DB50T 1367-2023 水质 磺胺类抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS13.060.01CCSZ10

DB50重重庆市市场监督管理局 发布2023050120230301重 庆 市 地 方 标 准DB50/T1367—2023水质磺胺类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法DB50/T1367DB50/T1367—2023DB50/T1367DB50/T1367—2023II质量保证和质量控制 8废弃物的处理 9附录A （规范性） 方法的检出限和测定下限 10附录B （资料性） 方法的精密度和正确度 11目  次前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1方法原理 1干扰与消除 1试剂和材料 1仪器和设备 2样品 2分析步骤 3结果计算与表示 7精密度和正确度 8IIII前 言本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由重庆市生态环境监测中心提出。本文件由重庆市生态环境局归口并组织实施。本文件主要起草单位：重庆市生态环境监测中心。本文件主要起草人：郑璇、田隽、李新宇、张文斌、李莉、邹家素、张晓岭、蹇川、张芹、赵丽、张君、邹素兰、孙静、郭志顺、唐思雨。水质磺胺类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法范围本文件规定了液相色谱－串联质谱法对水中18种磺胺类抗生素进行测定的方法。;间18规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。HJ91.1 污水监测技术规范HJ91.2 地表水环境质量监测技术规范HJ164 地下水环境监测技术规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。方法原理干扰与消除试剂和材料警告：本方法所使用的有机试剂对人体健康有害，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服。除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的超纯水。1氢氧化钠（NaOH）：分析纯。盐酸（HCl）：1mol/L，分析纯。甲醇CHOH甲酸（HCOOH）：色谱纯。甲酸溶液（0.05%）50μl（6.5）100ml甲酸/90ml（6.5）10ml（6.4）混合，摇匀。NaEDT标准贮备液：ρ=1.00g/L可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用甲醇（6.4）溶解，贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。混合标准中间液：ρ=100μg/ml移取适量标准贮备液（6.9）按需要用甲醇（6.4）稀释，中间液应于-10℃以下冷冻、避光保存不超过3个月。混合标准使用液：ρ=1.00μg/ml（参考浓度）将磺胺类抗生素混合标准中间液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻，避光保存不超过7天。1：ρ=1.00g/L内标1为磺胺二甲嘧啶-13C6半水合物（Sulfadimidine-13C6），可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质溶于甲醇（6.4）。贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。2：ρ=1.00g/L内标2为磺胺甲噁唑-13C6（Sulfamethoxazole-13C6）,可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质溶于甲醇（6.4）。贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。内标混合中间液：ρ=100μg/ml（参考浓度）移取适量内标贮备液1（6.12）和内标贮备液2（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀释成。内标混合中间液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过3个月或参照制造商的产品说明。内标混合使用液：ρ=10.0μg/ml（参考浓度）将内标混合中间液（6.14）按需要用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻，避光保存不超过7天。Nml/150mg。滤膜：0.22μ0.45μm6.18 氮气：纯度≥99.99%6.19 氩气：纯度≥99.99%仪器和设备液相色谱/串联质谱仪：配有电喷雾离子化源(ESI)。色谱柱：C18100mm×2.1mm1.9µm。