2023年AriaII操作手册分选

FACSAriaⅡ中文操作手册FACSAriaⅡ流式细胞仪一、开机预备〔一〕预备液路将流式细胞仪的上盖翻开；开启计算机，等待全部程序载入。FACSDivaBDIS。翻开激laserpower〔依据试验需要进展选择开启试验所需激光器电源。〔去离子水、漂白剂、乙醇，倒空废液或加满其他液体〔以以下图。CytometerFluidicStartup射流启动OK确认。1将消灭如下窗口：

FACSAriaⅡ中文操作手册Done；Closed-loop喷嘴〔闭环喷嘴〕插入流淌示液流开启进展中；喷嘴，完成依据试验要求，插入直径适宜的喷嘴〔喷嘴直径应当是分选颗粒直径的3-6倍；OK，完成整个过程；2FACSAriaⅡ中文操作手册Sort(分类)sortsetup,setup模式与喷嘴大小匹配。〔二〕开液流翻开液流窗口的液流；点击软件界面上〔如以以下图〕的按钮翻开分选液流窗口〔如以以下图〕点击分选液流窗口的按钮3

(stream的前面按钮)，开启液流FACSAriaⅡ中文操作手册(可通过调整红色标志的键)；10〕关上分选仓前的门。〔三〕设定液流断点〔Ampl1/3处。有气泡；确认鞘液压力和震惊频率是否适宜；6滴之内融合〔红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格，假设没有融合，重安装喷嘴。4二、建立试验模板

FACSAriaⅡ中文操作手册BrowserNewFolderExperimentSpecimen〔均可重命名Specimen”符号，显示下方的Tub色指示箭头，使之变成绿色〔当前指示。Parameters选项卡，选择试验所需荧光通道〔Ctrl键可多项选择信号放大类型〔log/li、信号脉冲类型〔H/A/W，5FACSAriaⅡ中文操作手册在(worksheet页面中，画出试验所需模板(斜箭头)：首先画出点图〔FSC-ASSC-A，依据阴性比照〔未染色的细胞〕P1；其次画出点图〔双参数：荧光名称ShowPopulations选项，选择P1，建立图之间的联系(如以以下图)。loadAcquireData自动被激活或手动点击采集把握Acqiredata按钮，仪器开头猎取样本数据。6FACSAriaⅡ中文操作手册CytometerFSC/SSC中信号位于利于观看的位置〔细胞群落在中心位置。调整阈值Threshol碎片和噪音信号。调整上样速度〔FlowRat〔10。7FACSAriaⅡ中文操作手册FSC/SSC荧光通道的电压，使荧光信号位于适宜的位置。在鼠标右键中翻开数据显示，观看试验的实时结果。EventsToRecord等参数，点RecordData，开头保存数据。8FACSAriaⅡ中文操作手册〔三〕液流关机预备关机2．从上样架上移去上样管；3．关闭液流(stream4．倒空废液桶；关机Cytometer>fluidicsshutdown〔关闭，会弹出下面窗口Done。Done。将鞘液桶的液流管和气管分别连接到酒精桶上，点Done。9FACSAriaⅡ中文操作手册从今处断开连接

液流 气管 管酒精桶 鞘液桶 酒精桶 鞘液桶正常运行时 液路关机时3mlDone；清洗完成后，按提示，点OK。关闭流式细胞仪主机电源；退出软件，关计算机。清洗外部毒和避开形成盐结晶。10每日关机和日常维护

FACSAriaⅡ中文操作手册1．关闭液流ClosedLoopNozzle。从菜单上选择Cytometer>>CleaningModesCleanFlowCell，会弹出右侧窗口：放一管无菌水在上样台上。4．OK；Nozzle。6．关闭流式细胞仪主机电源；退出FACSDiva11FACSDiva软件介绍DIVA在①工具栏中，可以显示或隐蔽某个工作窗口1、工作界面工具栏

