有机溶剂残留量的测定

有机溶剂残留量的测定第1页，共194页，2023年，2月20日，星期五残留溶剂（ResidualSolvent）定义：药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产过程中，以及在制剂制备过程中使用或产生的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。（OrganicVolatileImpurities）研究的性质：杂质研究的范畴第2页，共194页，2023年，2月20日，星期五国内外主要相关指导原则和文件ICHQ3c杂质：残留溶剂的指导原则FDA：GuidenceforIndustry:Q3cImpurities:ResidualSolventsEMEA:PositionPaperonSpecificationfroClass1andClass2ResidualSolventsinActiveSubstances化学药物有机溶剂残留量研究技术指导原则第3页，共194页，2023年，2月20日，星期五国内研究现状：越来越重视，但仍存在很多不规范之处原因：时间短、经验少、对本质认识不够，对国际新研究结果跟踪不及时，对已有指导原则内涵领会不深刻本讲目标：通过分析和总结，明确一些问题，使研究更科学、更规范。第4页，共194页，2023年，2月20日，星期五各国药典中残留溶剂测定收载情况USP35版——ChemicalTests/<467>ResidualSolvents185EP7.0版——2.4.24.IdentificationandcontrolofresidualsolventsChP2010年版——附录ⅧP残留溶剂测定法

以上药典方法是残留溶剂研究的重要参考依据第5页，共194页，2023年，2月20日，星期五ICH指导原则人用药品注册技术要求国际协调会议(InternationalConferenceofHarmonizitionICH)ICH将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为4类。第6页，共194页，2023年，2月20日，星期五残留溶剂分类第1类溶剂:指已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂,其残留量必须控制在规定的范围内;第2类溶剂:指无基因毒性但有动物致癌性的溶剂;第3类溶剂:指对人体低毒的溶剂。在无需论证的情况下,残留溶剂的量不高于0.5%是可接受的,但高于此值则须证明其合理性;第4类:尚无足够毒理学资料的溶剂。第7页，共194页，2023年，2月20日，星期五有机溶剂的分类类别毒性PDE（mg/天）第一类溶剂人体致癌物、疑为人体致癌物或环境危害物0.1以下(1,1,1)三氯乙烷除外第二类溶剂有非遗传致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他严重的可逆毒性0.5-50第三类溶剂对人体低毒>50第四类溶剂没有足够毒性资料第8页，共194页，2023年，2月20日，星期五限度的制定残留量表示方法：浓度限度计算公式：浓度限度（%）＝PDE/(1000×剂量)×100%其中：PDE：mg/天剂量：一般为10g/天第9页，共194页，2023年，2月20日，星期五质量标准的制订和修订PDE、浓度限度的比较PDE值：绝对值，控制精确，但可能忽略多种溶剂的综合影响。浓度限度：以PDE为基础，并采用比较大的每天给药量计算，给出了一个比较大的安全系数。目前情况下，采用浓度限度比较简便，而且只要日摄入总量不超过10g，就无需进一步计算。第10页，共194页，2023年，2月20日，星期五药物中有机溶剂的引入研究对象：原料药/辅料、制剂原料药/辅料：合成过程中引入包括：作为合成原料或反应溶剂引入作为反应副产物引入由其他合成原料或其他溶剂带入制剂各种成份（原料药、辅料）带入制剂制备过程中引入制剂制备过程中引入（缓、控释微丸包衣过程使用有机溶剂；难溶性药物固体分散）他克莫司溶于无水乙醇和二氯甲烷中分散。第11页，共194页，2023年，2月20日，星期五药物中有机溶剂的引入研究集中在：原料药的第一种情况影响因素：有机溶剂在合成过程中使用的步骤后续溶剂的影响中间体的影响其他（如副反应等）有机溶剂的使用和残留与合成工艺密不可分，是评价合成工艺优劣，筛选、确定合成工艺的重要因素之一。第12页，共194页，2023年，2月20日，星期五药物中有机溶剂的引入第一类溶剂原则：考虑其毒性，建议尽量避免使用。当合成路线涉及此类溶剂时合成化学发展水平判断使用是否合理合理不合理严格控制残留量替代研究临床研究前临床研究期间产品上市后第13页，共194页，2023年，2月20日，星期五确定何种溶剂需进行研究的原则意义和目的保障临床用药安全，控制产品质量与其他方面研究工作密不可分进一步验证工艺控制的合理性为确定合理可行的质量标准提供数据支持思考的出发点有机溶剂的毒性产品的合成工艺第14页，共194页，2023年，2月20日，星期五确定何种溶剂需进行研究的原则EMEA第一类溶剂：不宜使用。一旦作为起始原料、溶剂，或者反应副产物，或者由其他溶剂带入时，残留量需符合ICH相关规定。残留量控制方法：随引入情况不同而不同直接控制终端产品控制中间体控制引入第一类溶剂的物质第15页，共194页，2023年，2月20日，星期五确定何种溶剂需进行研究的原则EMEA第二类溶剂：可直接对终产品进行控制，可对中间体进行控制，结果需符合ICH相关规定当6批试生产规模或者3批生产规模的中间体检测结果显示残留量低于ICH规定限度的十分之一时，可不对终产品进行控制。第16页，共194页，2023年，2月20日，星期五确定何种溶剂需进行研究的原则研究原则：考虑到各类有机溶剂有毒性和在终产品中残留的可能性，建议：第一类溶剂：无论任何步骤使用，均需进行检测第二类溶剂：无论任何步骤使用，均需进行检测第三类溶剂：建议可仅对用于终产品精制的此类溶剂进行研究。第17页，共194页，2023年，2月20日，星期五确定何种溶剂需进行研究的原则研究原则：第四类溶剂若结构与毒性大的溶剂非常接近，建议尽量不使用注意中间体的处理，尽量除尽根据结构和理化性质，参考其他的有机溶剂的检测方法进行检测和控制注意检测图谱中未知峰的情况，尽量进行归属，若无法归属，可以控制挥发性杂质总量。第18页，共194页，2023年，2月20日，星期五若国家标准中未控制残留溶剂，建议根据起始原料的制备工艺，对可能存在的残留溶剂一并在终产品中进行控制。如果采用尚未批准的原料药、化工中间体等作为起始原料，建议根据起始原料的制备工艺，对可能存在的残留溶剂一并在终产品中进行控制。第19页，共194页，2023年，2月20日，星期五9质量标准建立

