乙型病毒性肝炎的实验室检查课件

乙型病毒性肝炎的实验室检查报告人：付红伟检验中心2011.1.21我国HBV感染概况一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者约9300万人，占全世界的1/4；其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过

2000万例，占全世界慢性乙肝患者的1/3；15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为0.96%；1~4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至72.25%;抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%；2HBV基因组HBVDNA是由长链L(负链)

和短链S(正链)

组成的不完全双链环状DNA，短链的长度相当于长链的50%～85%。HBVDNA长链载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框架(ORF)，分别称为S、C、P和X区。编码7个蛋白质。HBVDNA易发生变异，特别是前S或S区基因较易突变。嗜肝DNA病毒的共同特点：内含3~3.3kb松散环状、部分双链DNA基因组及DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。3e抗原(HBeAg)：是可溶性蛋白质只存在于血液中是病毒复制和传染性的标志e抗体(抗-HBe)：对HBV感染有一定的保护作用其出现标志着病毒复制减少、传染性降低前C区C区前C/C蛋白HBeAgHBcAg表达切割、加工HBeAg只存在于血清中HBVC基因分泌到细胞外2.HBeAg和抗-HBe5HBV的三种形态1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere67HBV自然复制周期1.乙型肝炎的生物化学检测主要指标：ALT,AST,ASTm，血清白蛋白，血清胆红素，胆碱酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子；9方法学的发展ELISA：灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查；胶体金免疫层析法(金标法)：简便易行，可用于急诊病人快速检测；化学发光法定量检测：价格昂贵，可用于HBVMs为临界值的病人的确证；可间接反映宿主HBV的复制水平，在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。新增检测指标Pre–S1、Pre–S2及其相应抗体对乙肝两对半的新认识102.HBV血清标志物检测11HBV血清标志物检测方法的成本效果分析(1)13Terminal

proteinSpacerReverse

Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344preS1preS2Ss1s266HBsAgXMutationofS&Pre-SS基因“a”决定簇

G145R

变异，与抗-HBs的亲和力降低S基因变异可导致隐匿性HBV感染(occultHBVinfection)，表现为血清HBsAg阴性，但仍可有HBV低水平复制(血清HBVDNA常<104拷贝/ml)献血员人群，隐匿性HBV感染的检出率可达0.19%141517大三阳小三阳vsHBV血清学标志检测结果分析1619类型HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb样本数(n)构成比(%)1＋－－－＋40.212＋－＋－＋231.203＋－－＋＋985.114－－－－＋462.405－－－＋＋683.556－＋－＋＋1849.607－＋－－＋633.298－＋－－－47024.539－－－－－96050.10合计1257172335048619161001916例HBV血清标志物阳性类型分布模式2122HBVDNA定量检测病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病进展密切相关；主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。HBV基因分型基因分型的必要性；基因分型的主要方法；HBV耐药突变的检测3.HBV分子生物学诊断慢性HBV感染治疗适应症的选择HBeAg阳性，HBVDNA载量>105copies/ml,ALT>2×ULN;HBeAg阴性，HBVDNA载量>104copies/ml,ALT>2×ULN;HBVDNA持续阳性，年龄>40岁，ALT大于正常上限，也可给予抗病毒治疗；HBVDNA持续阳性，年龄>40岁，ALT持续正常，应密切随访，动态观察疾病进展，必要时行肝组织检测，有病变证据时，可以给予抗病毒治疗；23HBVDNA定量检测试剂盒的性能对比2526同时可以实现对HCV,HIV-1,衣原体，及淋病的一体化检测BackB型特异性“引物对”的特异度分析B型特异性引物HB（正义链）：5’-ACCGTGAACGCCCACMGGAA-3’29Back4.HBV临床药物治疗监测乙肝病毒的耐药性检测，是精准治疗乙肝的关键！！目前由于治疗不够规范，造成我国目前超过95%的乙肝患者发生耐药、病毒变异、病毒耐药，变异检测势在必行！拉米夫定是第一个被批准治疗慢性乙型肝炎的口服抗病毒药,已在全世界广泛应用。但其耐药发生率高,治疗1年时耐药发生率为23%,2年为46%,3年为55%,4和5年分别为65%和71%。30耐药---核苷(酸)类似物(NA)治疗失败最重要原因31拉米夫定LMV阿德福韦酯ADV替比夫定LdT恩替卡韦ETVHBV替诺福韦TDVNAs：抑制病毒复制长期使用耐药变异临床耐药表型耐药基因耐药耐药研究323334PolymeraseTerminal

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Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344逆转录酶(RT)区某些位点变异与耐药相关preS1preS2HBsAgs1s266可同时分析：耐药变异，HBsAg变异，基因型，血清型全长RT区分析技术路线HBVDNA提取snPCR扩增RT区PCR产物直接测序生物信息学分析与数据信息挖掘血清与资料收集Neg.BCkb可