FACSAriaⅡ中文操作手册保存〔Save〕-保存试验模板及数据。直接退出软件时，软件将自动保存已建立的试验模板和已猎取的试验数据。点击可显示或隐蔽扫瞄器窗口。多孔板〔Plate〕-显示或隐蔽多孔板试验窗口。仪器设置〔Cytometer〕-显示或隐蔽仪器设置窗口。属性〔Inspector〕-显示或隐蔽属性窗口。12FACSAriaⅡ中文操作手册工作表〔Worksheet〕-显示或隐蔽工作表窗口猎取把握器〔AcquisitionControls〕-显示或隐蔽猎取面板生物指数编辑器〔BiexponentialEditor〕-显示或隐蔽生物指数编辑器〔Sorting〕-显示或隐蔽分选设置2、各窗口介绍扫瞄器〔Browser〕扫瞄器是创立试验模板和治理试验数据的窗口。如图：窗口第一栏的扫瞄器工具栏〔Browsertoolbar〕中包含了扫瞄器的全部构〔Folders〕、试验〔Experiments〕 、样本〔Specimens〕 、样本管〔Tubes〕、样本/样本管特异仪器设置〔Specimen/Tube-specificcytometersettings〕 、分选版面〔Sortlayout〕、总工作表〔GlobalWorksheet〕、多孔板〔Plate〕 。各建的工程均可用鼠标右键菜单重命名。仪器设置窗口〔Cytometer〕13FACSAriaⅡ中文操作手册阈值、激光延迟的界面。属性窗口〔Inspector〕设置。猎取面板〔AcquisitionDashBoard〕细胞数量。14FACSAriaⅡ中文操作手册分选设置窗口〔Sorting〕分选窗口包括两局部：侧液流窗和断点液流窗抽屉、调整侧液流角度、液流聚焦、调整液滴延迟。〔SweetSpo调整振幅〔Ampl、震荡频率FreDrop1Gap值。〔Worksheet〕各种门的创立以及进展数据分析。15FACSAriaⅡ中文操作手册试验模板建立常见问题问题1：在选择通道参数时，待选项中没有自己要选的荧光名称。视图设置〕选项。在跳出的窗口中双击仪器配置。中有各种染料的名称，将其拖拽至相应的检OK。16FACSAriaⅡ中文操作手册SetconfigurationOK。17FACSAriaⅡ中文操作手册2Parameters选项卡中添加，3、4过程即可。18问题2：如何在荧光通道中添加抗体名称？

FACSAriaⅡ中文操作手册ExperimentExperimentLayout〔布局。LabelOK。Label批量添加抗体名称19FACSAriaⅡ中文操作手册问题3：如何调整荧光补偿？手动调整补偿1.建立如下试验模板：上阴性/〔未染的细胞〔Q3：FITCCytometerCompensation〔补偿〕中的值，使阳性信号落入单阳性范围(如以以下图右侧)。调整前后信号差异如下：PECytometerCompensation20单阳性范围。调整前后信号差异如下：

FACSAriaⅡ中文操作手册荧光补偿调整完成。值。21FACSAriaⅡ中文操作手册分选一、液流监视1．用蘸有超纯水的棉签擦拭偏转板，之后用干棉签擦拭干净。整个分选过程都应确保偏转板无液滴或盐结晶。翻开液流，液流应为一条细线，无分叉、喷雾。关闭液流罩。〔以以下图圆圈圈的旋钮。于右图：二、分选液路调整集中〔假设只做两路分选，可将两个外侧Votage22FACSAriaⅡ中文操作手册Sliders0Drop1GapSweetSport。选电压翻开时，制止触摸偏转板！三、确定液滴延迟〔DropDelay〕NewExperiment，AccudropDropDelay，点OK。Tube_001Tube_001SortLayout_001，SortLayout23FACSAriaⅡ中文操作手册BDAccudropBeads0.5mlPBSWindowExtension1000-3000events/秒。翻开Votage，点击sort。此时弹出对话框，提示是否翻开WasteDrawercancel。OpticalFilter。此时，液流窗如以以下图：DropDelaySortLayoutInitialFineTune,重调整Dela，使左框到达最大值〔99%。24FACSAriaⅡ中文操作手册调整完毕后，关闭OpticalFilter、Votage、Sort。将WindowExtension2。无需每次建一个AccudropDropDelay模板。每次翻开软件时，DropDelay均值为最近一次调整后的值。★进展完步骤4时，可以应用软件的自动调整液滴延迟〔AutoDelay〕在跳出的对话框中选择StartRun，软件会自动查找最正确值。25FACSAriaⅡ中文操作手册四、开头分选试验上述工作预备完毕后，即可安排分选。SortLayout。在已有的ExperimentSortNewSortLayout。SortLayoutDevicePrecision〔周密度〕Purity。〕下选择数目、输入数字或选continuous。选中分选方向〔LeftRight，在相应的方向，添加要分选的细胞群〔门。开头分选放入收集管。上样。设定适宜的收集速率。速率低时分选效果比较好。一般8.0。Votage。点击SortLayout上的“Sort此时消灭一个对话框，提示是否翻开WasteDrawer。假设确定开头分选，点击“OK26FACSAriaⅡ中文操作手册TargetEvents选择了“Continuous点击“Sort”或“Acquire”手动停顿分选。从SortLayout窗口可监测分选的进度，分选的细胞数显示在相应的区域。在相关的计数区显示分选速率。27无菌分选操作流程