附录中无限度规定和未收载的有机溶剂:如在药物的制备过程中使用到了这类溶剂， 建议药物研发者尽量检索有关的毒性等研 究资料，关注其对临床用药安全性和药物 质量的影响。第20页，共194页，2023年，2月20日，星期五表1药品中常见的残留溶剂及限度第一类溶剂（应该避免使用）

溶剂名称 英文名 限度（ppm) 苯 Benzene 2 四氯化碳 Carbontetrachloride 4 1，2－二氯乙烷 1,2-Dicloroethane 5 1，1-二氯乙烯 1,1-Dichloroethene8 1，1，1－三氯乙烷1,1,1-Trichloroethane1500

第21页，共194页，2023年，2月20日，星期五第二类溶剂（应该限制使用）溶剂名称 英文名 浓度限度（ppm)乙腈 Acetonitrile 410 氯苯 Chlorobenzene 360 氯仿 Chloroform 60 环己烷 Cyclohexane 3880 1，2－二氯乙烯 1,2-Dichloroethene 1870 二氯甲烷 Dichloromethane 600 1，2－二甲氧基乙烷 1,2-Dimethoxyethane100

第22页，共194页，2023年，2月20日，星期五第二类溶剂（应该限制使用）N,N-二甲氧基乙酰胺N,N-Dimethylacetamide 1090 N,N-二甲氧基甲酰胺N,N-Dimethylformamide 880 1，4－二氧六环 1,4-Dioxane 380 2－乙氧基乙醇 2-Ethoxyethanol 160 乙二醇 Ethyleneglycol 62 甲酰胺 Formamide 220 正己烷 Hexane 290 甲醇 Methanol 3000 2－甲氧基乙醇 2-Methoxyethanol 50 甲基丁基酮 Methylbutylketone 50 甲基环己烷 Methylcyclohexane 1180

第23页，共194页，2023年，2月20日，星期五第二类溶剂（应该限制使用）N-甲基吡咯烷酮 N-Methylpyrrolidone 4840 硝基甲烷 Nitromethane 50 吡啶 Pyridine 200 四氢噻砜 Sulfolane 160 四氢化萘 Tetralin 100 四氢呋喃 Tetrahydrofuran 720 甲苯 Toluene 890 1，1，2－三氯乙烯 1,1,2-Trichloroethene80 二甲苯﹡ Xylene 2170 ﹡通常含有60％间二甲苯，14％对二甲苯，9％邻二甲苯和17％乙苯 第24页，共194页，2023年，2月20日，星期五第三类溶剂（GMP或其它质控要求限制使用）溶剂名称 英文名 浓度限度 （ppm) 乙酸 Aceticacid 5000 丙酮 Acetone 5000 甲氧基苯 Anisole 5000 正丁醇 1-Butanol 5000 仲丁醇 2-Butanol 5000 乙酸丁酯 Butylacetate 5000 叔丁基甲基醚 tert-Butylmethylether 5000 异丙基苯 Cumene 5000 二甲亚砜 Dimethylsulfoxide 5000 乙醇 Ethanol 5000 乙酸乙酯 Ethylacetate 5000 乙醚 Ethylether 5000 甲酸乙酯 Ethylformate 5000 第25页，共194页，2023年，2月20日，星期五第三类溶剂（GMP或其它质控要求限制使用）甲酸 Formicacid 5000 正庚烷 Heptane 5000 乙酸异丁酯 Isobutylacetate 5000 乙酸异丙酯 Isopropylacetate 5000 乙酸甲酯 Methylacetate 5000 3－甲基－1－丁醇 3-Methyl-1-butanol 5000 丁酮 Methylethylketone 5000 甲基异丁基酮 Methylidobutylketone 5000 异丁醇 2-Methyl-1-propanol 5000 正戊烷 Pentane 5000 正戊醇 1-Pentanol 5000 正丙醇 1-Propanol 5000 异丙醇 2-Propanol 5000 乙酸丙酯 Propylacetate 5000 第26页，共194页，2023年，2月20日，星期五第四类溶剂（尚无足够毒理学资料）溶剂名称 英文名

1，1－二乙氧基丙烷 1，1－Diethoxypropane 1，1－二甲氧基甲烷 1,1-Dimethoxymethane 2，2－二甲氧基丙烷 2,2-Dimethoxypropane 异辛烷 Isooctane 异丙醚 Isopropylether 甲基异丙基酮 Methylisopropylketone 甲基四氢呋喃 Methyltetrahydrofuran 石油醚 Petroleumether 三氯乙酸 Trichloroaceticacid 三氟乙酸 Trifluoroaceticacid

第27页，共194页，2023年，2月20日，星期五残留溶剂测定方法干燥失重：专属性差GC法(普通)：首选方法顶空进样法直接进样法HPLC法：例如测定吡啶离子色谱法：测定N-甲基吡咯烷酮气质联用第28页，共194页，2023年，2月20日，星期五有机溶剂残留量测定方法分类1.直接进样法适用范围：沸点高溶剂或受热不易分解样品。优点：简便、无需专用设备，绝对进样量大。缺点：污染进样口及柱子，溶剂峰响应大，样品分解产物或溶剂杂质峰可能影响测定，对溶剂的纯度要求高。第29页，共194页，2023年，2月20日，星期五2.顶空进样法（HeadspaceAnalysis)2.1静态顶空技术

