药品微生物实验室质量管理

药品微生物实验室规范《中国药典》2010年版微生物实验室规范指导原则ISO17025《检测和校准实验室能力的通用要求》CNAS—CL09实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明USP《1117》MicrobiologicalBestLaboratory《药品生产质量管理规范（2010年版）》WHOGPMLNo.961Annex2CNAS—CL05《实验室生物安全认可准则》人间传染的病原微生物名录（卫生部2006年发布）《中国药典》2015年版药品微生物实验室质量管理指导原则第一页，共50页。增修订情况1.名称：“药品微生物实验室规范指导原则”修订为“药品微生物实验室质量管理指导原则”第二页，共50页。增修订情况2.整体框架修订前：人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断修订后：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检测结果质量保证和检测过程质量控制、实验记录、结果的判断和检测报告、文件第三页，共50页。药品微生物实验室规范指导原则人员培养基菌种实验室的布局和运行设备文件实验记录结果的判断第四页，共50页。一、人员

从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。实验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认他们可以承担某一试验前，他们不能独立从事该项微生物试验。应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划。检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符。如：管理技能、实验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技术报告书写等。实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评估检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。当使用一种非经常使用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人员的操作技能。所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。第五页，共50页。一、人员2015版药典具体增修订情况：人员方面进一步要求从事药品微生物检验工作的所有人员应保证在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术等方面的培训，“如无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、微生物检查方法及使用鉴定的基本技术等,经考核合格后方可上岗”。强调了“实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染”。提出了实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划，“保证知识与技能不断的更新”第六页，共50页。一、人员CNAS-CL09《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》第5.2.1节要求：——实验室使用人员时，应考虑以下条件a)有颜色视觉障碍的人员不能执行某些涉及到辨色的试验。b)实验室人员是否熟悉生物检测安全操作知识和消毒知识？c)实验室是否对在培人员实施有效监督？d)实验室是否对新员工进行检测技能的培训，对新员工的检测技能进行确认？第七页，共50页。岗位职责2.一定资质3.人员培训、再培训

检验人员基本技术、生物安全、相关能力

管理人员技术要求、管理技能、标准应用关注要点第八页，共50页。二、培养基应符合《中国药典》2010年版有关规定及(CNAS-CL09:2006)实验室现场评审核查表《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》实验室应建立和保持有效的适合试验范围的培养基（试剂）质量控制程序第九页，共50页。二、培养基应做的质量管理工作：（1）建立培养基质量控制程序如：培养基质量控制程序（2）培养基的配制操作SOP如：培养基配制标准操作规程（3）培养基配制记录如：培养基配制原始记录（4）培养基适用性检查如：培养基适用性检查记录表培养基灵敏度检查表

第十页，共50页。二、培养基培养基储藏保管注意：

干粉培养基包装未开启使用前应储藏在阴凉干燥处，开启使用后的应置冰箱储藏，防止微生物生长、吸潮、结块、变质。应有专人保管并建立帐册。帐目立项：进货日期、品名、规格、批号、数量（瓶）、领用日期、领用数量、领用人等。第十一页，共50页。二、培养基严格遵守用验证过的灭菌程序灭菌。（温度和时间）灭菌后的培养基应注意避光保存，防止第二次污染。应有配制培养基的原始记录、灭菌记录

记录项目：日期、名称、批号、配置数量、配制人

第十二页，共50页。无菌检查培养基适用性检查无菌性检查灵敏度检查金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌黑曲霉白色念珠菌第十三页，共50页。微生物限度检查培养基适用性检查计数培养基控制菌检查用培养基促生长能力抑制能力指示能力对照培养基第十四页，共50页。培养基的储存

培养基的制备（灭菌温度、时间）（适用性检查、pH值、定期稳定性）培养基的质量控制３.２.１.关注要点第十五页，共50页。三、菌种

应符合：《中国药典》2010年版相关规定和(CNAS-CL09:2006)《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》菌种管理的重要性

在微生物检验中用的菌种，相当于在理化分析中用的对照品。微生物实验室对菌种的管理除了相当于化学实验室对对照品的管理要求外，还有菌种保存的特殊性。第十六页，共50页。三、菌种溯源性、有记录

微生物检验室用于验证试验、阳性对照试验、培养基适用性试验等的对照菌种，应是一批形态、生物化学、血清学特性稳定的标准菌株，这些菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。第十七页，共50页。三、菌种

