法医物证检验

法医物证检验第1页，共69页，2023年，2月20日，星期一法医物证检验

（Testofforensicbiologyevidence）内容：第一节概述第二节人类遗传标记第三节亲权鉴定第四节生物性检材的一般检验与个人识别第2页，共69页，2023年，2月20日，星期一教学要求：1.掌握：法医物证（检验）的概念、任务及意义；亲权鉴定的概念、鉴定原理和鉴定要点；血痕的检验程序和个人识别。2.熟悉：生物性检材的发现、提取、包装和送检的基本原则；精斑、唾液斑等生物性检材的检验程序和个人识别。ABO血型和STR基因座遗传标记及其检测方法；亲子鉴定的类型、标准。第3页，共69页，2023年，2月20日，星期一第一节概述一、物证的概念、分类

1.物证：凡对案件的真实情况具有证明作用的物品和痕迹。2.分类：（1）生物性检材：人体或动物的组织器官、各种体液、分泌液、排泄物及其斑痕等。（2）人体指纹、掌纹、唇纹、足印、鞋印以及轮胎印痕等。（3）作案工具和致伤物。（4）各种染料、油墨、纸张、油漆、墨水以及化学物质。（5）文书如案卷、病例、医师证明、遗书及信件。第4页，共69页，2023年，2月20日，星期一二、法医物证的概念、种类1.法医物证：指凡是能证明案件真实情况，并且可为侦察提供线索、为审判提供证据、揭露案件性质的生物物品。法医物证检验：凡对与案件有关的生物性检材进行专门检验，判断它在该案件能否作为证据的过程。包括案件的委托、受理与检验。2.种类：血液（斑）、唾液（斑）、精液（斑）、毛发、骨骼、阴道分泌物（斑）、尿液（斑）、汗斑、粪便、羊水、恶露、乳汁（斑）、鼻涕（斑）、痰液（斑）、人体组织、呕吐物。第5页，共69页，2023年，2月20日，星期一SourcesofBiologicalEvidenceBlood(stain)Semen(stain)SalivaUrineHairTeethBoneTissue第6页，共69页，2023年，2月20日，星期一三、法医学物证检验的任务、意义任务：主要是个体识别及亲权鉴定意义：1.为刑事案件的侦破提供线索。2.为民事案件的审判调解提供科学依据。

第7页，共69页，2023年，2月20日，星期一四、法医物证的寻找、提取、包装及送检的原则

1.寻找：血痕、精斑、毛发、唾液、其他组织；2.提取：足量、空白对照、结合案情；3.包装：晾干、标记、分门别类；4.送检：及时（低温保存）、委托书；检验程序：委托书、制定检验方案、提交鉴定报告。种类鉴定-种属鉴定-遗传标记检测及分析-其他检查第8页，共69页，2023年，2月20日，星期一第二节人类遗传标记

(humangeneticmarker)遗传标记（geneticmarker）：个体的单位遗传性状作为标志用以法医物证分析时，这种遗传性状称为遗传标记。由遗传决定，并能够以一定的规律从亲代传给下一代的形态学、生理学及分子生物学特征。如：(1).ABO血型是一种遗传性状，将人类简单地分为A、B、AB、O等4种类型。(2).TH01基因座是一种DNA片段长度遗传性状，可将人类分为28种基因型。一、几个基本概念：第9页，共69页，2023年，2月20日，星期一2.遗传多态性（geneticpolymorphism）：在随机交配无血缘关系的群体中，个体的一种遗传性状存在两种以上具有相对差异类型的现象。DNA多态性（DNApolymorphism）：碱基在生物进化过程中，由于碱基突变、缺失、插入或置换，导致DNA分子在人群间存在差异。第10页，共69页，2023年，2月20日，星期一3.基因(gene)：染色体上一段特定的DNA片段。基因座/位点(locus)：基因在染色体上的特定位置。等位基因(allele):

一个基因座上的基因存有DNA一级结构差异并导致产生具有相对差异的遗传性状，这种有差异的基因互称等位基因。基因型(genetype)：基因座上成对等位基因的组成。表型（phenotype）：通过一定手段观察到的个体性状。第11页，共69页，2023年，2月20日，星期一

