新药临床前毒理安全性评价规范化管理讲座

新药临床前毒理安全性评价规范化管理讲座第1页/共39页一、临床前毒理学安全性评价的目的意义和内容目的：新药临床前安全性评价的目的非常清楚，就是提供新药对人类健康危害程度的科学依据，预测上市新药对人体健康的有害程度，淘汰危害大的，权衡有危害的，通过危害，理想的是没有危害的新药，使新药成为人类同疾病作斗争的有力武器。第2页/共39页意义：历史教训不可忘记（1）1935年至1937年，美国用二硝基酚减肥引

起白内障、骨髓抑制死亡177人。（2）1937年美国的二甘醇磺胺酏剂事件造成107

人死亡，是因没有进行任何动物毒性试验

就上临床造成的。（3）1954年至1956年，法国的有机锡胶囊事件

引起207人视力障碍，其中102人死亡。主

要原因是当时急性毒性试验仅观察24h，

不仅LD50不准确，以为毒性不大，更主要

的是24h内不能出现神经毒性症状。如果

当时急性毒性观察3d或7d，则这一悲惨事

件完全可以避免。第3页/共39页（4）1959年到1962年的沙利度胺（反应停）惨案，

则是因当时主客观条件所限，未能进行完善的

多种动物的致畸试验，引起万名婴儿畸形。（5）1966年至1972年，日本的氯磺喹啉事件则是由

于长期毒性评价不完善而造成千人失明或下肢

瘫痪。（6）1937年至1959年，美国妇女用黄体酮保胎，治

疗先兆流产，结果使600多名女婴发生生殖器

男性化。早在1939年就已知化学合成的孕激素

分子结构似男性激素，可使后代雌性动物雄性

化。其实在动物上早已发现毒性，仅仅因未引

起人们足够的重视而造成这一悲剧。第4页/共39页内容：新药临床前安全性评价涉及内容广泛，分一般毒性评价和特殊毒性评价两大部分，其主要有急性毒性试验、长期毒性试验（反复给药毒性试验）、特殊毒性试验、皮肤用药及腔道用药毒性人、药物依赖性试验及抗生育药及细胞毒性抗肿瘤药的毒性评价等。涉及学科有一般毒理学、生化副经理理学、细胞毒理学、分子毒理学、靶器官毒理学、免疫毒理学、生殖毒理学、遗传毒理学、临床毒理学、病理学、药理学、生理学、生物化学和组织化学等等，因此它是一门综合性的毒理学评价，是新药评价核心内容之一，不仅涉及本单位本学科，也涉及到兄弟单位及邻近学科，也是一个纵横交错的系统评价过程。第5页/共39页参照新药审主的基本要求，新药临床前安全性评价有以下基本内容，当然根据各类药及制剂的特点不同有所变动。（1）全身性用药小鼠或（和）大鼠及狗的急性毒

性试验；（2）全身性用药小鼠或（和）狗及猴的长期毒性

试验；（3）皮肤用药的急性毒性试验；（4）皮肤用药的长期毒性试验；（5）皮肤用药的刺激性试验；（6）皮肤用药的过敏试验；（7）眼用药的刺激性试验；（8）滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验；（9）滴鼻剂和吸入剂的刺激性试验；第6页/共39页（10）直肠、阴道用药的急性毒性试验；（11）直肠、阴道用药的刺激性试验；（12）直肠、阴道用药的长期毒性试验；（13）遗传毒性试验；（14）生殖毒性试验；（15）致癌试验；（16）药物依赖性试验；（17）抗生育药的毒性试验；（18）细胞毒性类抗肿瘤药毒理试验；（19）光毒试验；（20）制剂的安全性试验（异常毒性试验、过敏试验、热原试验、卫生学检查、溶血试验和降压物质检查等）。第7页/共39页二、现状1.国外：Pre-clinic40%Evaluation10%Toxicology6%ClinicalTrial39%Screen16%Stability8%ClinicalPhaseⅠⅡⅢ33%Ⅳ6%Process/Qc9%新药开发时间是最主要的，外国公司不跟先谈价钱，先谈时间，每天5万美元。第8页/共39页毒理部分：

Carcinogenity35%Reproduction25%Acute/Subco’20%Mutagenicity10%药理10%药效只占10%主要是毒理第9页/共39页2.国内：①成就②差距3.国家1035工程及江苏省新药创新体系（1）战略目标和战略重点新药研制具有专利保护的10个创新药物，产业化占有一定份额。

