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文档简介

烟草生理学实验第1页，共13页，2023年，2月20日，星期日实验3

烟叶可溶性糖的测定【蒽酮法】

14第2页，共13页，2023年，2月20日，星期日【实验目的】植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习定量测定烟叶可溶性糖含量的方法。13第3页，共13页，2023年，2月20日，星期日【实验方法】蒽酮法

13第4页，共13页，2023年，2月20日，星期日【原理】糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行比色。

12第5页，共13页，2023年，2月20日，星期日【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml1支，1ml2支；记号笔；吸水纸适量。9第6页，共13页，2023年，2月20日，星期日【试剂】

1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。2．浓硫酸：比重1.84

第7页，共13页，2023年，2月20日，星期日【实验方法】1．标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1加入溶液和水。

8第8页，共13页，2023年，2月20日，星期日然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。第9页，共13页，2023年，2月20日，星期日2．可溶性糖的提取取新鲜烟草叶片，擦净表面污物，剪碎混匀（尽量剪碎），称取0.10～0.30g，共3份。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。第10页，共13页，2023年，2月20日，星期日3．显色测定吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，分别加入蒽酮乙酸乙酯试剂、浓硫酸溶液，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。第11页，共13页，2023年，2月20日，星期日4．计算可溶性糖的含量由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。可溶性糖含量(mg/g)=式中C－标准方程求得糖量(μg)a－吸取样品液体积(ml)V－提取液量(ml)n－稀释倍数

W－组织重量(g)第12页，共13页，2023年，2月20日，星期日作

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