ABO血型基因座定位在9q34。由3个等位基因A、B、O组成，基因型组成6种：AA、AB、BB、AO、BO和OO，表型则有A、B、AB和O共4种。TH01基因座定位于11号染色体。有5、6、7、8、9、10等6个等位基因。基因型应为上述等位基因任意2个的组合。第12页，共69页，2023年，2月20日，星期一二、遗传标记的分类1.产物水平：红细胞血型（ABO）、白细胞血型（HLA）、红细胞酶型、血清型等。第13页，共69页，2023年，2月20日，星期一ABO血型分类O型血人的红细胞含有大量的H抗原，但H抗原并不是O基因而是H基因的表达产物，因为O基因为无效基因。

第14页，共69页，2023年，2月20日，星期一1.抗原（ABH）为糖酯，稳定性好，对外界物理、化学因素抵抗力强。2.存在分泌型和非分泌型。3.天然抗体有规律地存在不同血型个体血清中。

4.除血液外，其他组织细胞（如毛发等）和分泌液（唾液、精液等）只含有ABO血型抗原，别的血型抗原尚未发现，或含量甚微。5.试剂已标准化，易得，技术容易掌握。不足：只能给予否定的结论，而不能给予肯定的结论。ABO血型法医学应用意义第15页，共69页，2023年，2月20日，星期一2.DNA分子水平遗传标记（1）按来源分：染色体DNA（核DNA）、线粒体DNA（mtDNA）。（2）按发展历程分：三代DNA遗传标记

第一代：限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)。第二代:扩增片段长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphismAmp-FLP)可变数目串联重复序列（variantnumbertandemrepeat,VNTR)

:小卫星（minisatellite)和微卫星/短串联重复序列，shorttandemrepeats,STRs），

第三代:单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)；第16页，共69页，2023年，2月20日，星期一DNA指纹(DNAfingerprint)：某个体基因DNA序列的个人标志性特征，如同人的指纹。限制性片段长度多态性(RFLP)第17页，共69页，2023年，2月20日，星期一第18页，共69页，2023年，2月20日，星期一小卫星和微卫星DNA的区别：

微卫星DNA小卫星DNA存在部位染色体任何部位染色体近端粒和着丝粒区重复单位长度2～6bp10～100bp重复次数10～60次几次到几百次总序列长度约200bp0.5～30kb长度和序列多态性以长度多态性为主相对来说序列多态性较明显存在数量很多，整个人基因组5～10万有限，有些染色体尚未见到第19页，共69页，2023年，2月20日，星期一长度多态性：核心序列串联重复的数目不同；序列多态性：串联重复的数目相同，但核心序列的组成不同。第20页，共69页，2023年，2月20日，星期一三、选择遗传标记的原则1.

表现为简单的遗传性状，遗传方式明确。常染色体DNA遵循孟德尔遗传定律，Y-DNA（父系遗传），mtDNA（母系遗传）。2.选择多态性高的遗传标记，并已积累了大量的群体遗传调查资料。3.不易受疾病、环境因素、年龄及基因的相互作用效应等影响。4.在人群中的突变率低。5.检测方法稳定可靠、快速、简便。

常用STR遗传标记。第21页，共69页，2023年，2月20日，星期一人类基因组中广泛存在，数目众多，是个体识别的丰富资源；片段长度短(约200bp)，易于扩增，适用于陈旧、降解生物检材的DNA分析；灵敏度高，所需检材量少，适用于微量、超微量检材的鉴定；等位基因间片段长度差异小(2-6bp)，优先扩增现象不明显；STR基因座扩增片段相近，扩增条件类似，能够进行多个位点的复合扩增，一次检验能获得较多的多态性信息，节省检材和试剂，提高工作效率；更加满足法医物证检验的要求。分型程序简便、明确、规范，有利于实现分型标准化、自动化和DNA数据库的建立。STR适用于法医学检验的特点和优点第22页，共69页，2023年，2月20日，星期一CSF1POD5S818D21S11TH01TPOXD13S317D7S820D16S539D18S51D8S1179D3S1358FGAVWAAMELAMELSex-typingPositionofForensicSTRMarkersonHumanChromosomesPentaEPentaDD2S1338D19S433美国联合DNA检索系统