浓缩装置：K-D固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。一般实验室常用仪器。样品2339.1.2 质谱参考条件正离子模式：ESI喷雾电压Sprayvoltage)：3000V毛细管温度：350℃仪器参考条件液相色谱参考条件流动相A：甲酸溶液(6.5)，流动相B：甲醇（6.4），梯度洗脱程序见表1，流速：200.0μl/min；柱温：35℃；进样量：10μL；具体参数见表1。表1 液相色谱流动相梯度洗脱程序采集与保存参照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相关规定采集样品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水样应充满采样瓶，不留液上空间。样品采集后应尽快进行分析。如暂不能分析，应在0℃～4℃避光保存，14天内完成萃取。样品制备将固相萃取柱（6.15）固定在固相萃取装置(7.4)上，分别用10ml甲醇（6.4）和10ml实验用水活化0.45μm1000ml1gNa2EDTA（6.8），用氢氧化钠（6.2）和盐酸（6.3）调节pH值为至6.0，水样以低于10ml/min（约3滴/秒～4滴/秒）的流速通过小柱，用10ml实验用水洗涤小柱，用氮气（6.17）吹干小柱，再用10ml甲醇（6.14）5.00μl，用甲酸/甲醇溶液（6.7）定容至1ml，经0.22μm滤膜（6.16）过滤，置于样品瓶中，待测。当样品体积为1000ml，浓缩后定容体积为1.0ml，进样体积为10μl，18种磺胺类抗生素的检出限为1ng/L～2ng/L，测定下限为4ng/L～8ng/L，详见附录A。空白样品的制备以实验用水代替样品，应按照样品制备（8.2）相同操作步骤，制备空白样品。分析步骤时间min流动相A%流动相B%0.009551.509552.0070304.0060404.5010908.0010908.5095510.5095544鞘气(N2)流速:45L/min辅助气(N2)流速:15L/min碰撞气(Ar)压力:200mPa选择反应监测(SRM)，具体参数见表2。表2 目标化合物的选择反应监测条件序号目标物母离子m/z子离子m/z碰撞能量eV锥孔电压V1磺胺嘧啶251.0156.0a1471108.122712磺胺噻唑256.1156.1a1678108.227783磺胺吡啶250.1156.1a1578184.215784磺胺甲基嘧啶265.0156.0a1570108.124705甲氧卞氨嘧啶291.2230.2a2291261.124916磺胺对甲氧嘧啶281.3156.1a1666108.224667磺胺甲噻二唑271.1156.1a1478108.223788磺胺二甲嘧啶279.3186.1a1566124.222669磺胺二甲嘧啶-13C6285.06186.0a1775124.1197510磺胺甲氧哒嗪281.3156.1a1666108.2246611奥美普林275.1259.0a2586123.1258612磺胺氯哒嗪285.07156.1a1475108.2237513磺胺甲恶唑254.1156.1a1579108.2257914磺胺甲噁唑-13C6260.0162.0a1481114.1238115磺胺-6-（间）甲氧嘧啶281.3156.1a1666108.2246616磺胺二甲氧哒嗪311.3156.1a1869108.2266917磺胺异恶唑268.2156.1a1369113.21469表2(续)序号目标物母离子m/z子离子m/z碰撞能量eV锥孔电压V18磺胺苯吡唑315.1158.1a2781160.1198119磺胺多辛311.3156.1a1869108.2266920磺胺喹恶啉301.1156.0a1769108.12069注：a为定量子离子9.1.3 仪器调谐按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-串联质谱仪进行仪器质量数和灵敏度校正，以确保仪器处于最佳测试状态。校准标准曲线的绘制（6.11）于甲酸/（6.7）5个浓度种磺胺类抗生素的质量浓度均分别为2.00μg/L5.00μg/L10.0μg/L20.0μg/L50.0μg/L、100μg/L（此为参考浓度），于每毫升标准系列中加入5.00μl内标混合使用液（6.15），使内标的质量浓度为50.0μg/L，贮存在棕色进样小瓶中，待测。yaxb (1)式中：x——目标组分浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；y——目标组分和内标物的峰面积（或峰高）比值与内标物浓度乘积的数值；a——校准曲线斜率的数值；b——校准曲线截距的数值。标准参考谱图在本标准推荐的仪器参考条件下，目标化合物的提取离子流色谱图见图1。5

图1 18种磺胺类抗生素和内标物的提取离子流色谱图测定样品测定6按照与绘制校准曲线相同的仪器分析条件进行测定。空白试验按与样品测定相同的仪器分析条件进行空白样品的测定。结果计算与表示定性分析每种被测组分选择1个母离子和22.5%；且待测样品谱图中，（Ksam,见式（Kstd,见式3）进行比较，偏差在表3规定的最大允许偏差范围内，则可判定为样品中存在对应的待测物。式中：

