细胞角蛋白19片段操作规程

文件编号：YHBE-JYK-MYS-008标准操作规程细胞角蛋白19片段测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：29-32页细胞角蛋白19片段测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：细胞角蛋白19片段测定（缩写CYFRA21-1）；组合项目申请：肿瘤标志物检查。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本米集2.1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆标本，用肝或EDTA抗凝。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本米集后，在检验申请单上填写标本米集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血浆，避免溶血。离心必须达到4000rpmX15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。标本保存时间：室温（15〜25°C）下可稳定8h，普通冰箱中（2〜8°C）稳定2d，在-20C最多可保存4周。避免反复冻融。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4〜8C冰箱内保存7d。2.3标本米集的注意事项2.3.1米血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。3方法原理细胞角蛋白19片段测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步:将标本与包被着抗CYFRA21-1抗体的超顺磁性磁珠以及抗CYFRA21-1抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，标本中的CYFRA21-1和包被在磁珠上的CYFRA21-1抗体结合，样本内的CYFRA21-1与包被在磁珠上的抗CYFRA21-1抗体结合，同时抗CYFRA21-1抗体-碱性磷酸酶标记物与样本CYFRA21-1上另一位点结合。在反应完成后，磁场吸附磁珠，洗去未结合的物质。第二步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。所产生光子数与样本内CYFRA21-1的浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。文件编号：YHBE-JYK-MYS-008标准操作规程细胞角蛋白19片段测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：29-32页4试剂及其他用品4.1试剂：CYFRA21-1测定试剂包，由深圳迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于2〜8°C，有效期365天。开启的试剂包载入系统中可使用28d。4.2试剂盒组分4.2.1磁珠包被物（Ra）成分：包被着抗CYFRA21-1（小鼠单抗，IgG）的超顺磁力微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。装量：2X30人份/盒，2X2.7ml；2X50人份/盒,2X3.8ml；2X100人份/盒，2X6.6ml。4.2.2酶标记物（Rb）成分：抗CYFRA21-1抗体（小鼠单抗，IgG）-碱性磷酸酶标记物溶解于缓冲液，含防腐剂。装量2X30人份/盒，2X2.4ml；2X50人份/盒,2X3.5ml；2X100人份/盒,2X6.3ml。4.2.3试剂即开即用，临用时轻柔旋转混匀数次，无须特殊准备。4.3其他试剂与用品4.3.1底物液4.3.2清洗缓冲液等。5校准品与校准模式5.1校准品：采用CYFRA21-1专用配套校准液。校准品需在2〜8C贮,有效期365天。5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。仪器根据校准曲线卡片数据（6参数对数拟合曲线）自动建立校准曲线。5.3校准周期：在同一批号试剂使用期间校准曲线有效，但在间隔28d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4校准液重建方法:冻干校准液，用1mL蒸馏水复溶，复溶后的校准液于2〜8C保存最长不超过5周，或于-20C最长保存10周。避免反复冻融。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用CYFRA21-1配套质控品。6.2质控液重建方法：液态质控液，即开即用，充分颠倒混匀，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。6.4质控规则：采用L-J质控图，以土3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器深圳迈瑞CL-1200i自动发光免疫分析仪。8标本检测步骤装载试剂…进行校准…进行质控…输入标本检测项目…加载标本f标本测定…结果复核…报告。9主要分析参数

文件编号：YHBE-JYK-MYS-008标准操作规程细胞角蛋白19片段测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数:29-32页一无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本10闫。10结果计算一仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以ng/mL表示。11检验结果的报告及范围试剂11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0.00~30.00U/ml,超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本重新稀释后重复测定的结果。12操作性能精密度：批内CVV3%；批间CVV5%。分析范围：0.1~500ng/ml。分析灵敏度：0.01ng/ml。12.4方法的有限性及干扰因素：轻度溶血、黄疸、前列腺ACP对本试验无明显干扰。甘油三脂(W1500mg/dL)、血红蛋白(W1500mg/dL)或胆红素(W70mg/L)时对测试结果干扰偏差±10%范围内；含类风湿因子(浓度W800IU/ml)的样本，对测试结果干扰偏差±15%范围内。2000mg/ml以内没有hook效应。13参考范围及医学决定水平参考范围：0~30.00U/ml14临床意义1.各类非小细胞肺癌阳性检出率为70%〜85%，且水平高低与肿瘤临床分期正相关。对各型肺癌诊断的敏感性依次为鳞癌〉腺癌〉大细胞癌〉小细胞癌。可作为肺癌手术和放化疗后追踪早期复发的有效指标。率。1515.115.2率。1515.115.2结果审核以及分析与相关项目的联系由资深专业人员负责检验结果的审核。审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与其他肿瘤标志物的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16有关引用程序与文件CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。16.2免疫检验室内质控标准操作程序。16.3检验结果审核程序。16.4标本送检和接收程序。文件编号：YHBE-JYK-MYS-008标准操作规程细胞角蛋白19片段测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：29-32页17参考文献17.1陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术规程.杭州:浙江大学出版社,2004.17.2细胞角蛋白19片段测定试剂说明书。17.3叶应妩，王毓三，申子