（CODIS）的13个STRs第23页，共69页，2023年，2月20日，星期一四、检测方法和步骤

（以STR-PCR为例）DNA提取STR-PCR

PCR产物检测：电泳数据分析

第24页，共69页，2023年，2月20日，星期一酚/氯仿法：稳定，纯度高，精斑、骨骼，双链DNA；繁复，试剂毒性；Chelex-100法：简单快速，检材用量少，一管到底，单链DNA；纯度不高，保存时间短；碱裂解法：简捷快速，灵敏，高效，经济。注意：理解各种方法原理，根据检材情况灵活运用各种提取方法。1.DNA提取方法第25页，共69页，2023年，2月20日，星期一2.聚合酶链式反应扩增DNA

PolymeraseChainReaction(PCR)反应体系：模板DNA引物对缓冲液Mg2＋DNA聚合酶dNTP第26页，共69页，2023年，2月20日，星期一In32cyclesat100%efficiency,1.07billioncopiesoftargetedDNAregionarecreated第27页，共69页，2023年，2月20日，星期一多STR基因座复合扩增复合扩增（multiplexamplification）：把二个或二个以上的基因座放在同一个反应管中同时扩增，叫复合扩增。优点：高效，经济，快速复合体系基因座数目的确定：银染系统：各基因座等位基因片段范围不重叠多色荧光检测系统：不同颜色荧光染料标记可以有重叠。第28页，共69页，2023年，2月20日，星期一3.电泳+-DNA-DNA-DNA-DNA-DNA-原理：琼脂糖电泳：EB染色－紫外分析法。聚丙烯酰胺凝胶电泳：硝酸银染色－标准DNA分子量/等位基因阶梯分析、

荧光标记ABI377电泳－GeneScan软件分析。毛细管电泳：荧光标记ABI310/3100/3130/3130x-GeneMapperID软件分析。第29页，共69页，2023年，2月20日，星期一第30页，共69页，2023年，2月20日，星期一银染系统复合扩增体系第31页，共69页，2023年，2月20日，星期一美国应用生物系统公司3130和3130xl基因分析仪ABI377测序仪第32页，共69页，2023年，2月20日，星期一

©2002AcademicPress

3100/3130毛细管电泳图谱第33页，共69页，2023年，2月20日，星期一D8S1179D21S11D7S820CSF1POD3S1358TH01D13S317D16S539D2S1338D19S433D18S51TPOXVWAAMELD5S818FGAGS500LIZsizestandard6FAM(blue)VIC(green)NED(yellow)PET(red)LIZ(orange)AmpFlSTR®Identifiler™第34页，共69页，2023年，2月20日，星期一AmpFlSTR®Identifiler™Allelicladder第35页，共69页，2023年，2月20日，星期一GeneMapperIDsoftware3.0version软件分型结果第36页，共69页，2023年，2月20日，星期一第三节亲权鉴定

（identificationindisputedpaternity）

一、概述1.概念：狭义的是指利用医学、遗传学、免疫学、生物化学和分子生物学等技术对有争议的父母与孩子之间是否存在亲生关系（生物学关系）进行鉴定的专门技术，又称亲子鉴定。广义的还包括对被检验者之间是否存在血缘关系（祖、孙、叔、侄、兄弟姐妹）。第37页，共69页，2023年，2月20日，星期一（1）在民事纠纷中可以有效的解决：婚生或非婚生子女抚育责任或财产继承；产院调错婴儿的纠错；（2）在刑事案件中可以有效的解决：强奸致孕罪犯的认定；碎尸案中的身源认定；杀婴、拐骗儿童等案件中孩子身源的认定；（3）在行政事务工作中可以有效的解决：移民涉外公证；失散家庭成员的认亲；计划外生育责任人的确认及其子女户籍的注册；（4）其他：重大灾难事故尸源的鉴定等。2.亲权鉴定的意义和类型第38页，共69页，2023年，2月20日，星期一三岁男童状告高峰索要抚养费

