中国和美洲大豆胞囊线虫课件

中国和美洲大豆胞囊线虫

rDNA-ITS-RFLP和ISSR分析

引言材料与方法结果与分析致谢

Soybeancystnematode,SCN病原：Heterodera

glycinesIchinohe特点：分布广、危害重、寄主范围宽、传播途径多

休眠体（胞囊）存活时间长---极难防治的土传病害危害:大豆主要病害一般减产5%-10%

干旱地区20%-30%

严重70%-80%甚至绝产引言线虫分类鉴定

对于培育抗病品种、控制其危害意义非常重大传统形态学鉴定：以形态学、解剖学特征、结合形态测量值为依据缺点：表现型特征不稳定特征多样性少和形态特征测量值重叠某些特征易受环境条件的影响而造成差异需要大量线虫样品

引言植物寄生线虫分子诊断和鉴定技术大豆胞囊线虫鉴定分子生物学技术随着现代生物技术的发展，分子生物技术逐步引入线虫分类、诊断和鉴定当中。上个世纪80年代以来，许多学者都在试图利用分子生物学技术和方法直接检测植物寄生线虫种间和种内群体间在遗传组成上的差异、揭示线虫发育的进化关系。以期克服形态学和生物化学方法存在的缺陷的可行途径

。引言大豆胞囊线虫鉴定限制性片段长度多态性（RFLP）技术

马铃薯金线虫和马铃薯线虫（Burrows）SCN4号与3号和5号（Kalinsle和Huettle）短体线虫的三个种(段玉玺和刘维志)随机扩增多态性DNA（RAPD）技术广泛用于分析大豆胞囊线虫、马铃薯金线虫和马铃薯白线虫和根结线虫不同毒性和致病型群体遗传变异

花生根结线虫Meloidogyne

arenaria、南方根结线虫M.incognita、爪哇根结线虫M.javanica、北方根结线虫M.hapla

扩增片段长度多态性（AFLP）技术美国和墨西哥烟草胞囊线虫属于不同组引言大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究材料与方法样品名称国家地点Hg1加拿大OntarioHg2加拿大OntarioHg3加拿大OntarioHg4阿根廷SantaFeHg5阿根廷SantaFeHg6阿根廷BuenosAiresHg7美国MissouriHg8美国IllinoisHg9美国IowaStateHg10美国SouthDakotaHg11美国MinnesotaHg12中国黑龙江省Hg13中国黑龙江省Hg14中国黑龙江省Hg15中国黑龙江省Hg16中国黑龙江省大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究

线虫胞囊和卵的分离：土样中挑出饱满胞囊---在控温控光温室（16h光、27℃水床)大豆上繁殖材料与方法大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究线虫胞囊和卵的分离：繁殖30d后取出大豆苗高压水枪强水流冲洗收集胞囊(20和60目)压碎胞囊（100-200-500目）释放卵和J2收集到离心管中2100g离心4min提取DNA用材料与方法大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究材料与方法PCR扩增（50μl）:PTC-200电泳检测：1.5%琼脂糖大豆胞囊线虫ISSR研究供试大豆胞囊线虫：美国、加拿大、阿根廷、中国大豆田间16个群体23个大豆胞囊线虫近亲系

PCR扩增：（50ul）PTC-200引物:20个(单引物)电泳检测：1.5%琼脂糖材料与方法大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究大豆胞囊线虫rDNA-ITS的PCR扩增结果（1060bp）

结果与分析SCNrDNA-ITSPCR扩增产物PCRmarker,Hg1,Hg2,Hg3,Hg4,Hg5,Hg6,Hg7,Hg8,Hg9,Hg10,Hg11,Hg12,Hg13,Hg14,Hg15,Hg16,根结线虫，CK，PCRmarker大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究AluI和AvaI酶切SCNrDNA-ITSPCR产物的RFLP分布图

结果与分析从左至右：PRCmarker,用AluI酶切的Hg12,Hg13,Hg14,Hg15,Hg16,Hg1,Hg4,Hg7；用AvaI酶切的Hg12,Hg13,Hg14,Hg15,Hg16,Hg1,Hg4,Hg7；PCRmarker

所有的中国SCN群体（Hg12,--Hg16）的rDNA-ITS的PCR扩增产物均产生3条RFLP片断，而加拿大、阿根廷和美国所有SCN群体的rDNA-ITS的PCR扩增产物均产生2条RFLP片断

结果与分析大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP研究17种限制性内切酶酶切rDNA-ITS的PCR产物25条酶切片段8种限制性内切酶没能切开9种限制性内切酶得到了2个以上RFLP片断其中8种内切酶分别得到了相同RFLP片断AvaI酶切PCR扩增产物后产生了多态性

大豆胞囊线虫ISSR研究用引物FISSR2、FISSR5和FISSR6分别扩增不同国家的大豆胞囊线虫群体Hg3（加拿大）、Hg8（阿根廷）、Hg5（美国）、Hg15（中国）得到了不同的片断

结果与分析从左至右：1KbDNAmarker,FISSR2扩增的Hg3,Hg8,Hg5,Hg15；FISSR5扩增的Hg3,Hg8,Hg5,Hg15；FISSR6扩增的Hg