2.2动态顶空技术（吹扫捕集法）适用范围：沸点低溶剂或样品本身对测定有影响。优点：在较低温度下进行，避免组分分解；减少溶解样品的溶剂量和样品本身对色谱系统的干扰和污染，增加色谱柱的寿命。缺点：需要特定的顶空进样装置，成本较高，对沸点较高的溶剂检测灵敏度不够，一般多应用于沸点100℃以下的溶剂。第30页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样法的原理顶空分析是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组分在原样品中的含量。这是一种间接的分析方法，其基本理论是在一定条件下气相和凝聚相（液相或固相）之间存在着分配平衡。所以气相的组成能反映凝聚相的组成。第31页，共194页，2023年，2月20日，星期五第32页，共194页，2023年，2月20日，星期五第33页，共194页，2023年，2月20日，星期五第34页，共194页，2023年，2月20日，星期五第35页，共194页，2023年，2月20日，星期五当样品的蒸气压相当低时，色谱峰面积(Ai)与挥发性组分（i）的蒸气压（Pi)成正比

Ai=CiPiCi与物质种类及检测器有关的特定常数。第36页，共194页，2023年，2月20日，星期五对于理想混合体系，依据拉乌尔定律：

Pi=γiP0iXiP0i为纯组分（i）的蒸气压，Xi为组分（i）的摩尔分数,γi组分的活度系数。第37页，共194页，2023年，2月20日，星期五

服从拉乌尔定律的混合体系，其峰面积与浓度成线性关系。但在高浓度区域内分压的变化与浓度变化不成线性关系，有时甚至与浓度无关。如果不注意这一点，顶空分析会得到错误的结果。因此分析中定量校正尤为重要。在很多情况下，样品溶液若能充分稀释，则能使其接近理想体系，服从拉乌尔定律。第38页，共194页，2023年，2月20日，星期五第39页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样法的特点１、样品不需要前处理，它只取气相部分进行分析，大大减少了样品基质对分析的干扰。２、进样量大，灵敏度高，可用于痕量有机挥发性物质的测定。３、对于易挥发或易分解和无法直接进样分析的液体或固体样品而言，更有它的实用价值。除分析中草药中挥发性成分外，还常用于固体药物、包装材料、药物的残留溶剂分析第40页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空分析可以看成是一种气相萃取方法，即用气体作“溶剂”来萃取样品中的挥发性成分，因而顶空分析就是一种理想的样品净化方法。传统的液液萃取及SPE都是将样品溶解在液体中，不可避免地会有一些共萃取物干扰分析。第41页，共194页，2023年，2月20日，星期五静态顶空分析装置手动进样装置第42页，共194页，2023年，2月20日，星期五采用手动进样时，所需设备简单，只要有一个控温精确的恒温槽和顶空瓶。将装有样品的顶空瓶置于恒温槽中，在一定的温度下达到平衡后，就可用注射器从容器中抽取顶空气体，注入GC进行分析。第43页，共194页，2023年，2月20日，星期五手动进样的的两个缺点1.压力控制难以实现。2.温度的控制，注射器的温度低时，某些沸点高的样品组分很容易冷凝。由于上述原因，手动进样的准确度差，分析重现性难以保证。在只作定性分析时，手动进样不失为一种经济的方法，要作精确的定量分析最好用自动顶空进样装置。第44页，共194页，2023年，2月20日，星期五自动顶空进样装置第45页，共194页，2023年，2月20日，星期五自动顶空进样装置第46页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样器工作原理第47页，共194页，2023年，2月20日，星期五第48页，共194页，2023年，2月20日，星期五第49页，共194页，2023年，2月20日，星期五第50页，共194页，2023年，2月20日，星期五第51页，共194页，2023年，2月20日，星期五第52页，共194页，2023年，2月20日，星期五第53页，共194页，2023年，2月20日，星期五第54页，共194页，2023年，2月20日，星期五第55页，共194页，2023年，2月20日，星期五第56页，共194页，2023年，2月20日，星期五影响顶空分析的因素1.样品的性质顶空气体中单个组分的含量既与其本身的挥发性有关，又与样品基质有关。特别是那些在样品基质中溶解度大（分配系数大）的组分，“基质效应”更为明显。标准溶液必须有与原样品相同或相似的基质，否则，定量误差将会很大。第57页，共194页，2023年，2月20日，星期五一些消除或减少基质效应的方法（1）利用盐析作用在水溶液中加入无机盐（如硫酸钠）来改变挥发性组分的分配系数。但当盐浓度小于5%时几乎没有作用，故常用高浓度的盐，甚至用饱和浓度。盐析作用对极性组分的影响大于非极性组分的影响。此外，在水溶液中加入盐之后，溶液体积会变化，定量线性范围可能变窄。第58页，共194页，2023年，2月20日，星期五一些消除或减少基质效应的方法（2）在有机溶液中加入水，当然，水要与有机溶剂相溶。这可以减少有机物在有机溶剂中的溶解度，增大其在顶空气体的含量。分析灵敏度可增加几倍～数百倍。（3）调节溶液的pH对于碱和酸，通过控制pH可使其解离度改变，或使其待测物的挥发性变的更大，从而有利于分析。（4）样品应溶解在合适的溶剂中，一般可用水、DMF、DMSO或其混合溶剂作溶媒。第59页，共194页，2023年，2月20日，星期五2.样品体积顶空瓶中的样品体积对分析结果影响很大，因为它直接决定相比β。

