甾体激素类药物的鉴别

甾体激素类药物的鉴别第1页，共33页，2023年，2月20日，星期一第2页，共33页，2023年，2月20日，星期一鉴别，what&why?鉴别试验：是根据药物的分子结构、理化性质,采用物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。是药检工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物的杂质检查、含量测定。第3页，共33页，2023年，2月20日，星期一ABCD12345678910111213141516171819

基本结构甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。第4页，共33页，2023年，2月20日，星期一鉴别方法制备衍生物测熔点光谱法色谱法

呈色反应

官能团反应化学鉴别法UVIRTLCHPLC第5页，共33页，2023年，2月20日，星期一（一）与强酸的呈色反应

硫酸呈色反应应用最广1）操作简便2）反应灵敏3）操作条件不易掌握（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈色。如甲睾酮.）甾体激素类药物呈色H2SO4

H3PO4HClO4HCl（荧光）(甾体母核）第6页，共33页，2023年，2月20日，星期一1、C17–α–醇酮基（还原性）

能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.

适用：肾上腺皮质激素。(二)官能团的反应第7页，共33页，2023年，2月20日，星期一+H2O+CH3COOH++OH-醋酸泼尼松深红色的三苯甲鐕四氮唑盐第8页，共33页，2023年，2月20日，星期一2、C3–酮基和C20–酮基与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成腙。第9页，共33页，2023年，2月20日，星期一+HCl黄色3，20-双腙室温下长时间加热第10页，共33页，2023年，2月20日，星期一

适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。3.C17-甲酮基的呈色反应

能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。孕激素黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化钠蓝紫色淡橙色或不显色第11页，共33页，2023年，2月20日，星期一

适用：雌激素类药物。4.酚羟基的呈色反应

能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H++红色第12页，共33页，2023年，2月20日，星期一5、乙炔基沉淀反应

适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、炔诺酮）。

机理：↓HNO3++NaOH滴定，电位法指示终点第13页，共33页，2023年，2月20日，星期一

原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物来鉴别。6、水解产物的反应

适用：本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯香戊酸、己酸酯类药物，有特臭。

醋酸酯类药物：第14页，共33页，2023年，2月20日，星期一有机氟Fˉ有机破坏有机氯7、卤元素的呈色反应茜素氟蓝—硝酸亚铈硝酸—硝酸银呈蓝紫色

ClˉAgCl卤素在母核上：氧瓶燃烧法破坏如地塞米松磷酸钠卤素在侧链上：加热水解法破坏如丙酸倍氯他索第15页，共33页，2023年，2月20日，星期一△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基A环为3–OH苯环肾上腺皮质激素++雄性与蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鉴别反应UV、羰基试剂、氨基脲反应还原性（碱性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应UV、与重氮苯磺酸盐反应总结第16页，共33页，2023年，2月20日，星期一制备衍生物测定其熔点[原理]1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲.测定其熔点进行鉴别。2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，测定其熔点进行鉴别。[特点]繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采用。第17页，共33页，2023年，2月20日，星期一炔雌醇m.p.201℃黄体酮双肟m.p.238℃第18页，共33页，2023年，2月20日，星期一苯丙酸诺龙缩氨基脲m.p.178~185℃丙酸睾丸素m.p.150~156℃第19页，共33页，2023年，2月20日，星期一★紫外分光光度法[原理]：具有C=C-C=O共轭系统，

△４-3-酮～240nm和C=C-C=C共轭系统，苯环（B带：280nm，K带：220nm）1.可用规定波长处的吸收度鉴别如:曲安西龙2.吸收度的比值法。如:丙酸倍氯米松第20页，共33页，2023年，2月20日，星期一△４-3-酮～240nm第21页，共33页，2023年，2月20日，星期一★★红外分光光度法[必要性]1.许多重要的甾体激素药物紫外光谱非常相似，紫外光谱鉴别缺乏专属性。2.甾体激素药物化学结构上仅有微小的差异，也难以用化学鉴别法来区分。第22页，共33页，2023年，2月20日，星期一红外分光光度法的优势1.对样品无破坏,样品用量较少

2.特征性极强、信息量丰富:每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子提供了可靠的依据。第23页，共33页，2023年，2月20日，星期一1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羟基醇羟基1616cm-1苯环的骨架振动亚甲基、角甲基吸收带γCH苯环指纹区第24页，共33页，2023年，2月20日，星期一黄体酮第25页，共33页，2023年，2月20日，星期一薄层色谱法[特点]：简便、快速、分离效能高。主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。[应用范围]：甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含量测定前的分离和制剂稳定性的研究。第26页，共33页，2023年，2月20日，星期一[方法]：对照品法1.供试品点样通常需做前处理（如有机溶剂提取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。[显色方法]：多用荧光显色法或荧光淬灭法荧光显色第27页，共33页，2023年，2月20日，星期一高效液相色谱法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法一般在含量测定的同时进行鉴别.

要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。第28页，共33页，2023年，2月20日，星期一紫外光谱褶合变换可视化指纹谱鉴别拓展：----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹谱鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)褶合变换：是根据正交分析理论,对于任意一条光谱曲线,在某个邻域内(即其中的某一小段曲线)可以用正交多项式任意逼近,对于阶次相同的正交分量,可以通过改变变换窗口的大小获得不同的光谱,从而在不同阶次上可以得到一系列褶合变换光谱,相应的褶合光谱是同阶次的导数光谱的线性组。科学计算可视化技术：是数值计算中最直观最形象的方法,它从大量的原始数据中提取有效数据开始,通过映射生成绘制图像的几何原语,随之利用交互控制对几何原语选定帧合成、色彩、纹理及阴影等参数完成图像的绘制,最终显示出绘制的图像。第29页，共33页，2023年，2月20日，星期一第30页，共33页，2023年，2月20日，星期一研究方法：选取地塞米松等23种结构相近甾体激素，运用褶合变换挖掘紫外光谱的特征信息并通过科学计算可视化技术获取