流式细胞仪介绍

流式细胞仪介绍第1页/共51页流式细胞仪产品介绍第2页/共51页主要内容流式细胞仪基本原理MACSQuant流式的性能流式的竞争分析第3页/共51页流式细胞仪基本原理第4页/共51页

流式细胞术（FCM）：就是对在高速流动的鞘液包括下的细胞、粒子进行分析和分选的技术，这种细胞或粒子是经过特异荧光标记的。其特点是测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞，且可进行多参数测量。流式细胞术的概念第5页/共51页流式细胞术发展趋势单纯到复杂检测荧光参数定量手动到自动荧光试剂第6页/共51页液流检测器

光源电子计算机层流鞘液细胞样本鞘液注射口激光流动室流式细胞检测原理第7页/共51页细胞可被检测的参数(无探针标记)散射光信号:

细胞内在的结构参数细胞大小

前向角散射(FSC)细胞内部颗粒性

侧向角散射(SSC)

ForwardLightDetector

CellSurfaceAreaIncidentLightSource第8页/共51页

是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。区分阴阳性：通过荧光强度可将同一个细胞群体中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分开来。

区分阳性强弱：也可以将阳性细胞中的高FL的细胞与低FL的细胞区分开来。相对荧光强度（FL）(需探针标记)第9页/共51页散点图

密度图二维等高图直方图图报告中常见的几种流式细胞图如何看流式图第10页/共51页流式细胞术的应用

流式细胞术在细胞生物学中的应用

染色体核型分析在分子遗传学领域中的应用用于性别的预选择在微生物学中的应用在细胞周期研究中的应用

流式细胞术在医学中的应用在免疫学中的应用流式细胞术在肿瘤学上的应用在血液学研究中的应用

流式细胞术新的应用第11页/共51页流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病12第12页/共51页临床意义了解在不同情况下体内免疫功能状态辅助临床疾病的诊断探索疾病的发病机理、病程、预后监测、指导临床治疗方案免疫系统疾病免疫缺陷病，AIDS移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测肿瘤病人化疗后免疫力检测第13页/共51页流式细胞仪的科研应用树突细胞研究干细胞研究癌症病人的多药耐药性细胞周期和细胞凋亡流式细胞术与分子生物学研究细胞系的鉴定细胞内蛋白的分析细胞膜电位测定细胞内钙离子测定第14页/共51页流式细胞仪潜在客户医院：血液科，检验科，风湿免疫病科，肿瘤科，细胞治疗科,开展移植（肝肾）的科室。科研院所及大专院校：免疫系或免疫实验室，中心实验室，分子生物学室，肿瘤研究所，血液病研究所。第15页/共51页MACSQuant流式细胞仪

——细胞分析的里程碑第16页/共51页多参数细胞分析MACSQuant光学参数Excitation(nm)OpticalchannelFiltersFluorochromes405nmFL1450/50VioBlue™/PacificBlue™488nmFL2525/50FITCFL3585/40PEFL4655-730PI/7-AAD/PE-Cy5.5/PerCPFL5750(LP)PE-Cy7635nmFL6655-730APCFL7750(LP)APC-Cy7488nmSSC/FSC488/10FSC/SSC三激光紫色

(405nm) 40mW蓝色

(488nm) 25mW红色

(635nm) 20mW

9个光学参数FSC/SSC+7个荧光通道第17页/共51页MACSQuant光路系统第18页/共51页MACSQuant流式细胞仪的创新特性：集成，台式数字化流式细胞仪强大并且直观的软件多参数：3激光，9个参数（FSC,SSC,FL1-7)12寸触摸屏（内置）不同用户登录模式，可用密码进行保护2种不同的模式（针对有丰富经验和无流式经验的人员）分析速度可达10000个细胞/秒,无需计数微珠进行绝对计数不同的流速控制：25/50/100uL/分钟自动化处理样本，自动进样，自动清洁，自动补偿,自动标记矩阵补偿和脱机补偿小巧（60X35X40cm）、低噪、低热。流式细胞仪基本特征第19页/共51页细胞富集系统绝对计数，无需微珠自动补偿自动进样自动标记AnewmilestoneincellanalysisMACSQuant™分析仪功能强大、操作简单的多参数细胞分析的理想工具

(高端仪器–操作简单–多种自动化选择)

第20页/共51页MACS®富集系统使用MACS微珠磁性富集细胞细胞被富集后再进行流式细胞术分析预富集的应用：内皮祖细胞检测——频率:每105PBMCs中有1个细胞(如CD34的预富集)肿瘤细胞检测——频率:每107PBMCs中有1个细胞(如EpCAM的预富集)抗原特异性T细胞检测——(如CD154的预富集)成分检测可以只检测富集后组分或者同时检测原始标本、阴性组分和阳性组分MACSQuant流式细胞仪独有特征：高灵敏度地分析稀有细胞第21页/共51页每次反应后，自动计算每µL体积中的细胞数——无须计数磁珠，细胞培养后往往需要细胞计数，可以完全替代细胞计数仪CD4绝对计数用于辅助HIV监测治疗CD34绝对细胞计数用于干细胞移植MACSQuant流式细胞仪独有特征：绝对细胞计数(容积型)第22页/共51页自动化的多样本处理：使用MACS®MiniSampler和MACS®冷冻试管架灵活性高，可使用不同的试管

——

5mLtubes——15mLtubes——50mLtubes通量高(从Chill96rack到96孔板)MACSQuant流式细胞仪独有特征：自动进样第23页/共51页MACSQuant流式细胞仪独有特征：自动标记MACS微型载样器上的试剂架，可最多放置4支染色试剂，如：PI/7-AAD荧光素标记的抗体抗体混合物(如MACSMCCocktails)全系列试剂(抗体和试剂盒),如:MACS对照抗体混合物:MCCD14MonocyteCocktail,human