Ksam

A2100A1

................................................................................(2)7式中：ρ——样品中目标物的质量浓度的数值，单位为纳克每升（ng/L）；10007式中：ρ——样品中目标物的质量浓度的数值，单位为纳克每升（ng/L）；100011f 4)10.2 结果计算样品中的目标物的质量浓度按公式（4）式中：Kstd——标准样品中某组分定性子离子的相对丰度,单位为百分比（%）；Astd2——标准样品中某组分二级质谱定性子离子的峰面积（或峰高）；Astd1——标准样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积(或峰高)。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差std1AAstd2100 (3)stdKA1——样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积(或峰高)。Kstd%Ksam最大允许偏差%Kstd＞502020＜Kstd≤502510＜Kstd≤2030Kstd≤1050ρ1——从标准曲线上查得的样品中目标物的浓度的数值，单位为微克每升(μg/L)；f——稀释倍数。10.3 结果表示测定结果小数位数的保留与方法检出限一致，最多保留三位有效数字。精密度和正确度精密度6185.00ng/L、10.0ng/L20.0ng/L6实验室内相对标准偏差分别为：4.0%～12.2%，1.3%～13.8%，0.8%～10.4%;实验室间相对标准偏差分别为：5.3%～16.3%，4.4%～9.3%，3.9%～9.8%;重复性限范围为：0.71ng/L～0.88ng/L，1.38ng/L～2.64ng/L，2.13ng/L～4.30ng/L;再现性范围为：0.94ng/L～1.79ng/L，1.78ng/L～3.53ng/L，2.54ng/L～6.30ng/L。665.00ng/L10.0ng/L：实验室内相对标准偏差分别为：3.9%～29.5%和4.1%～29.5%；实验室间相对标准偏差分别为：12.5～22.4和10.9%～19.9%；重复性限范围为：2.27ng/L～3.75ng/L和3.09ng/L～5.57ng/L；再现性范围为：2.27ng/L～3.78ng/L和3.32ng/L～6.55ng/L。6610.0ng/L20.0ng/L：实验室内相对标准偏差分别为：4.0～12.2和4.5%～28.5%；实验室间相对标准偏差分别为：5.7%～16.3%和12.1%～19.7%；重复性限范围为：4.49ng/L～7.21ng/L和6.46ng/L～12.0ng/L；再现性范围为：5.21ng/L～7.77ng/L和7.30ng/L～12.9ng/L。正确度65.00ng/L、10.0ng/L，加标回收率分别为：70.6～13269.5～131610.0ng/L、20.0ng/L，加标回收率分别为：65.8～12971.9～129B。质量保证和质量控制空白分析每次分析至少做一个实验室空白，实验室空白中目标化合物的浓度应低于方法检出限。校准每批样品应建立标准曲线，相关系数应≥0.99。899每20（≤20个样品/批以内。平行样的测定每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应分析一个平行样品。平行样的相对标准偏差应控制在25%以内。基体加标每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应做1个基体加标，加标回收率应在50%～150%。13 废弃物的处理实验中产生的废物应分类收集、统一保管，并做好相应标识，依法委托有资质的单位进行处理。1010附 录 A（规范性）方法的检出限和测定下限本方法中目标化合物的检出限、测定下限和保留时间见表A.1。表A.1 方法的检出限、测定下限和保留时间序号化合物名称英文名称CAS号检出限ng/L测定下限ng/L保留时间min1磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-9284.782磺胺噻唑sulfathiazole72-14-0284.983磺胺吡啶sulfapyridine144-83-2285.084磺胺甲基嘧啶sulfamerazine127-79-7285.235甲氧卞氨嘧啶trimethoprim738-70-5285.486磺胺对甲氧嘧啶sulfameter651-06-9145.547磺胺甲噻二唑sulfamethizole144-82-1285.608磺胺二甲基嘧啶sulfadimidine57-68-1285.639磺胺甲氧哒嗪Sulfamethoxypridazine80-35-3285.7810奥美普林ormetoprim6981-18-6285.8711磺胺氯哒嗪sulfachloropyridazine80-32-0285.6512磺胺甲恶唑sulfamethoxazole723-46-6286.1413磺胺-6-（间）甲氧嘧啶sulfamonomethoxine1220-83-3286.2614磺胺二甲氧哒嗪sulfadimethoxine122-11-2286.3215磺胺异恶唑sulfafurazole127-69-5286.3616磺胺苯吡唑Sulfaphenazole526-08-9286.6617磺胺多辛sulfadoxine2447-57-6286.7918磺胺喹恶啉sulfaquinoxaline59-40-5286.87DB50/T1367DB50/T1367—2023DB50/T1367DB50/T1367—20231111附 