1－2个药物进入国际市场。第10页/共39页（2）完善新药创制过程中各环节，也就是体系建立新药筛选中心

1、国家新药筛选中心上海浦东张江以中科院上海药物所为依托单位，承担抗感染、抗肿瘤、抗病毒、神经系统、免疫系统、生殖系统、心血管系统。药物的计算机辅助设计

2、其他国家新药筛选中心北京医科大学、医科院药物所、医科院医药生物技术所、福建微生物所、中国药科大学与新华制药厂为依托单位的5个新药筛选中心。第11页/共39页毒理学安评中心（GLP）1、国家新药安全性评价中心中检所、SDA2、国家上海新药安全性评价与研究中心上海医药工业研究院3、国家沈阳新药安全性评价与研究中心沈阳化工院4、军事医学科学院国家新药安全性评价与研究中心5、浙江医学科学院国家新药安全评价研究重点实验室6、广州医药工业研究所国家新药安全评价研究重点实验室第12页/共39页7、广州中医药大学国家中药安全评价研究重点实验室8、中国中医研究院国家中药安全评价研究重点实验室9、四川联合大学（华西医）国家中药安全评价中心江苏省医药、农药、兽药安全性评价中心江苏省新药安全性评价中心南中医国家中药药理规范化实验室第13页/共39页新药临床试验研究中心

2家肿病、3家心血管、2家中医、2家综合性以北京医科大学临床药理研究所、上海医科大学华山医院、中山医院、医科院北京协和医院、阜处医院、肿瘤医院、广东中山医科大学肿瘤医院、广东省中医院、中国中医研究院西苑医院、哈尔滨医科大学十家医院分别筹建国家性多学科临床试验研究中心。第14页/共39页三、SDA和CFDSDA的运行新机制和法制化管理

1999年全国第一次药品审评会议在金泰大厦1.意义、目的、必要性

为什么要进行严格管理？(1)政治角度、社会稳定国内：社会舆论：涉及面广：经济利益：沈阳飞龙、恶性案件国外：平等竞争知识产权谈判主要内容，经历多轮谈判。第15页/共39页（2）从战略高度医药的发展、WTO（3）控制低水平重复，从源头控制，要将精力用

到研究中，而不是旁门左道。第16页/共39页2.新的新药审评和管理机制与机构（1）国家新药管理体制的改革

卫生部药政局：新药审评中心（分中、西等）药典委员会进口药保护品种委员会国家基本药物委员会中药保护品种委员会中检所、各省所及分支假药、劣药管理

国家医药管理局国家中医药管理局第17页/共39页（2）新的管理体制

SDA（StooteDrugAdeministration）国家药品监督管理局机构设置：药品注册司（化学药品处、中药处、生物制品处）安全监管司

GFDSDA（GontreforDrugEoaluation）

SDA认证中心：GAP

GMP

GLP

GCP第18页/共39页药典委员会中药品种保护委员会SDA安评中心中国药品检验所保密项目中药快速通道保密法已确定密级：片、磺、白药（3）新药审评新旧方法对照①体制②

要求第19页/共39页四、新药审批办法

1.历史沿革

（1）1985年首次颁布，随后有一系列法规出台（2）1999年5月1日新的法规出台第一批公布5个令：共有48个规章将陆续出台：（3）新药审批办法第20页/共39页五、原始资料的规范化管理

1.原始资料的管理沿革与99年打假活动

（1）卫生部管理药审①一直进行这方面的宣传、检查②几个例子：国外、国内

（2）SDA管理

①“打假”

1999年春节2.8国药药电[1999J3号]

省会所在地一天（2.9）密封、非省会二天（2.10、2.11）密封。

1999年夏季各省原始资料审查。

（3）原始资料的规范化里程中的几个例子第21页/共39页2.改进措施，如何管理（1）推进GLP①国外：②国内：（2）省级对原始资料审核、场地考察（3）各种扶正的措施

评审时考核、随时抽查随身带外地24小时，北京12小时。第22页/共39页3.原始资料记录中的常见问题4.原始资料如何规范化及有关条规第23页/共39页六、新药毒理研究的技术要求（一）全身性用药的毒理试验

1.急性毒性试验观察一次给药后动物产生的毒性反应并测定其半数致死量（LD50）。要用两种以上给药途径（包括推荐临床研究的给药途径，溶于水的药应当测定静脉注射的LD50

）。给药后至少观察7天，观察到动物有毒性反应时应进行肉眼尸检，记录所有病变。存活24小时或更长时间的处理动物，当尸检发现有病变组织时，应对该组织进行镜检。第24页/共39页2.长期毒性试验观察动物因边疆用药而产生的毒性反应、中毒时首先出现的症状及停药后组织和功能损害的发展和恢复情况。（1）动物：至少两种动物（包括啮齿类和非啮齿类），啮齿类常用大白鼠，年龄为6周，包头观察一周后使用，动物数按毒性试验时间的长短决定，如毒性试验时间＜90天，每剂量组为雌雄各10只。如毒性试验时间＞90天，每剂量组为雌雄各20只。非啮齿类常用狗，年龄为4－6月，每剂量组为雌雄各2只。对照组和试验组的动物数要相等。第25页/共39页（2）剂量：常用三个剂量，大动物也可用两个剂量。在试验过程中，高剂量组应有部分动物出现毒性反应或死亡（不大于20%），低剂量组应当略高于药物对动物的有效量或临床试验用的剂量而不出现任何观察指标的异常。（3）给药途径：注射用药的给药途径应与推荐临床试验的给药途径相同，口服给药最好采用灌胃法。（4）试验周期：一般参考推荐临床试验的用药持续时间考虑，即动物试验连续给药期必须为临床试验给药期的3－4倍。例如，临床试验期为1－3天者，毒性试验给药期为2周。7天者，为4周。30天者，为3月。＞30天者，毒性试验给药期至少半年第26页/共39页试验周期在半年以上的新药，可在长期毒性试验进行3个月后、未发现明显毒性反应的情况下，申请进行第Ⅰ期临床试验。（5）观察指标：一般体征、体重、外观、行为、尿常规、血常规、肝肾功能及重要器官的肉眼观察和病理检查，必要时作骨髓检查，血液生化，大动物应检查心率和心电图变化。凡有可能引起眼、耳毒性的药物，应增加眼、耳毒性检查指标。有些药物尚无需研究对酸碱平衡、水盐代谢的影响。第27页/共39页