第39页，共69页，2023年，2月20日，星期一吉林通化串子案孙超赵达第40页，共69页，2023年，2月20日，星期一第41页，共69页，2023年，2月20日，星期一同胞鉴定：同卵双生DNA鉴定破解陌生人相貌相同之谜

第42页，共69页，2023年，2月20日，星期一911事件：五角大楼180多人遇难，连同世贸大厦内的工作人员等共有6000余人死亡及失踪。

第43页，共69页，2023年，2月20日，星期一第44页，共69页，2023年，2月20日，星期一3.亲权鉴定的依据和原理依据：（1）遗传特征的分析：ABO血型、DNA多态性（2）妊娠期限的检查：（3）性交及生育能力的鉴定：原理：孟德尔遗传定律（父母子－标准三联体）：（1）孩子的一对等位基因必定是一个来自父亲，一个来自母亲；（2）孩子不可能带有双亲均没有的等位基因；（3）除非父母双方均匀同一基因，否则子女不会是纯合子；（4）父母之一若是纯合子，则子女必得其一。第45页，共69页，2023年，2月20日，星期一第46页，共69页，2023年，2月20日，星期一FamilyInheritanceofSTRAlleles(D13S317)FatherChild#1Child#2Child#3MotherPCRproductsize(bp)111411121481412128第47页，共69页，2023年，2月20日，星期一二、鉴定结果的评估采用13个STR位点检验系统1.判断标准：

肯定标准：检测系统遗传标记（利用常染色体STR基因座），符合孟德尔遗传规律，父权排除概率>=0.9995或父权指数>=2000。

否定标准：检测系统中有3个或3个以上的STR基因座的遗传违反了孟德尔遗传规律，可以否定亲生关系。单亲案例：不能轻易作出肯定的结论。第48页，共69页，2023年，2月20日，星期一2.生物统计学指标（1）父权排除概率（excludingprobabilityofpaternity,EPP）：指通过某一个遗传标记系统的检测，在100个被误控的可疑父中能将不是生父的被控父亲排出的概率。

是衡量一个遗传标记系统排除非父能力的客观标准；遗传标记系统的多态性越高，排除非亲生父亲的效能就越高。（2）父权指数（paternityindex,PI）：又称亲子关系指数，是假设父提供生父基因成为孩子生父的可能性与随机男子提供生父基因成为孩子生父可能性的比值。

表示假设父为孩子生父的机会比随机男子为孩子生父的机会大多少倍，是一项重要的亲子关系参数。

PI＝X/YX：假设父作为生父应提供所需基因的几率；Y：随机男子作为生父应提供所需基因的几率；第49页，共69页，2023年，2月20日，星期一三、鉴定要点1．遗传标记的选择应具有的条件2．要充分注意遗传变异的影响。3．采用标准通用的实验方法，不同的实验室间具有可比性。4．足够的检测遗传标记数量，父权排除概率达0.9995。5．充分了解有关情况：如是否患有特殊疾病，近期是否接受过输血，有无接受器官移植等。第50页，共69页，2023年，2月20日，星期一第四节生物性检材的一般检验与个人识别一、个人识别（individualidentification)1．概念：依据活体、尸体、遗骸、影像、皮纹等特征确认某个体的身源。2.方法：法医牙齿学、法医人类学、法医物证学等。