Cg=Co/(K+β)

其中β=Vg/VL

，K=CL/Cg

对于一个给定的气液平衡系统，K和Co为常数，β与顶空气体中的浓度成正比。样品体积VL增大，β减少，Cg增大，灵敏度增加。但对于具体的样品体系，还要看K的大小。当K》β时，样品体积的改变对分析灵敏度影响小。当K《β时，影响就很大。第60页，共194页，2023年，2月20日，星期五

顶空分析是只从样品瓶中取样一次，每份样品体积是否重现影响分析结果。待测组分的分配系数越小（在凝聚相中溶解度越大），样品体积波动所造成的结果误差越大；反之越小。第61页，共194页，2023年，2月20日，星期五3.平衡温度样品的平衡温度与蒸气压直接相关，它影响分配系数。温度越高，蒸气压越高，顶空气体的浓度越高，分析灵敏度越高。待测组分的沸点越低，对温度越敏感。因此，顶空分析特别适合于分析样品中的低沸点成分。第62页，共194页，2023年，2月20日，星期五温度对顶空分析灵敏度的影响☆水中溶解性越好,平衡温度越敏感。第63页，共194页，2023年，2月20日，星期五4.平衡时间平衡时间取决于组分分子从样品基质到气相的扩散速度。扩散速度越快，所需时间越短。扩散系数与分子大小、介质黏度及温度有关。温度越高，黏度越低，扩散系数越大。所以，提高温度可以缩短平衡时间。第64页，共194页，2023年，2月20日，星期五与样品瓶有关的因素1.样品瓶要求体积准确，能承受一定的压力，密封性能好，对样品无吸附。样品瓶的体积有5～20ml多种，具体选用那种，要根据仪器及样品情况而定。顶空瓶若要反复使用，可用洗液浸泡，然后用蒸馏水冲洗，最后置烘箱中烘干。第65页，共194页，2023年，2月20日，星期五2.密封垫密封垫的材料主要有三种：硅橡胶、丁基橡胶、氟橡胶。硅橡胶垫耐高温、丁基橡胶垫价格低、氟橡胶垫惰性好。为防止密封垫对样品组分的吸附，现在多用内衬聚四氟乙烯或铝的密封垫。选用时要看分析条件（温度）和样品具体情况而定。常规分析可用价格低的丁基橡胶垫，痕量分析则最好选用有内衬的硅橡垫胶。第66页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空分析方法开发的步骤1.确定如何处理样品。如待测组分挥发性太低，则可用直接进样测定。考虑用何种溶剂溶解。2.根据待测组分确定分析条件---色谱柱、检测器、及操作条件。通过标准样品进样分析来优化分离条件。3.确定平衡时间和平衡温度。4.样品的分析，主要考察灵敏度是否满足要求。通过改变分流比、顶空取样条件（改变进样时间或定量管）来控制信号的大小。改变平衡温度、相比、消除基质效应以提高分析灵敏度。5.对测定方法进行方法学验证——线性、回收率、精密度、最低检测量第67页，共194页，2023年，2月20日，星期五第68页，共194页，2023年，2月20日，星期五第69页，共194页，2023年，2月20日，星期五第70页，共194页，2023年，2月20日，星期五聚苯乙烯（PS）中单体苯乙烯的测定2-甲氧基乙醇作内标（2）第71页，共194页，2023年，2月20日，星期五医疗设备中环氧乙烷（EO）的测定环氧乙烷（EO）用于医疗设备的消毒，它是一种已知的致癌物质。有关法规要求用顶空法测定经消毒的医疗设备中EO的含量。可用标准加入法测定聚苯乙烯（PVC）和高密度聚乙烯（HDPE）制成的医疗设备经消毒后残留的EO。第72页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空分析条件：HP7694自动顶空进样器，平衡温度：100℃，平衡时间：60min，输送管和连接管温度：105℃，瓶压：10psi，加压时间0.5min，定量管体积1ml，冲样时间0.15min，进样时间：2.3min。第73页，共194页，2023年，2月20日，星期五多点标准加入法第74页，共194页，2023年，2月20日，星期五两种方法的原理方法A和B是正交处理方法。在两种方法中都有共流出现象，但是方法A中的共流出峰在方法B中得到了解决，反之亦然。最终通过方法C进行定量分析。USP残留量测定介绍第75页，共194页，2023年，2月20日，星期五USP:方法A第76页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样器操作条件操作参数123平衡温度（℃）8010580平衡时间（min)604545转移管温度（℃）80-90105-11580-90加压时间（s）≥60≥60≥60进样体积（ml）111第77页，共194页，2023年，2月20日，星期五水溶性物质方法A的制备第78页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法A系统适用性第79页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法A-1类溶剂第80页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法A-二类溶剂，混合液A第81页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法A-二类溶剂，混合液B第82页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法A-3类溶剂第83页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B第84页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B第85页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B：系统适用性第86页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B－1类第87页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B-2类第88页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B-2类第89页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法B-3类溶剂第90页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法C第91页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法C与方法A相同再加上：标准溶液:在方法A和B中已定性的峰用USP溶剂标准品来稀释增敏溶液供试品与标准品的混合液第92页，共194页，2023年，2月20日，星期五方法C:系统适用性1类标准溶液–信噪比S/N:1,1,1–三氯乙烷>51类系统适用性溶液–信噪比S/N:所有的峰>3