产生毒性反应的新药至少应对高剂量组和对照组的动物在给药期结束后继续进行观察，对引起不可逆性损害和组织病变的药物，要慎重考虑临床试验问题。对毒性较高、安全范围较小的特殊品种新药，如拟进行临床试验，最好通过研究找出一种解救药，以备过量中毒时使用。有的新药还应根据其药理性质和用途，观察对注射部位（皮下、肌肉、血管）的刺激性，注射用生化制品应进行热原、异性蛋白及过敏试验。第28页/共39页（二）局部用药毒性试验局部用药（如呼吸道吸入药以及粘膜、皮肤用药等），大都可以被吸收。因此，局部用药应先进行局部吸收试验。根据用药方法，对用药部位要进行局部刺激性试验，用肉眼观察及组织切片的镜检，测试刺激性（即炎症）的发展和恢复情况。1.皮肤用药进行完整和破损皮肤的毒性试验以及皮肤致敏试验，除婴儿皮肤用药应使用刚成年动物外，其余均用成年动物。可选用家兔、豚鼠或大鼠。至少应设三个剂量组，每组动物数不少于3只，以观察与剂量相关的毒性反应。观察期一般在停止敷用后不超过14天。第29页/共39页2.滴鼻剂和吸入剂进行呼吸道（包括肺部）的局部刺激性和毒性试验。大鼠或豚鼠，每一个浓度组至少10只动物（雌雄各半），至少设3个浓度组。接触吸入剂量的时间不少于4小时。观察期一般为14天。3.滴眼剂观察对眼结合膜和眼求的刺激作用。家兔为道选，至少用3只家兔。液体制剂的剂量一般每次用0.1ml，软膏等制剂每次不超过100mg。观察期一般在停止给药后21天内，以观察出现反应的可逆性和不可逆性。4.局部作用于直肠、阴道的制剂，进行对作用部位的刺激及局部毒性试验。

第30页/共39页（三）特殊毒理研究

1.致突变试验根据受试物的化学结构、理化性质及对遗传物质作用终点（基因突变和染色畸变）的不同。要求新药必须做以下三项试验：（1）微生物回突变试验菌株：组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌四株（TA97、TA98、TA100、TA102），亦可采用大肠杆菌（E.Coli）WP2若干株（大肠杆菌试验）。剂量选择：决定受试物最高剂量的标准是细菌毒性和溶解度。一般最大剂量可达5mg/皿。受试物至少应有5种不同的剂量，否则应说明选定剂量的理由。第31页/共39页代谢活化：应用诱导剂处理后的哺乳动物肝脏微粒体（S9）进行体外代谢活化试验，即在加S9混合物和不加S9混合物平行的条件下测试。对照组：用溶媒作阴性对照，用已知突变原作阳性对照。结果判定：受试物的回复突变菌荣誉称号数的增加与剂量相关并有统计学意义，或至少某一测试点呈现可重复的并有统计意义的阳性反应时记为阳性。（2）哺乳动物培养细胞染色体畸变试验细胞：哺乳动物原代或传代培养细胞。第32页/共39页

剂量：至少应用三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度为基准，否则应说明选定剂量的理由。标本制作时间：药物与细胞接触后应有适当时间，最好包括整个细胞周期，通常在药物处理后24和48小时制作染色体标本。代谢活化：应用适当的代谢活化法。对照组：用深媒作阴性对照，已知突变原作阳性对照。镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构的异常及多倍体的出现率。第33页/共39页结果判定：受试诱发的染色体畸变出现率较阴性对照有统计学意义的增加，并有剂量反应关系时记为阳性，同时标明异常细胞出现的频率和种类。（3）体内试验：一般选用微核试验，但作用于生殖系统的药物进行显性致死试验等。

1）啮齿类动物微核试验动物：一般用小鼠，每组10只性成熟动物（雌雄各半）或6至少只性成熟雄性动物。给药剂量及途径：至少采用三种剂量，最高剂量以1/2LD50为基准，腹腔和/或口服一次给药，必要时可连续给药。否则应说明选定剂量的理由。第34页/共39页对照组：用溶媒作阴性对照，已知能诱发微核阳性的物质作阳性对照。标本制作：给药后18－30小时或12－72小时处死动物，取骨髓，离心，涂片，Giemsa染色或吖啶橙染色。镜检：每只动物至少观察计数1000个多染