细胞生物学研究方法

2-细胞生物学研究方【厦大1994年填空-3】【厦大1996年填空-3】【厦大1994年填空-3】【厦大1996年填空-3】细胞培养技术是一种从机体内过程的方法。19953】大致可分为原代培养和传代培养两种方【厦大2011年判断-10】正常细胞培养中除了培养基外常加入，主要是因为中氨基酸。(错,小牛 【厦大1994年问答题-3】细胞工程是什么？它包括哪些研究内容？举例说明在实践中的应用。（16 【厦大2011年问答-5】请简述单克隆抗体技术的原理:骨髓瘤细胞在体外培能大量无限增殖,但不能分泌特异性抗体；而看抗原免疫细胞的B能大量无限增殖,但不能分泌特异性抗体；而看抗原免疫细胞的B经过HAT培养基(含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺,嘧啶核苷(T))中 瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断,又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过。只有融合细胞具有转移酶才能在HAT培养基中存活和增殖。经过克实验方案:抗原提纯与动物免疫-骨髓细胞及饲养细胞的-细胞融合-筛选融合细胞-单克隆抗体的和冻存-单克隆抗体的纯化【厦大2010年判断-19从动物有机体取出细胞后,立即进行培养称为原代培养【厦大2010年判断-6】从肺得到的成纤维细胞可在体外条件下传50代,20,主要是因为细胞增殖能力是受细胞限制的。(错,与供体的有关,并不是细胞的)【厦大1995年填空-2】【厦大1999年填空-1】光学显微镜的分辨力是指区分开两个质点间的最小距离，它与光源的波长(正比)、物镜镜口角(反比)和介质的折射率(反比)0.2um『肉眼-0.2mm;电镜-0.2nm』薄切片厚度的十分之一，因而切得越薄，中的反差越大。（错,前半句对,的反差与染色有关,注意切的越薄电镜的分辨率越好也是不对的【厦大2009年判断-16】扫描电子显微镜可用于观察细胞表面的立体形貌,同时【厦大2007年选择-3】扫描电子显微镜用于观察（D）A.活细胞图像-相差显C.细胞不同切面图像-激光共聚焦扫描显微C.细胞不同切面图像-激光共聚焦扫描显微 D.细胞表面立体图镜&倒置显微镜B.发明获得了奖，它们分别是相差(1953年)显微镜、电子(1986年)显微镜、扫描隧道(1986显微镜。【厦大1996填空-2】相差显微镜和普通光学显微镜在结构上的主要区别是要染色,可以观察活细胞,甚至研究细胞核、线粒体等细胞器的动态。细胞特定的蛋白质进行定位定性和定量研究。(还可以通过重组融合蛋白质技术-利用目的蛋白gfp融合生成能发荧光的蛋白标记目的蛋白)【厦大2010年判断-1】冰冻蚀刻技术主要用于隧道显微镜。(错,用于电镜【厦大2010年】激光共聚焦扫描显微镜(Laserconfocalscanning的DNA合成，常用的放射性前体物是3H-TdR，测定细胞的RNA合成，常用的放射性前体物是3H-UdR，【厦大1998年填空-2】测定蛋白质合成，常用的放射性前体物是3H-氨基酸(常用35S标记甲硫氨酸,3H或14C『补充:3H-甘露糖和3H【厦大2001年实验-4】简述显微放射自显影的基本实验步骤。（6分 射线,如3H、14C、32P、35S、125I)；【生化RNA苷首先掺到核仁);的半保留;分泌蛋白合成分泌所经过的细胞器;发能透过细胞膜,使DNA和RNA染色)B.hochest33258(结合DNA发蓝色荧光 【厦大2010选能透过细胞膜,使DNA和RNA染色)B.hochest33258(结合DNA发蓝色荧光 溴乙锭(结合核酸-DNA和 D.FITC(异 酸荧光素-使用范围广,可与【厦大1998年判断-7】all（）【厦大2000年填空-4】细胞工程所使用的技术主要是细胞体外培养 细胞融合( 等 【厦大2001年填空-10】过碘酸反应(PAS反应)是用来检测细胞中的多【厦大2003年填空-13】中性红（neutralred）是活细胞的活性；绿B（JanusgreenB)是线粒体的。【厦大2003选择-5】一般不选择哪种同位素标记蛋白质？C、DNA【厦大1999年判断-9】采用（Feulgen）染色和细胞显微分光光度计可DNA（DNA【厦大2007年问答题-1】简述Ｆｅｕｌｇｅｎ反应的原理打开,游离出脱氧核糖醛基能与试剂结合,形成紫红色复合物。在此过程中,RNA不受影响,故染色具有DNA特异性。(准确的温度和盐酸浓度(1摩尔),适【厦大2009选择-11】检测标本中多糖存在,可用什么反应?(A)反应(PAS)-多糖反应(&重氮)-蛋白质 D.重氮反应-蛋白质『Gomori【厦大1997年填空-2】【厦大1999年填空-3】超薄切片的染色常采 双染法。不知【厦大2002问答题-2】Penman间纤维结构体系的细胞分级抽取方法。（8）Penman失，主要存留细胞骨架体系。再用Tween40和脱氧胆酸钠处理，胞质中微管、0.25mol/LDNA、RNAA、 B、Tween和脱氧胆酸钠C、核酸 D、硫酸【厦大2007年填空-1】Ｌａｅｍｍｌｉ等用２ｍｏｌ／ＬＮａＣＬ溶液或硫酸葡聚糖、肝素溶液处理Ｈｅｌａ细胞中期，去除中（组蛋白和大部分非组蛋白），而发现非组蛋白骨架，称为（骨架）。【厦大2009年填空-9】在细胞分级抽提方法中，为了溶解膜系统，用选用试剂【厦大2005年实验-1】什么是治疗性克隆？试述其基本过程和应用。【厦2011】治疗性克隆指把患者体细胞移植到去核细胞中形成重组胚，把重组胚 应用:由于治疗性克隆产生的细胞、组织或源于患者本身，可以免除免疫排斥,故治疗性克隆将会在生产移植和攻克疾病等方面获得突破，给生物技术和医学技术带来了性的变化。