2类MixtureAStandardSolution–分离度:乙腈与二氯甲烷>1.0如果用方法B的话，按照它的系统适用性要求。第93页，共194页，2023年，2月20日，星期五计算每个残留溶剂的量ppm=5(C/W)[ru/(rst-ru)]C=浓度,ppm,标准溶液的相关美国对照品浓度W=质量,g,为供试品贮备液中供试品的重量r=供试品溶液的残留溶剂的峰响应rst=加入标准溶液供试品溶液的残留溶剂的峰响应方法C:计算第94页，共194页，2023年，2月20日，星期五供试液制备——水溶性样品供试品储备溶液：取250mg供试品，置25ml量瓶中，用水并稀释至刻度。供试品溶液：取上述储备液5ml，置顶空瓶中，加水1ml，加塞，加盖。第95页，共194页，2023年，2月20日，星期五供试液制备——非水溶性样品供试品溶液储备液:转移500mg的待测物质,精确称取,至一个10ml量瓶,用二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀。供试品溶液:转移供试品储备液1.0ml至一合适的顶空进样瓶中，包含有5.0ml的水，加塞，压盖，混匀。标记溶液:转移1.0ml供试品储备液到一合适的顶空进样瓶中，再加入1ml的标准储备液和4.0ml的水，加塞，压盖，混匀(制备在方法A和方法B中已经定性的各峰的增敏溶液)第96页，共194页，2023年，2月20日，星期五可选的方法

USP-NF总要求:也可选用别的在准确度、灵敏度、精密度、选择性或适用性方面有一定优势的方法，以满足自动化或减少数据处理或其它特殊的要求。这种方法应该得到验证……当出现不同或争议时，只有按药典方法获得的结果为决定性结果USP-NF:GeneralChapter<1225>第97页，共194页，2023年，2月20日，星期五USP固定相组成推荐G1二甲基聚硅氧烷油DB-1G2二甲基聚硅氧烷胶DB-1G350%苯基-50%甲基聚硅氧烷HP-50+G53-氰丙基聚硅氧烷DB-23G6三氟丙基甲基聚硅氧烷DB-210G750%氰丙基聚硅氧烷-50％苯甲基硅氧烷DB-225G14聚乙二醇（平均分子量950-1050）WaxG15聚乙二醇（平均分子量3000-3700）WaxG16聚乙二醇（平均分子量15000）WaxUSP固定相（26种）第98页，共194页，2023年，2月20日，星期五USP固定相组成推荐G1925%苯基-25％氰丙基甲基硅氧烷DB-225G20聚乙二醇（分子量380-420）WaxG25聚乙二醇TPA(20M对苯二甲酸)FFAPG275％苯基-95%甲基聚硅氧烷DB-5G2825％苯基-75%甲基聚硅氧烷DB-35G3220％苯甲基-80%二甲基聚硅氧烷DB-35G35聚乙二醇硝基对苯二甲酸酯双环氧化物FFAPG361%乙烯基-5％苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制剂DB-1USP固定相第99页，共194页，2023年，2月20日，星期五USP固定相组成推荐G361%乙烯基-5％苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制剂DB-1G39聚乙二醇（平均分子量1500）WaxG41苯甲基二甲基聚硅氧烷(10％苯取代)DB-5G4235％苯基-65％二甲基乙烯基硅烷DB-35G436％氰丙基苯-94％二甲基聚硅氧烷1301624G45二乙烯基苯-乙二醇-二丙烯酸酯PLOTUG4614％氰丙基苯基-86％甲基聚硅氧烷DB-1701USP固定相第100页，共194页，2023年，2月20日，星期五欧洲药典有关残留溶剂的内容溶剂分类同ICH测定方法为顶空进样法，分A、B两个系统。下列溶剂不宜用顶空法测定：甲酰胺（formamide）2-乙氧基乙醇（2-methylethanol)四氢噻砜（sulfolane)2-甲氧基乙醇（2-methoxyethanol)乙二醇（ethyleneglycol)N-甲基吡咯啉（N-methylpyrrolidone)第101页，共194页，2023年，2月20日，星期五欧洲药典残留量测定－样品制备根据样品的溶解性选择合适的溶剂水溶性样品用水作溶剂，非水溶性样品用二甲基甲酰胺作溶剂。测定二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺时用1、3-dimethyl-2-dimethyl-2-imidazolidinone(DMI)作溶剂。供试液制备：取0.2g样品，用上述溶剂溶解，稀释至20ml。测定溶液:

取供试液5.0ml，加1.0ml空白溶剂。第102页，共194页，2023年，2月20日，星期五对照溶液的制备对照储备液：取待测溶剂，溶于适量二甲亚砜中，加水稀释至100ml，取适量用水稀释至一定浓度。测试用对照溶液：取样品溶液5.0ml，置顶空瓶中，加1.0ml对照储备液，加盖，密封。第103页，共194页，2023年，2月20日，星期五欧洲药典残留量测定色谱条件－A色谱柱：30m×0.32（0.53）mm×1.8（3.0）μm6%氰丙基苯-94％二甲基聚硅氧烷（HP-624）载气：N2

或He线速度:35cm/s

分流比：5：1进样口温度：140℃检测器温度：250℃柱温：40℃（20min），20℃/min升温至240℃，维持20min。系统要求：乙腈与二氯甲烷的分离度>1.0，信噪比：>5,RSD<15%第104页，共194页，2023年，2月20日，星期五第105页，共194页，2023年，2月20日，星期五第106页，共194页，2023年，2月20日，星期五欧洲药典残留量测定色谱条件－B色谱柱：30m×0.32（0.53）mm×0.25μm固定液macrogol20，000（HP-Wax）载气：N2

或He线速度:35cm/s

分流比：5：1进样口温度：140℃检测器温度：FID250℃柱温：50℃（20min），6℃/min升温至165℃，维持20min。系统要求：乙腈与三氯乙烯的分离度>1.0，信噪比：>5，RSD<15%第107页，共194页，2023年，2月20日，星期五第108页，共194页，2023年，2月20日，星期五第109页，共194页，2023年，2月20日，星期五结果判断测定溶液色谱峰面积小于对照溶液峰面积的50％，结果符合规定。如需定量测定，可采用标准加入法测定。第110页，共194页，2023年，2月20日，星期五中国药典2010年版附录残留量测定方法