CNAS-CL09：2)实验室应有文件化的菌种管理程序（从原始菌种到日常工作用菌）该程序应包括：a)参照菌种是否定期转种传代，并做确认试验，包括实验室中所需要的关键诊断指标？实验室是否加以记录并予以保存？b)每一支参照菌种都应以适当的标签、标记或其它标识方式来表示其名称、标准号、接种日期和所传代数。

第十八页，共50页。三、菌种

c)其管理记录中还应包括（但不限于）以下内容：——从原始菌种传代到工作用菌种的代数；——菌种生长的培养基及孵育条件；——菌种生存条件。

——要求上述a)、b)、c)均应有记录。

第十九页，共50页。三、菌种实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁的记录，应有文件化的程序管理菌种（从标准菌株到工作菌株），该程序包括：标准菌种的申购记录；从标准菌株到工作菌株操作及记录；菌种必须定期转种传代，并做纯度、特性等实验室所需关键诊断指标的确认，并记录；每支菌种都应适当标注，注明其名称、标准号、接种日期、所传代数；菌种生长的培养基和培养条件；菌种保存的位置和条件；其它需要的程序。第二十页，共50页。三、菌种实验室应做的质量管理工作：（1）建立菌种管理程序如：菌种管理程序（2）建立菌种转种操作SOP.如：检验用菌种保管与转种传代管理标准操作规程（3）建立菌种的领用制度如：实验菌种领用登记表（4）进行菌种保管的定期检查。如：菌种传代、使用记录第二十一页，共50页。三、菌种菌种管理举例：

1、菌种申购，应有室主任同意签字。2、指定专人负责保管，并持证上岗。3、建立菌种购入、领用进出帐册。4、有菌种专用冰箱加锁保藏。5、微生物实验室应分保藏菌种和工作用菌种。6、专人负责定期转种、传代工作。每次转种应严格核对慎防混淆。7、有转种、传代记录：日期、菌种名称、编号、传代次数、培养基、培养温度、菌落型态、确认试验、转种传代人签名。8、保藏菌种控制传代次数不超过5代9、转种后上一次菌种应高压灭菌后清洗。10、每管工作用菌种斜面开启后不得重复使用。并高压灭菌处理。

第二十二页，共50页。三、菌种

以上10点均应在建立的菌种管理文件（菌种管理程序、菌种管理标准操作规范（GL-SOP）、菌种转种传代标准操作规范（SOP)、菌种转种传代领用记录）有体现。第二十三页，共50页。

关注要点

１.菌种的来源标准菌株标准储备菌株工作菌株

２.菌种保藏３.菌种的传代和使用

５代内４.菌种的管理程序文件第二十四页，共50页。四、实验室的布局和运行(CNAS-CL09:2006)《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》☆对实验室设施的要求是以能获得可靠的生物检测结果为重要依据；实验室总体布局和各部位的安排应有利于减少潜在的对样本的污染和对人员的危害。☆对有洁净条件要求的工作区域应有明确标识。并能有效地进行控制、监测和记录☆

注意实验室间的有效隔离，

有适当措施防止交叉污染。☆对进入无菌或净化等特定区域的人员应有效控制。☆有妥善处理废弃样品和有害废弃物的设施和制度，并且注意生物安全。第二十五页，共50页。四、实验室的布局和运行（１）合理分区、操作便利、避免混乱、防止污染、生物安全（２）无菌检查

修订前万级（C）下局部百级（A）或隔离器

修订后B+A或D+隔离器（３）微生物限度检查

修订前万级（C）下局部百级修订后不低于受控环境下的B级第二十六页，共50页。四、实验室的布局和运行单向流空气区与工作台面必须定期按国家标准GB/T16292-16294-现行版【医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法】进行洁净度测定。第二十七页，共50页。四、实验室的布局和运行

洁净室使用管理——1、建立洁净室使用与清洁维护标准操作规程。

如：☆

洁净室的验证、使用与清洁维护标准操作规程☆

洁净室(区)使用标准操作规程第二十八页，共50页。四、实验室的布局和运行2、建立洁净室使用登记表。如：

☆

洁净室（区）使用、维修登记表

☆

洁净室（区）的清洁、维护记录表

——逐月保存并定期归档备查！第二十九页，共50页。微生物功能实验室1.洁净室或隔离系统：2.活菌操作区：（包括生化鉴定、分子生物学实验、必要的化学实验）3.辅助区域：无菌检查微生物限度检查无菌采样阳性间细菌实验室、真菌实验室微生物效价检定室培养室培养基及实验用具准备（包括灭菌）区样品接收和储藏区标准菌株储藏区污染物处理区第三十页，共50页。四、实验室的布局和运行洁净度级别悬浮粒子最大允许数/立方米静态动态≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA级352020352029B级3520293520002900C级3520002900352000029000D级352000029000不作规定不作规定监测标准参考GMP（2010），见下表各洁净级别空气悬浮粒子的标准

第三十一页，共50页。沉降菌物理参数表面微生物空气悬浮粒子浮游菌环境监控

关注要点

第三十二页，共50页。清洁、消毒和卫生标准操作规程杀死广泛的微生物对人体无毒害不腐蚀或玷污设备有清洁剂的作用性能稳定、作用快残留少、价格合理。种类定期更换监测微生物污染理想的消毒剂A级和B级洁净区应当使用无菌的或经无菌处理的消毒剂和清洁剂。第三十三页，共50页。五、设备1、高压灭菌锅管理

（1）档案建立：

从开箱验收记录→调试记录→专人负责制→操作规程（SOP）→定期校验检定→使用登记→维修记录→改造或更新记录→报废记录。应贯穿设备的一生。

（2）定期校验应由计量测试院定期强检，以确保消毒质量和使用安全。并贴有绿色合格标识后使用。

选择物理、化学指示剂和生物指示剂进行灭菌效果监测和验证。——留底温度计、三M试纸、嗜热脂肪芽孢杆菌，并且记录。第三十四页，共50页。五、设备（3）操作SOP的建立如：☆立式压力蒸汽灭菌器标准操作规程（4）建立使用记录、维护记录：如：☆

年高压灭菌锅（编号：

）使用记录第三十五页，共50页。五、设备净化工作台的管理（1）档案建立：

从开箱验收记录→调试记录→专人负责制→操作规程（SOP）→洁净度验证→使用登记→维修记录→高效过滤更换记录→报废记录。应贯穿设备的一生。（2）定期洁净度验证（3）操作SOP的建立（4）建立使用记录、维护记录：第三十六页，共50页。五、设备恒温干燥箱培养箱冰箱第三十七页，共50页。11311建立仪器设备的清洁保养制度114建立完整的仪器设备管理制度2建立仪器设备操作规程建立仪器设备使用、监控等记录清单化管理标识化管理分类管理

关注要点

第三十八页，共50页。

定期维护性能检定清洁消毒持证上岗（特殊设备）设备专用温度测量装置称量设备容量测定设备生物安全柜、层流超净台、高效过滤器其他设备1.设备的维护2.校准、性能验证和使用监测

关注要点

第三十九页，共50页。六、文件检验工作

规定质量方针、目标，描述管理体系的要素、要求、职责与途径

质量手册

实施体系各要素时涉及各部门管理体系程序文件质量活动的程序（谁、做什么、何时、何地、如何做）

标准操作规程操作中的技术细节（作业指导书、实施细则）（怎么做）

记录（报告、表格、原始记录等）结果、表明体系正在运行

使用范围

图1管理体系文件结构第四十页，共50页。六、文件写你所做的做你所写的记你所做的

第四十一页，共50页。六、文件文件充分表明试验是在实验室里按可控的检查法进行的。包括内容：人员培训与资格确认；设备验收、验证、检定（或校准期间核查）和维修；设备使用中的运行状态（设备的关键参数）；培养基制备、贮藏和质量控制；

菌种管理；检验规程中的关键步骤；数据记录与结果计算的确认；质量责任人对试验报告的评估；数据偏离的调查。

关注要点

第四十二页，共50页。七、实验记录实验结果可靠性原始记录书写应规范化。内容完整关键的实验细节检验标准选择严格按照SOP操作第四十三页，共50页。八、结果的判断

不符合药典或标准规定要原因调查。无菌阳性，按药典要求进行评估，确定是否进行重试。异常结果应进行偏差调查。

检测报告应该符合检测方法的要求。

准确、清晰、明确、客观地报告每一项或每一份检测的结果。实验结果充分全面评价。⑴⑵⑶(4)(5)

关注要点第四十四页，共50页。九、污染废弃物处理应符合实验室安全条例的要求及(CNAS-CL09:2006)《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》

实验室是