MCCD19BCellCocktail,human

MCCD34/CD133Cocktail,human

MCCD34Cocktail,human

MCCD4TCellCocktail,mouse

MCCD90PanTCellCocktail,mouse

MCCD19BCellCocktail,mouse

…

第24页/共51页MACSQuant流式细胞仪独有特征：完全自动化的仪器设置全自动的仪器校准(使用MACSCalibrationBeads)7x7矩阵补偿自动补偿，对多色分析自动生成补偿值手动补偿第25页/共51页仪器操作简单、易行:溶液瓶(1.5L)附着在仪器两侧(通过瓶子上不同的指示灯来显示机器状态)结构：数字化分析速率>10,000events/秒流速:25/50/100µL/minMACSQuant™Analyzer第26页/共51页自动化的仪器设置自动校准仪器（使用MACS校准微珠）自动补偿7X7自动矩阵补偿自动清洗自动化进样和抗体标记带有清洗工作站（washingstation）的进样针自动化进样针臂（y,z方向移动）无加压系统溶液瓶附着在仪器上仪器状态能够通过溶液瓶的不同颜色来指示用户友好的仪器操作第27页/共51页12‘’触摸屏（内嵌）Livesupport远程网络服务，德国工程师进行远程在线检修机器VGA接口(连接第二个显示器或者代替的显示器)功能强大、易于操作——直观的操作界面(用于仪器控制,数据获取和数据分析)——不同的用户模式——拖拉式安装——含预设程序——在个人电脑上进行独立数据分析——MACSQuant数据（MQD)文件

-FCS格式-FCS3.0-与其它流式软件兼容软件基本特征第28页/共51页简捷的数据处理:个人用户登录数据自动保存在对应的用户文件夹中MQD–文件(内部格式)数据储存/备用:可用硬盘驱动器/DVDRW驱动器,USB接口,以太网络连接软件基本特征软件简单易操作:键盘在显示屏上(触摸式显示屏)USB接口–可用来连接外设的鼠标、键盘条形码读码器第29页/共51页MACSQuant™Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第30页/共51页MACSQuant™Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第31页/共51页MACSQuant™Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第32页/共51页流式相关抗体针对流式检测的全系列抗体。。。。-FITC-PE-APC-Vioblue-……第33页/共51页北京大学人民医院血液病研究所流式细胞仪检测报告姓名：

性别：

年龄：

标本：病历：

诊断：

编号：淋巴细胞占有核细胞

%CD3+细胞占有核细胞

%CD4+细胞占有核细胞

%CD8+细胞占有核细胞

%CD14+细胞占有核细胞

%签名：审核者：日期：第34页/共51页竞争优势:预富集功能，高敏感性检测罕见细胞，比如临床最常用的造血干细胞、肿瘤干细胞、pDC等。非常节省细胞，对于科研珍贵标本尤为重要！绝对的细胞计数，无需计数微珠，细胞培养后往往需要细胞计数仪，可以完全代替细胞计数仪。自动标记，自动进样，自动清洗，节省时间。自动补偿，对多色分析自动生成补偿数值小巧的台式机设计,低噪，低热非加压系统进样MACSQuant™Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis35(25)第35页/共51页仪器的竞争分析

第36页/共51页BD的各种机型（一）caliburAriaLSRII第37页/共51页BD的各种机型（二）

CantoIIInflux第38页/共51页Beckman的各种仪器（一）EPICSXL-ADC

CytomicsFC500Gallios

MofloEPICSXL-Altra

Quanta

第39页/共51页Partec公司各种机型（适合植物学研究）第40页/共51页Amnis公司的ImageStreamX图像流式细胞仪

被评为2008年度生命科学十大创新产品之一，是流式细胞仪上的新突破.第41页/共51页Milipore公司的GuavaEasyCyteMini/EasyCytePlus无鞘液毛细管细胞分析仪

第42页/共51页Accuri的c6-流式细胞仪

一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统

第43页/共51页MACSQuant®Analyzer–“add-ons”MACS®MiniSamplerChillRacks(Chill5,15,50or96welladapter)MACSQuant®ColumnsAdditionalyearsofServiceFluorochromes,MACS®ControlCocktailsandMicrobeadsInstrumentTrainingMACSQuant®CalibrationBeadsMACSQuant®StartingBufferkitIndividualBuffer/Solutionboxes第44页/共51页

第45页/共51页MACSQuant®AnalyzersintheWorldBelgiumCanadaChinaFranceGermanyIcelandIrelandItalyJapanRussiaSouthKoreaSyriaUnitedKingdomUnitedStatesComingsoontothelistis:Australia第46页/共51页FlowCytometryMarketEstimatedtobe$1.5billionin2008(CAGR~10-15%,$3.7billionin2015)Instruments68%-$1.02billionReagents32%-$480millionSalesin2009Total–6.1million€(4.7million€)Instruments–2.632million€(~0.36%)Reagents–3.4million€(~0.99%)第47页/共51页WhobuystheMACSQuant®AnalyzerInnovatorsarethefirsttopurchaseinstrumentsandnewgadgetsMostcountriesarecurrentlysellingtotheearlyadoptersSomecountrieshavesoldafewMQandarenowsellingtotheresearcherswhowant/needgreaterscientificarguments...MustbetargetedtomaximizeoursuccessGuidelineshavebeenfollowedinseveralcountriesandsuccessisseen!第48页/共51页Whathavewelearned?MiltenyiBiotecisstillanewplayerinflowcytometryWhat