或不稳定常数(离解常数)来表示。于金属离子-EDTA一般形成1：1络合物，为讨论方便，略去式中的电荷，简写成：

M＋Y↔MY

当此反应达平衡时K稳越大(或K不稳越小)，说明络合物越稳定。

[MY]

1

K稳=────=───

[M][Y]

K不稳络合物稳定性主要决定于金属离子本身的离子电荷、离子半径和电子层结构溶液的酸度、温度和其它络合剂三、仪器试剂⒈仪器：721型分光光度计；1cm吸收池；10mL吸量管；25mL比色管(7个)。⒉试剂：1.0×10-3mol·L-1

铁标准溶液；100μg·mL-1铁标准溶液；0.15%邻二氮菲水溶液；10%盐酸羟胺溶液（新配）；1mol·L-1乙酸钠溶液；1mol·L-1NaOH溶液；6mol·L-1HCl（工业盐酸试样）。四、实验步骤⒈吸收曲线的绘制和测量波长的选择（略）用吸量管吸取2.00mL1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液，注入50mL比色管中，加入1.00mL10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0mLNaAc溶液，以水稀释至刻度。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，在440～560nm间，每隔10nm测量一次吸光度（在最大吸收波长处，每隔2nm），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长。⒉显色剂条件的选择（显色剂用量）在6支比色管中，各加入2.00mL1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液和1.00mL10%盐酸羟胺溶液，摇匀。分别加入0.10，0.50，1.00，2.00，3.00及4.00mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0mLNaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，测吸光度。以邻二氮菲体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定最佳显色剂用量。⒊工业盐酸中铁含量的测定⑴标准曲线的制作在6支50mL比色管中，分别加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL100μg/mL铁标准溶液，再加入1.00mL10%盐酸羟胺溶液，2.00mL0.15%邻二氮菲溶液和5.0mLNaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在512nm处，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，测吸光度A。五、预备实验六、实验注意事项⒈不能颠倒各种试剂的加入顺序。⒉读数据时要注意