植物组织中丙二醛含量 蛋白质含量及过氧化氢酶活力的测定

《生物化学》实验四植物组织中丙二醛含量、蛋白质含量及过氧化氢酶活力的测定学生：蔺秀琴学号：0812120指导老师：张芬琴河西学院生命科学与工程系08级<1>班甘肃张掖734000摘要：本文分别以三叶草和草坪草的叶片为材料，分别采用丙二醛法、考马斯蓝法及酶活力测定的方法对三叶草及草坪草叶片内丙二醛含量、蛋白质含量及过氧化氢酶活力进行对比测定。实验结果表明：草坪草内丙二醛含量高于三叶草的，且都在532nm处吸光值最大；三叶草叶片内蛋白质含量高于草坪草叶片的；三叶草叶片酶活力大于草坪草叶片的。以上为我们充分利用其各个器官提供有力依据。关键词：三叶草草坪草丙二醛含量蛋白质含量过氧化氢酶活力对比引言：丙二醛(MDA),无色针状晶体，易潮解，由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而成，主要用于医药中间体，感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。蛋白质由C、H、O、N组成，一般蛋白质可能还会含有P、S、Fe、Zn、Cu、B、Mn、I等。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，都是由20种标准氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新并时刻处于动态平衡中。酶活力（enzymeactivity）一定条件下，酶活力的大小可用在酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。材料与方法1.1材料采集：三叶草与草坪草分别取其叶片于自来水中冲洗，然后用吸水纸将水吸干待用。1.2试剂：0.5%硫代巴比妥酸溶液20%三氯乙酸（TCA）1mg/ml牛血清蛋白溶液考马斯亮蓝溶液0.01mol/ml磷酸缓冲液0.02mol/ml愈创木酚一定浓度过氧化氢溶液1.3方法步骤：1.31三叶草丙二醛提取：分别取0.5克三叶草与草坪草叶片于研钵中，加石英砂和1ml蒸馏水，研成匀浆，转移到试管中，再用1.5ml蒸馏水分两次洗研钵，合并提取液→加入2.5ml0.5%硫代巴比妥酸溶液,摇匀→沸水加热10min(自有气泡开始计时)，冷却至室温→离心15min取上清液量其体积V→以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白对照分别测其在450nm、532nm、600nm下的吸光度。1.32蛋白质含量的测定：如（1）制的提取液后，分别加入5ml缓冲液，再于12000r/min分离提取上清液，并量上清液体积，用于蛋白质含量测定和酶活力测定。如下表配置好溶液后摇匀，5minhou后以1号管为空白对照,在595nm处测定OD值。表1.321溶液标准曲线的测定及溶液OD值试管号123456 78100ug/ml标准蛋白（ml）0.00.20.40.60.81.0 样品（ml）0.20.20.15mol/LNaCl（ml）10.80.60.40.200.80.8考马斯亮蓝试剂（ml）5.05.05.05.05.05.05.05.0A595nm

0.0.1370.2880.3600.5240.604图1.321标准蛋白质含量及吸光值曲线图1.322三叶草与草坪草蛋白质含量1.33过氧化氢酶活力的测定：如表2所示读取470nm处吸光值。表1.331溶液配置及其吸光值试剂对照管样品（三叶草）样品（草坪草）0.01mol/ml磷酸缓冲液/ml2.42.32.30.02mol/ml愈创木酚/ml0.50.50.5提取酶液/ml00.10.1过氧化氢/ml0.10.10.1混合后读出OD值，3min后再读出OD值，作差OD值差00.9270.2362结果与分析1.31结果分析：532nm处测得吸光值最大；草坪草叶片内的丙二醛含量高于三叶草的。因为草坪草机体内纤维素含量远大于三叶草的而且丙二醛在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸反应生成红棕色的三甲川，其最大吸收波长在532nm。1.32结果分析：由图1.322可见，三叶草蛋白含量大于草坪草的，原因可能是叶是光合作用、呼吸作用的主要器官。宽大肥厚的三叶草叶片比窄而薄的草坪草叶片易合成并储存蛋白质。图1.331三叶草与草坪草酶活力1.33由图1.331可见，三叶草酶活力大于草坪草的，原因可能是三叶草的蛋白质含量高于草坪草的。3讨论机体能通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂质过氧化的分解产物引起细胞损伤。故丙二醛的含量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞损伤的程度。结果显示草坪草丙二醛含量高于三叶草的，故三叶草细胞受损伤的程度大于草坪草的。酶活力大小的指标是酶的量，温度降低到4℃是酶活力受到抑制，故温度是调节酶活力的因素之一。过氧化物酶与呼吸作用光合作用以及生长素的氧化都息息相关，是活性较高的一种酶。它催化H2O2分解成H2O和O2使得H2O2不至于和O2在铁缀合物作用下生成非常有害的-OH。过氧化物酶是过氧化物酶体的标志酶，过氧化物酶（CAI）是一种酶类清除剂，是生物防御体系的关键酶之一。测定这种酶活力