录 B（资料性）方法的精密度和正确度本方法的重复性、再现性等精密度指标见表B.1～表B.3。表B.1 方法的精密度(空白加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1磺胺嘧啶5.003.736.3～11.210.00.881.3210.010.61.3～8.27.32.012.8420.023.90.8～9.26.03.915.362磺胺噻唑5.003.554.9～10.79.00.821.1610.09.585.5～11.47.72.062.7920.021.03.5～8.28.53.455.893磺胺吡啶5.003.585.2～10.711.90.771.3810.011.22.5～10.97.52.203.1020.014.83.0～6.43.92.132.544磺胺甲基嘧啶5.003.616.3～9.910.00.801.2510.011.12.4～9.68.42.013.1820.020.92.0～5.98.02.485.165甲氧卞氨嘧啶5.003.616.3～9.910.00.801.2510.010.86.1～12.85.42.542.8220.022.23.0～8.77.14.305.896磺胺对甲氧嘧啶5.003.654.0～8.912.80.721.4710.08.423.8～10.14.61.531.7820.016.92.8～8.76.92.904.207磺胺甲噻二唑5.003.686.0～8.810.80.781.3310.08.733.5～11.59.31.662.7420.022.01.9～7.07.62.685.318磺胺二甲基嘧啶5.003.847.0～9.35.70.861.0010.011.44.1～7.85.51.992.5220.023.33.1～4.88.12.555.809磺胺甲氧哒嗪5.003.484.9～12.211.00.731.2610.011.25.4～10.19.32.203.5320.020.62.5～7.97.52.745.011212表B.1 (续）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L10奥美普林5.003.615.8～10.013.80.851.6010.011.85.3～12.67.22.643.3920.018.92.7～9.99.83.946.3011磺胺氯哒嗪5.003.676.8～9.87.00.801.0310.011.13.8～13.86.82.603.1920.016.44.4～9.66.33.264.1312磺胺甲恶唑5.003.615.2～9.010.10.731.2210.010.12.0～8.67.41.812.6620.015.13.7～8.66.63.073.9713磺胺-6-（间）甲氧嘧啶5.003.746.5～9.58.10.821.1310.011.02.5～9.74.61.932.2620.018.63.2～7.77.43.104.8014磺胺二甲氧哒嗪5.003.666.5～11.49.60.841.2510.08.622.8～8.98.31.552.4520.016.62.5～7.93.92.793.1215磺胺异恶唑5.003.547.7～10.716.30.861.7910.011.23.6～8.84.41.842.1820.017.02.9～8.54.43.333.6916磺胺苯吡唑5.003.405.4～8.611.80.711.2910.011.45.2～10.35.82.462.9120.017.73.2～10.44.53.553.8517磺胺多辛5.003.367.3～10.311.00.801.2710.08.644.8～7.47.71.452.2820.022.52.2～7.15.03.464.5518磺胺喹恶啉5.003.775.8～10.414.20.761.6510.08.525.0～6.86.91.382.0720.018.54.6～8.44.83.564.101313表B.2 