药物中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留量应符合表中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。第111页，共194页，2023年，2月20日，星期五色谱柱

毛细管柱

除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互代使用。（1）非极性色谱柱固定液为100％的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。（2）极性色谱柱固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。第112页，共194页，2023年，2月20日，星期五

（3）中极性色谱柱固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。第113页，共194页，2023年，2月20日，星期五（4）弱极性色谱柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基聚硅氧烷共聚物的毛细管柱。第114页，共194页，2023年，2月20日，星期五2．填充柱以直径为0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。第115页，共194页，2023年，2月20日，星期五系统适用性试验（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数均应大于5000；填充柱法的理论板数应大于1000。（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻的色谱峰的分离度应大于1.5；（3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5％；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于10％。第116页，共194页，2023年，2月20日，星期五供试品溶液的制备

1．顶空进样除另有规定外，精密称取供试品0.1～1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N－二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，浓度满足系统定量测定的需要。第117页，共194页，2023年，2月20日，星期五2．溶液直接进样精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度满足系统定量测定的需要。第118页，共194页，2023年，2月20日，星期五对照品溶液的制备

精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。若为限度实验，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。必要时，应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。第119页，共194页，2023年，2月20日，星期五测定法

第一法毛细管柱顶空进样等温法当需要检查的有机溶剂数量不多，并极性差异较小时，可采用此法。色谱条件柱温一般为40～100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟1.0～2.0ml；顶空瓶加热温度为70～85℃，顶空瓶加热时间30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，温度为250℃。测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。第120页，共194页，2023年，2月20日，星期五第二法毛细管柱顶空进样系统程序升温法

当需要检查的有机溶剂数量较多并极性差异较大时，可采用此法。色谱条件如为非极性色谱系统，柱温一般先在30℃维持7分钟，再以8℃/min的速度升至120℃，维持15分钟；如为极性色谱系统，柱温一般先在60℃维持6分钟；再以8℃/min的升温速率升至100℃，维持20分钟；以氮气为载气，流速为2.0ml/min；顶空瓶温度70～85℃，顶空时间30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，温度为250℃。第121页，共194页，2023年，2月20日，星期五

具体到单个药品的残留溶剂检查时，可根据该品种项下的残留溶剂组成调整程序升温速率。测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。第122页，共194页，2023年，2月20日，星期五第三法溶液直接进样法

可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于3次，每次2μl，测定待测峰的峰面积。第123页，共194页，2023年，2月20日，星期五计算法

（1）限度实验：以内标法测定时，计算单位重量样品中的色谱峰面积与内标峰面积之比；供试品溶液所得的峰面积比的平均值不得大于由对照品溶液所得的峰面积比的平均值。以外标法测定时，供试品溶液所得的单位重量中样品待测物峰的平均面积不得大于由标准溶液所得的待测物峰的平均峰面积。（2）定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。第124页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样法测定应注意问题A．应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。第125页，共194页，2023年，2月20日，星期五B．顶空时间一般为30～45分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。顶空时间通常不宜过长，如超过60分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。

C．对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。第126页，共194页，2023年，2月20日，星期五定量方法的验证

当采用顶空色谱系统测定时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。第127页，共194页，2023年，2月20日，星期五干扰峰的排除

供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。第128页，共194页，2023年，2月20日，星期五

当测定的有机溶剂残留量超出限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。第129页，共194页，2023年，2月20日，星期五含氮碱性化合物的测定

普通气相色谱的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。当采用顶空进行系统测定此类化合物时，应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路；或采用溶液直接进样法测定。供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易气化。第130页，共194页，2023年，2月20日，星期五

通常采用弱极性的色谱柱或经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。对不宜采用气相色谱法测定含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其他方法如离子色谱法等测定。第131页，共194页，2023年，2月20日，星期五

检测器的选择对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用ECD检测器，易得到高的灵敏度。由于不同的实验室在测定同一药品时可能采用了不同的实验方法，当测定结果处于合格不合格边缘时，以采用内标及标准加入法为准。甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用顶空进样方式测定。第132页，共194页，2023年，2月20日，星期五原料药中有机溶剂残留量测定