法医物证学是依靠对生物学检材与关系人遗传标记的检测结果对比来实现的。遗传标记的型别不同可以排除同一性；足够的遗传标记的型别相同则可以肯定同一性。第51页，共69页，2023年，2月20日，星期一3.个人识别的意义在现场或受害人身上提取的生物学检材的检测结果与犯罪嫌疑人具有同一性的，可以为案件的侦破、罪犯的确定提供有力的证据。在现场或受害人身上提取的生物学检材的检测结果与犯罪嫌疑人不具有同一性的，可解除嫌疑，保护了有关人员的合法权益，避免冤案、错案的发生。第52页，共69页，2023年，2月20日，星期一4.识别要点遗传标记的选择应具有的条件：（1）个人识别能力高；（2）多态性频率分布在不同地区及不同民族中均较高；（3）在相应地区、民族中的群体遗传数据已建立。根据案情选择遗传标记。用于检测的遗传标记的数量要足够，实验结果可以达到同一认定的水平。避免对检材的污染。第53页，共69页，2023年，2月20日，星期一5.评价指标个体识别力（discriminationpower,Dp）：检测某一多态性位点能将随机2个人区别开来的能力。

是衡量某一遗传标记在个人识别中的应用价值。匹配概率/偶合率（probabilityofmatch，Pm）：同一种基因型或单倍性在随机2个个体中同时出现的概率。是衡量某个基因座或某一套DNA分型技术区分随机2个个体能力的一种表示方法。偶合率越小，说明假定这两份检材是来自同一个体，其结论可能是错误的机会就越小。第54页，共69页，2023年，2月20日，星期一二、血痕检验（bloodstaintest)1.检验目的是否血痕是人血还是动物血血痕的个人识别与案情有关的其他问题第55页，共69页，2023年，2月20日，星期一2.血痕检验程序肉眼检验：血痕的部位、颜色、形状、范围；预试验：联苯胺试验(+)；确证试验：血色原结晶试验；种属鉴定：环状沉淀反应（抗人血红蛋白血清）；遗传标记检测：ABO血型、DNA多态性；其他检验：出血时间、性别鉴定等。第56页，共69页，2023年，2月20日，星期一确证试验(ConclusiveTest)常用方法：血色原结晶试验结果：桃红色的星状菊花状或针状结晶第57页，共69页，2023年，2月20日，星期一检材NS阳性对照1／1000空白对照动物血1／200血痕血痕的种属鉴定：环状沉淀试验第58页，共69页，2023年，2月20日，星期一第59页，共69页，2023年，2月20日，星期一三、精斑检验（SeminalStainTest）案情：强奸、轮奸、卖淫嫖娼、猥亵；怀疑奸杀；婚外性关系；性功能不全离婚；检材：

裤头、卫生纸、床单、毛巾、阴道拭子、安全套等；鉴定目的：是否精斑、个人识别、生育能力鉴定；检验程序：肉眼检查：颜色、形态、数量、分布、陈旧度等；预试验：酸性磷酸酶试验(+)；确证试验：精子的检出、抗人精环状沉淀反应；精斑的个人识别：第60页，共69页，2023年，2月20日，星期一HE染色顶部不着色蓝颈红尾一个完整的精子、数个典型的精子头第61页，共69页，2023年，2月20日，星期一精斑的个人识别1.ABO血型检测：人类80%以上个体为ABO分泌型，分泌型精液中含有大量可溶性ABH物质，可以采用中和法检测。2.DNA遗传标记：常染色体STR（二次消化去除女性成分），Y-DNA第62页，共69页，2023年，2月20日，星期一Y-DNA遗传特点及其法医学应用遗传特点：95%不与X染色体发生同源重组，呈单倍型父系遗传。法医学应用：混合斑中男性成分的鉴定和个体识别；父系家族成员的亲权鉴定。第63页，共69页，2023年，2月20日，星期一NSampleDYS393DYS19DYS389ⅡDYS390DYS391DYS3851嫌犯甲131729231012/18嫌犯乙121630231012/19精斑121630231012/192嫌犯131531231013/17卫生纸131531231013/172例强奸案Y-STR分型结果第64页，共69页，2023年，2月20日，星期一“Y染色体”曾断美国悬案1802年，美国第三任总统托马斯·杰弗逊在丧偶后与黑人女管家海敏斯有染，且有一私生子伊斯通。尽管当时舆论沸沸扬扬，但由于无法证明而不了了之，成为一桩200年来的悬案。

1998年，美国一分子遗传学实验室对杰弗逊总统原女佣萨利·海明斯的５名男性