FACSAriaⅡ中文操作手册Modes<PrepareforAseptic〔无菌〕Sort。Done。〔可高温高压灭菌，亦可酒精消毒。高温灭菌时留意取下液面感应器，并倒入无菌鞘液。DI桶灭菌0.2um鞘液滤器将漂白水桶液流管与DI28

FACSAriaⅡ中文操作手册〔不包括滤器〕与液流车侧面的液流输出端口相连，点

0.2um。假设要接着进展分选试验，点击以以下图的第一个Run；假设要终止试验、关闭系统并清洗流淌室，点击其次个Run。29FACSAriaⅡ中文操作手册断点液流窗液滴外形及其可能缘由正常液流可能喷嘴位置喷嘴堵塞镜头脏Attenuation缘由偏偏开启解决方法重装喷嘴重装喷嘴清洗喷嘴拭镜头关 闭Attenuation分选试验中遇到的问题及可能缘由开启TestSort时无偏转液流液流不能落入废液槽中心或无液流偏转板产生电火花侧液流不稳定OpticalFilter左右框值总和小100%

鞘液为蒸馏水喷嘴位置不正确喷嘴堵偏转板电压设置太高偏转板上端过分靠近偏转板上有盐结晶Ampl值不恰当偏转板有水滴或雾气小激光没有与液流正交侧液流窗脏Accudrop微球过期30

PBS或生理盐水重装喷嘴清洗喷嘴降低偏转板电压调远偏转板上端距离清洗偏转板调整Ampl值擦拭偏转板调整小激光角度擦拭侧液流窗更换微球FACSAriaⅡ中文操作手册CytometerSetupandTracking〔CS&T〕操作流程微球用量：Fordefiningbaseline,addtothelabeledtube:0.5mLdiluent3dropsofbeadsForrunningdailymeasurements,addtothelabeledtube:0.35mLdiluent1dropofbeadsForresettingtargetvaluesaddtoatubelabeledcurrentlot:0.5mLdiluent3dropsofbeadsfromcurrentlotaddtoatubelabelednewlot:0.5mLdiluent3dropsofbeadsfromnewlot一、微球信息导入。CytometerCST选项。在消灭的窗口右侧，选择仪器配置。31FACSAriaⅡ中文操作手册Tools菜单中，选择BeadsLots选项，选择Import，导入已有的微球信息文件〔“://bdbiosciences/support/resources/software/index.jsp“://bdbiosciences/support/resources/software/index.jsp下载OK。32FACSAriaⅡ中文操作手册二、定义基线〔DefineBaselin〔初次使用CS&T时。假设已有Baselin过此步。SetupControl窗口中，选择DefineBaseline，选择手动上样或自动上样。Run。仪器将自动完成检测和设置过程。仪器收集完信息后，将会显示PMTVs调整结果。33FACSAriaⅡ中文操作手册ContinueSetupTargetValue设置后