以下简单介绍在新药质量标准研究中开发的一些测定实例。辛伐他汀原料残留溶剂的检测第133页，共194页，2023年，2月20日，星期五对照溶液和供试品溶液的制备内标溶液的制备：精密量取丁酮适量，加80%DMSO溶液稀释制成1ml含80μg的溶液。对照品溶液的制备：取上述溶剂适量，用内标溶液稀释制成每1ml中含甲醇79μg、乙醇79μg、丙酮79μg、乙醚36μg、二氯甲烷40μg、正己烷13μg、四氢呋喃44μg、苯0.35μg、环己烷38μg、甲苯17μg的溶液作为对照溶液。第134页，共194页，2023年，2月20日，星期五供试品溶液的制备：取样品约0.5g，精密称定，置顶空瓶中，精密加内标溶液5ml，加盖封密，即得。第135页，共194页，2023年，2月20日，星期五顶空进样器条件顶空炉温：80℃，热平衡时间：30分钟，充样时间：0.2分钟，进样时间：1分钟。第136页，共194页，2023年，2月20日，星期五辛伐他汀原料残留溶剂的检测1.甲醇2.乙醇3.丙酮4.乙醚5.二氯甲烷6.正己烷7.四氢呋喃8.苯9.环己烷10.甲苯混合对照溶液第137页，共194页，2023年，2月20日，星期五四川某公司（Y-01-050801）第138页，共194页，2023年，2月20日，星期五四川某公司（Y01-051101）第139页，共194页，2023年，2月20日，星期五浙江某公司（050302）第140页，共194页，2023年，2月20日，星期五样品名：替米沙坦色谱柱：HP-624柱温：50℃分流比：1：1溶剂：稀硫酸平衡温度：80℃第141页，共194页，2023年，2月20日，星期五替米沙坦样品测定色谱图第142页，共194页，2023年，2月20日，星期五抗爱滋病新药司他夫定（色谱柱：HP-INNOWAX柱温：45℃）第143页，共194页，2023年，2月20日，星期五司他夫定样品测定色谱图注意：样品分解产物对测定的影响第144页，共194页，2023年，2月20日，星期五样品名：佐米曲普坦色谱柱：HP-50柱温：50℃（10min），15℃/min至180℃（5min）溶剂：50%DMF平衡温度：95℃第145页，共194页，2023年，2月20日，星期五佐米曲普坦样品测定色谱图第146页，共194页，2023年，2月20日，星期五盐酸阿扎司琼溶剂残留量测定：对照溶液依次为氯仿、二氯乙烷、甲苯第147页，共194页，2023年，2月20日，星期五盐酸阿扎司琼样品溶液：RT4.287min为氯仿第148页，共194页，2023年，2月20日，星期五第149页，共194页，2023年，2月20日，星期五第150页，共194页，2023年，2月20日，星期五残留溶剂研究基本内容1、确定被测残留溶剂2、确定残留溶剂类别3、限度确立4、确定测定方法5、选择色谱柱和检测器6、制备供试品和对照品溶液7、测定条件的优化8、方法学验证9、质量标准建立10、其他第151页，共194页，2023年，2月20日，星期五1确定被测残留溶剂一般原则(1)工艺中使用二类以上和重结晶用溶剂，及根 据工艺特点要求其它溶剂进行残留量研究。(2)建议对合成最后三步使用的三类溶剂也进行研究。建议原则——仔细分析，别落下(1)申报资料合成工艺中用到所有有机溶剂(2)液态催化剂等(3)趋势:胺类和羧酸类第152页，共194页，2023年，2月20日，星期五2确定残留溶剂类别☆盐酸克林霉素棕榈酸酯举例•使用溶剂(６种):乙醇、丙酮(精制)、二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶与DMF。•分类:测定方法确认：考虑DMF沸点较高，吡啶顶空条件下检测灵敏度较低，故上述两种溶剂采用直接进测定，其余溶剂采用顶空进样测定。标准制定：按照ICH规定将二类有机溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶与DMF订入质量标准中，限度参照ICH规定。同时将精制溶剂丙酮列入质量标准中，限度为不得过0.1%。第153页，共194页，2023年，2月20日，星期五4确定定量方法选择定量方法外标法内标法标准加入法:利用加入该组分前后色谱峰响应信号的变化而计算被测组分含量的方法 操作:测定供试品,测定供试品＋对照品 使用:边缘产品以标准加入法结果为准;顶空方式基质效应。第154页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器色谱柱分类填充柱和毛细管柱毛细管柱WCOT或PLOT极性大小（按固定液极性分类）按内径分液膜厚度第155页，共194页，2023年，2月20日，星期五填充柱大口径毛细管柱常用毛细管柱5%OV101on80/100Chromosorb30m×0.53mm×0.88m30m×0.32mm×0.25m不同色谱柱类型分离效果的比较第156页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器填充柱和毛细管柱填充柱•柱效低，分离复杂样品的能力差。•以直径为0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙 烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作 为固定相。毛细管柱：柱效高，灵敏度高，分离好。第157页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器选择合适色谱柱样品与待测溶剂按照相似相溶原理选择色谱非极性柱:各组分按沸点顺序流出色谱柱，沸点低者先出。若试样中有极性组分，相同沸点的极性组分先出峰。中等极性柱:各组分基本仍按沸点顺序流出色谱柱，沸点低者先出。但沸点相同极性与非极性组分，极性组分后出峰。第158页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器毛细管柱—按液膜厚度分类薄膜比厚膜洗脱组分快，峰分离好、温度低，适用高沸点、组分密集或热敏化合物。大口径柱保持分离度和保留时间，都只有厚膜。0.1～0.2µm薄膜和0.25～0.5µm标准膜适用高沸点化合物。1.0～1.5µm厚膜:测定适合流出温度100～200℃。3～5µm超厚膜：分析气体、溶剂和可吹扫出来的物质。第159页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器选择合适色谱柱极性柱:各组分按极性顺序流出色谱柱，极性低者先出。注意:混合物中组分性质差别，如分离极性与非极性混合物，一般选用极性柱。分离沸点差异较大的混合物，一般选用非极性柱。第160页，共194页，2023年，2月20日，星期五5选择色谱柱和检测器选择合适色谱柱根据经验顺序选择ChP2005中100％的二甲基聚硅氧烷和聚乙二醇EPDB-624和Innowax仪器商手册。如：Agilent产品目录提供DB-1、DB-624和DB-Wax的出峰顺序。第161页，共194页，2023年，2月20日，星期五检测器样品类型灵敏度范围气体流量(mL/min.)载气+尾吹气氢气空气FID碳氢化合物10-100pg20-6030-40200-500TCD15-30n.an.a.