【厦大2001年实验-3】试写出从小鼠取材 标本的主要方法步骤（具体数值从略）（4分 不知【厦大2002年判断-3】染色质铺展技术可使人们在电镜下直接观察rRNA转录的形态功能。【厦大2005年实验-2】已有一瓶长成致密单层的人肺癌A549细胞和质粒中含有人rRNA克隆的E.coli，请设计一个实验证明rDNA存在于A549细胞的哪几条上。并简要阐述其基本原理。 上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一 该实验可以通过原位杂交技术定位rDNA的位置。设计步骤为:1-放射性核 克隆的大肠杆菌菌株,转移到含有32P的培养基培养,用 带有32P标记的探针,并配制杂交液；2-制 铺片，用强碱使DNA变性并进行脱水等处理；3-将放射 上的rDNA进行杂交；4-显影和检测，用显微放射【厦大2005实验-3】已有来自手术的新鲜肿瘤样品及其相应的正常组织样品，请设计一个实验（写出主要步骤），以观察并比较某一癌蛋白在这些表达差异的观察-WesternBlot:组织胰蛋白酶酶解-收集细胞-裂解细胞- 实验依据:WesternBlot基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的 与蛋白质之间的相互作用？请以其中法为例来简要说明其基本原理． 成特异免疫复合物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行SDS-PAGE及Westernblotting分析。免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白不及蛋白亲和色谱高，因为 的蛋白浓度不如后者高，这样驱动复合物方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于的启动子，启动在酵母细胞内的表达，如果检测到的表达产骤：①选择合适酵母作为筛选未知蛋白的受体菌；②诱饵蛋白表达质粒的构建和鉴定；③诱饵蛋白自身转录活性分析；④猎物蛋白cDNA文库的构建；⑤酵母双杂交筛选与阳性克隆鉴定。优点：⑴作用信号是在融 表达后，以是表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用。⑷酵母双杂交系统可采用不同组织、、细胞类型和分化时期cDNA域，能与其他蛋白形成稳定的复合物，从而引起报 的表达，产生"假阳★◆：噬茵体展示技术：在编码噬菌体外壳蛋 上连接一单克隆抗的的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱， 技术(Surface smon 振性质会发生改变，通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点 能量转移（FRET）广泛用于研究分子间的距离及其相互作用;与荧光显微镜结合，可定量获取有关生物 质、脂类、DNARNA的时空信息。随着绿色荧光蛋白（GFP）的发展，FRET荧光显微镜有可能实时测量细胞内分子的动态性质。提出了一种定量测量FRET★◆抗体与蛋白质阵列技术：蛋白技术的出现给蛋白质组学研究带来水平的量变，微型化，集成化，高通量化的抗体就是一个非常好的研究工具，他也是中发展最快的，而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展，比如肿瘤标志物抗体等，还有很多已经【厦大2006年实验-3】为行使正常的微丝，微管的功能，微丝，微管处于动态 建的:(细胞融合)【厦大2010选择-13】分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞融合的是指:D,髓瘤细胞和小鼠B【厦大2000年判断-4】通过单克隆抗体技术，可以用不纯的抗原分子均一【厦大2009填空-7】(分子排阻层析)或(分子筛层析),主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的(分子质量)进行分离和纯化。【厦大2009判断-9】Northernblot适用于分析RNA样品中特定mRNA的大【厦大2011年判断-12】要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可以通Northernblot实现。C.Westernblotting【厦大2010判断-14】【厦大2011判断-14】5Kb左右大小的外源片段导入某种植物细胞中，首选的方法应为原生融合。(错,首选以【厦大2009年选择-5】【厦大2009年选择-19】【厦大2010年选择-5】以下哪一种媒介或方法可用来诱导细胞融合(ACD)A.电 B.乙二 c.灭活的仙 D.灭活的新城鸡 【厦大1995年】细胞杂交(cellhybridization):通过培养和诱导,两【厦大2010年 (DNAchip):DNA 物上原位合成寡核苷酸或直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序的 作为固相支持物,所以称为DNA 2010论述-4】DNA的荧光物质对生长中的细胞群体染色,DNADNA，以细胞数目为纵坐标作图如下问：l)在图中标出你认为的下列各期G1、G2/M、sG1-A；S-b；G2/M-2）在这群细胞中哪一个时期最长A峰高最高,即细胞数量最多，表示处于该时相的细胞占所有细胞中的比例最大,也就是该时相停留时间最长。所以该细胞群在G1期最长。研究表明:用各种荧光对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA