DB3301T 1082-2018堇叶紫金牛组赔繁育技术规程

ICS65.020.20B05浙江DB3301省杭州市地方标准DB/T1082—2018杭州市质量技术监督局发布IDB3301/T1082—2018前言本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规定起草。本标准由杭州市林业水利局提出并归口。本标准主要起草单位：杭州市园林绿化股份有限公司、杭州市林木种苗管理中心。本标准主要起草人：杨浩、孙英坤、胡亚芬、高凯、陈林敬、魏建芬、樊靖、姚涛、邱影、崔晓燕、王霁、李红霞。1DB3301/T1082—2018堇叶紫金牛组培繁育技术规程1范围本标准规定了堇叶紫金牛(Ardisiaviolacea)组培快繁过程中的外植体制备、组织培养、炼苗、上盆、容器苗管理、苗木出圃、档案管理等内容。本标准适用于杭州市范围内堇叶紫金牛的组培繁育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T2306－2013花卉种苗组培快繁技术规程DB33/T179林业育苗技术规程3母株选择选择长势旺盛、叶背暗紫色、叶脉清晰、无病虫害的植株作为组培繁殖母株，置于温室内培养。4外植体制备4.1外植体采集选择健壮选择健壮、无病虫害、带休眠腋芽的新发茎段为外植体材料。外植体采集后宜当日进行消毒处理，或保存于4℃冰箱，保存时间不宜超过2d。4.2外植体消毒4.2.1表面消毒沿叶柄基部切除外植体材料的叶片，用小毛刷蘸取少量洗洁精轻轻刷洗茎段表面，反复刷洗叶腋附近，用自来水冲洗干净；将外植体茎段切段，用0.1%的苯扎溴铵于磁力搅拌器上进行消毒处理,转速不宜超过200转/min；处理时间与茎段幼嫩程度选择5min~12min；倒掉消毒液，在流水下冲洗30min~60min。4.2.2深度消毒将表面消毒后的外植体材料置于无菌操作台上，用无菌水冲洗外植体茎段1次；使用75%乙醇溶液摇晃消毒处理，处理时间根据茎段幼嫩程度选择15s~90s；倒掉乙醇溶液，用1%次氯酸钠溶液摇晃消毒处理，处理时间与茎段幼嫩程度成反比，宜选择3s~10min；倒掉消毒液，用无菌水反复冲洗4~5次，每次5min。2DB3301/T1082—20185组培扩繁5.1培养基制备5.1.1培养基制备方法参照NY/T2306－2013花卉种苗组培快繁技术规程。5.1.2培养基配方参照附录A。5.2初代培养5.2.1将外植体茎段切成长度约2cm的小段，并带有1个休眠腋芽。5.2.2用无菌刀片切除小段下端(芽向上)褐化部分，迅速接种到初代培养基上。5.2.3培养条件：温度25±2℃、光照时间10h/d、光照强度1500Lx~2000Lx，相对湿度60%~65%。5.3增殖培养5.3.1将新发的侧芽嫩茎切下，接种到增殖培养基上。5.3.2培养条件：温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000Lx~2500Lx，相对湿度为60%~65%。5.3.3培养约40d后分化产生大量侧芽和不定芽丛。5.4壮苗培养5.4.1将不定芽丛轻轻拨散成单个不定芽，将伸长的侧芽嫩茎切下，接种到壮苗培养基。5.4.2培养条件为温度25±2℃、光照时间12h/d、光照强度2000Lx~2500Lx、相对湿度60%~65%。5.4.3壮苗培养约20d后，再生小苗达到叶片数量6枚以上、高度5cm以上、茎粗2mm以上可进行生根培养。5.5生根培养5.5.1切除再生小苗基部愈伤组织，接种到生根培养基上。5.5.2培养条件：温度28±2℃、光照时间为8h/d、光照强度1000Lx~1500Lx、相对湿度70%~80%。5.5.3生根培养40d~50d后，不定根或主根数量达到4条以上、根长1cm~3cm、叶片数量8枚以上、6炼苗6.1炼苗条件宜选择温室。炼苗控制条件：遮光率90%以上、温度20~25℃、相对湿度约60%。6.2炼苗方法将组培瓶苗置于温室苗床上驯化25d~30d；移栽前3d~4d松动组培瓶盖，部分打开；移栽前1d~2d，完全打开组培瓶盖，并加入少量无菌水，无菌水以达到最下端叶片为宜。7移栽3DB3301/T1082—20187.1基质准备7.1.1配方选用粒径2cm~3cm的松鳞作为炼苗基质。基质应理化性能稳定、不带病菌、虫卵、杂草等。7.1.2分装将炼苗基质分装到42cm×42cm×5cm方盘，摆放至苗床上，基质表面与方盘上边缘齐平为宜。7.1.3消毒移栽前7d使用0.2%高锰酸钾对基质进行消毒处理，消毒液宜浸透基质底部，并用塑料薄膜覆盖严实。7.2移栽7.2.1轻轻取出生根苗，用清水洗净根部培养基后，以3株~4株为一丛植入炼苗基质中，深度以基质刚覆盖根系为宜，密度以4cm×4cm为宜。7.2.2生根苗植入方盘后浇透水，均匀喷洒0.3%多菌灵溶液，用封闭小拱棚覆盖约30d。小拱棚内温度应控制在28℃~33℃、相对湿度约80%。覆盖期间可适当打开小拱棚两端通风以调节温度、相对湿度；7.2.3待小苗长出新的须状根并恢复正常生长后，打开小拱棚两端通风7d~14d，然后完全打开小拱棚培养6个月以上。通风期间应及时观测基质水分变化，适时补水以保持基质湿润。8上盆8.1基质准备基质配方为50%珍珠岩、25%泥炭、25%松磷(体积比)，充分拌匀备用。基质应理化性能稳定、不带病菌、虫卵、杂草等。8.2容器选择可选用12cmX10cm营养钵。8.3上盆容器中装填1/2容器体积的基质，将方盘苗单株放入容器中间，装入基质盖住根系并墩实，基质低于容器口1cm左右。8.4上盆苗摆放于温室或阴盆区条状摆放，条宽1m~1.2m，留操作步道0.5m。9容器苗管理9.1遮阴遮光率应达到70%以上。9.2水分管理上盆后及时浇透水，隔天检查基质水分情况，水分不足的及时补浇；梅雨季应注意排水。4DB3301/T1082—20189.3病虫害防治上盆1个月后，喷施0.1%~0.3%除蜗灵或预防蜗牛危害，并喷施0.1%~0.15%多菌灵溶液预防病害。10苗木出圃10.1出圃质量要求无病虫害；1年~2年生容器苗XXX，2年~3年生容器苗XXX。叶背暗紫色、叶脉清晰；根系发达、无机械损伤。10.2容器苗出圃按DB33/T179执行。10.3苗木检疫按照《植物检疫条例实施细则(林业部分)》进行检疫。10.4包装与运输按DB33/T179执行。11档案管理按DB33/T179执行。5DB3301/T1082—2018AA附录A(资料性附录)堇叶紫金牛常用培养基配方A.1堇叶紫金牛常用培养基配方表A.1堇叶紫金牛常用培养基配方基本培养基氯吡苯脲(CPPU)mg/L萘乙酸(NAA)mg/L吲哚丁酸(IBA)mg/L蔗糖g/L卡拉胶g/L活性炭(AC)g/LpH初代培养基MS0.15~0.300.10~0.20—307—5.8~6.2增殖培养基MS0.50~0.800.10~0.20—307—5.8~6.2壮苗培养基MS0.10~0.15——307—5.8~6.2生根培养基1/2MS—0.50~0.800.50~0.802070.56.0注：1/2MS培养基是MS培养基大量元素减半。A.2堇叶紫金牛基本培养基成分表A.2堇叶紫金牛基本培养基成分名称成分浓度(mg/l)大量元素NH4NO31650KNO31900CaCl2·2H2O440MgSO4·7H2O370KH2PO4微量元素KI0.83H3BO36.20MnSO4·4HO22.30Z