除载气外的5-100ng其它所有物质ECD有机卤化物0.05-1pg30-60n.a.n.a.氯化溶剂50ppt-1ppm&农药残留NPD有机氮化合物&0.1-10pg20-401-570-100有机磷化合物5选择色谱柱和检测器

检测器的选择第162页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液溶剂选择要求能同时溶解供试品和待检残留溶剂；当样品在溶解介质中未完全溶解时，结果通常偏低且精密度差。溶剂自身及其杂质不干扰待检残留溶剂的测定；DMSO、DMF和待检残留溶剂保持相对稳定；避免使用污染性大、毒性大的溶剂。水是首选溶剂，特别是顶空进样系统。第163页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液溶剂的选择水溶性药物：水非水溶性药物：不挥发的酸、碱液；DMF或DMSO等，不可使用盐酸液和氨水。可以单独使用，也可以混合使用顶空进样可选择在80~90℃加热能溶解样品的溶剂。第164页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液样品的制备不可研磨样品，必须原态取样；不可超声、不能加热溶解样品（直接进样法）；样品置顶空瓶中压盖后可以超声、加热；测定酯类溶剂时不能采用酸或碱溶液，以免发生水解。第165页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液样品的制备

测定含氮的碱性溶剂时，供试品溶液应不 呈酸性，以免被测物与酸反应不易汽化； 测定含羧基的酸性溶剂时，供试品溶液应 不呈碱性，以免被测物与碱反应不易汽化。•如：测定氟伐他汀钠(pH8.0～10.0)中乙酸 残留量，不出峰，需对其甲酯化后测定。第166页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液对照品溶液的制备对照品溶液：必须与供试品溶液相同溶剂。苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶剂，可先用少量DMF等溶解待查溶剂，再用水稀释。☆2010版新增：…采用与制备供试品溶液相同的溶剂制备对照品溶液。如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在50％二甲亚砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。第167页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液供试品和对照品溶液浓度确定根据残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，浓度应能满足系统定量测定的需要一般供试品取样量为0.1～1g限度试验：对照品溶液的浓度可按残留溶剂规定的限度配置；定量测定：按实际残留量配置，浓度相差最好不超过2倍为宜。必要时应重新调整。第168页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液顶空进样基质效应顶空气体中单个组分的含量既与其本身的挥发性有关，又与样品基质有关。特别是那些在样品基质中溶解度大（分配系数大）的组分，基质效应更为明显。

标准溶液必须有与原样品相同或相似的基质，否则可能导致定量误差将会很大。标准加入法可以有效地排除基质效应的影响；当标准加入法结果与内标法结果系统偏差约10%时，可以认为方法存在明显的基质效应。第169页，共194页，2023年，2月20日，星期五6制备供试品和对照品溶液☆盐酸克林霉素棕榈酸酯举例•直接进样(吡啶与DMF):样品在甲醇和乙醇中溶 解性均较好，考虑在极性柱中甲醇出峰较快， 干扰较少，故采用甲醇为溶解样品的溶剂。•顶空进样:样品在水中溶解性较好，故首选。同 时考虑三氯甲烷在水中溶解性较差，最后采用

5%DMF水溶液作为顶空测定溶解样品溶剂。第170页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化顶空条件优化柱温优化进样口温度优化进样衬管气路优化第171页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化顶空条件优化平衡温度对沸点较高残留溶剂，必须较高的顶空温度，兼顾供试品热分解，避免产生挥发性热分解产物干扰。溶剂的沸点，一般应比溶解用溶剂沸点低10℃以上。在灵敏度能满足的条件下，尽量采用较低的平衡温度。第172页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化顶空条件优化常用平衡温度水：顶空温度不宜超过85℃EP/USP规定为80℃

顶空温度为100℃(柱温低于顶空温度)，大量的水被蒸发,随着水蒸汽的凝结，水中溶解度大溶剂灵敏度明显下降(如:乙腈)DMSO/DMF：顶空温度不宜超过115℃EP/USP规定为105℃。第173页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化

顶空进样提高灵敏度方法 盐析作用(基质效应)••••在水溶液中加入无机盐（如无水硫酸钠）来改变挥发性组分的分配系数。但当盐浓度小于5%时几乎没有作用，故常用高浓度(甚至饱和)。盐析作用对极性组分的影响大于非极性组分的影响。在水溶液中加入盐之后，溶液体积会变化，定量线性范围可能变窄。第174页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化顶空进样提高灵敏度方法有机溶液中加入水：水要与有机溶剂相溶，减少有机物在有机溶剂中的溶解度，增大其在顶空气体的含量。☆氯仿在DMF顶空法中由于二者结合能力强， 致使其检测灵敏度降低，当加入等量的水 后，检测灵敏度显著增加。即使加水后样品 重新析出，不影响氯仿从样品中转移至溶剂 中的转移率（必须经回收考察）。第175页，共194页，2023年，2月20日，星期五7测定条件的优化顶空进样提高灵敏度方法调节溶液的pH：对于碱和酸，通过控制pH可使其解离度改变，或使其待测物的挥发性变的更大，从而有利于分析。第176页，共194页，2023年，2月20日，星期五内径流量(ml/min)线速度(cm/sec)1/4“50-602.6-3.21/8“20-304.2-6.3毛细管柱0.53(大孔径)0.32mm(粗径)3-522-381-320-410.20mm(细径)0.5-121-320.10mm(快速)0.2-0.542-1067测定条件的优化

气路优化 可使用下列推荐值来确定不同类型柱的最佳流量

填充柱第177页，共194页，2023年，2月20日，星期五8方法学验证总则：首先明确将其归为定量检查或限度检查验证内容系统适用性专属性准确度（回收率）线性灵敏度（检测限、定量限）耐用性第178页，共194页，2023年，2月20日，星期五8方法学验证系统适用性柱效填充柱法的理论板数应大于1000。毛细管色谱柱的理论板数应大于5000。重复性内标法：对照品溶液连续进样5次，所得被测物与内标物峰面积之比RSD≤5%。 外标法：所得被测物峰面积RSD≤10%。