方法的精密度(地表水样品加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1磺胺嘧啶5.004.315.7～25.313.92.272.2710.07.994.7～23.719.93.243.652磺胺噻唑5.004.7410.9～28.919.52.822.8210.08.956.6～19.914.34.175.053磺胺吡啶5.004.416.3～28.618.42.542.5410.08.485.8～24.111.53.223.324磺胺甲基嘧啶5.006.1418.2～27.221.63.753.7510.011.65.9～25.713.34.915.295甲氧卞氨嘧啶5.005.727.6～29.315.72.792.7910.012.16.4～15.611.23.814.516磺胺对甲氧嘧啶5.004.797.3～22.915.62.382.9110.010.16.2～26.712.43.974.937磺胺甲噻二唑5.005.364.3～26.616.62.842.8410.09.274.1～27.516.75.236.058磺胺二甲基嘧啶5.004.3218.1～28.622.12.722.7210.08.379.2～20.416.34.114.399磺胺甲氧哒嗪5.004.618.5～29.817.42.572.5710.08.853.9～26.111.23.945.4010奥美普林5.005.443.9～24.915.32.473.1510.09.826.1～27.413.94.086.0811磺胺氯哒嗪5.005.508.9～22.314.62.352.3510.011.55.2～23.811.94.424.7612磺胺甲恶唑5.005.337.4～29.316.52.923.7810.011.011.4～29.513.24.724.7513磺胺-6-（间）甲氧嘧啶5.005.334.3～29.118.32.832.8310.09.884.1～29.417.65.576.5514磺胺二甲氧哒嗪5.004.3820.4～29.522.43.323.3210.08.559.2～24.716.94.304.5015磺胺异恶唑5.005.313.9～26.219.62.972.9710.010.06.2～26.616.35.126.4316磺胺苯吡唑5.004.647.4～18.016.11.602.3510.08.734.3～22.510.93.094.4517磺胺多辛5.005.205.6～20.712.52.082.4910.08.604.1～23.911.83.234.0918磺胺喹恶啉5.005.528.5～27.417.22.922.9710.011.45.0～23.911.94.354.761414表B.3 方法的精密度(废水样品加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1磺胺嘧啶10.011.76.3～11.210.07.217.2120.022.812.2～18.515.09.769.762磺胺噻唑10.010.14.9～10.79.07.017.0120.021.48.3～22.815.89.7212.73磺胺吡啶10.010.65.2～10.711.96.987.2420.021.97.2～17.512.88.378.634磺胺甲基嘧啶10.09.716.3～9.910.06.506.8320.019.810.2～28.421.012.013.05甲氧卞氨嘧啶10.010.26.3～9.910.06.247.0720.022.34.5～18.212.58.359.646磺胺对甲氧嘧啶10.010.44.0～8.912.85.086.9620.020.65.2～19.514.19.7911.67磺胺甲噻二唑10.010.26.0～8.810.84.625.8620.017.85.1～26.115.07.899.278磺胺二甲基嘧啶10.09.077.0～9.35.75.215.4620.017.08.5～15.713.26.467.309磺胺甲氧哒嗪10.09.024.9～12.211.04.965.4720.017.55.6～28.516.99.199.1910奥美普林10.08.225.8～10.013.86.167.2720.018.28.3～20.516.69.319.8111磺胺氯哒嗪10.08.716.8～9.87.05.146.3020.017.611.6～24.519.710.310.312磺胺甲恶唑10.010.55.2～9.010.15.456.3420.021.96.5～27.514.810.410.613磺胺-6-（间）甲氧嘧啶10.09.896.5～9.58.15.805.9320.021.67.3～22.814.09.589.9814磺胺二甲氧哒嗪10.09.476.5～11.49.65.976.1220.017.39.5～17.014.37.018.0315磺胺异恶唑10.010.77.7～10.716.36.446.6220.021.67.4～21.612.47.8810.916磺胺苯吡唑10.09.255.4～8.611.84.495.2120.018.84.2～21.814.88.298.8817磺胺多辛10.010.27.3～10.311.06.667.7820.021.06.5～16.612.18.1910.918磺胺喹恶啉10.010.65.8～10.414.26.456.4520.022.26.8～20.212.88.198.951515本方法的正