肿瘤医院-egfr研究报告

临床产品名称：人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探法型号规格：24人份/产品申请人（盖章：华大吉比爱生物技 研究单位：福建省肿瘤医院主要研究者（签字统计学负责单位（盖章：福建省肿瘤医院统计学（签字：研究开始日期 研究完成日期 原始资料保存地点：福建省肿瘤医院 目研 试验研究人 缩略 一、引 二、研究目的和内 三、试验管 四、试验设 五、有关临床研究中特别情况的说 六、记录保 七、临床研究结果及分 八、讨论和结 九、附 研究表明表皮因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)突变与肺癌对与抗肿瘤药物酪氨酸激酶抑制剂的敏感性有关。根据国内统计数据，我国非小细胞肺癌(Non-small-cellcarcinoma,NSCLC)患者中EGFR突变率在30%左右，其中21号L858R19号外显子的缺失(19deletion,19del)EGFR90%以上。而肺癌的前期临床试验表明，在含铂类药物联合化疗失败后，易瑞12%-18%50%7个月左右，受试者的症状改善且安全性良好，所以EGFR突变检测对于临床医生进行肺癌的个体化治疗具有重要的参考价值。至目前为止东方人NSCLC的有效率多在25%～35%，而西方人的有效率仅在8%～15%。因此，EGFR突变检测，尤其是19号和21号外显子突变检测对于临床医生进行肺癌的化治疗具有重要的参考价值。华大生物技术依托自身现有技术，全面整合各种优势资源，研发准确、可靠且适合临床应用检测的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法，为晚期非小细胞肺癌患者的靶向诊断治疗提供辅助。不精密度，各种试剂稳定性良好。有关临床性能评估工作在首都医学附属胸科医院进行，本试剂盒的临床灵敏度、临床特异性从而验证本产品与已上市产品的等通过对福建省肿瘤医院的259份临床试验数据综合分析，华大生物技术生产的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）相对于试剂盒检测EGFR_19del的阳性符合率为93.65%，符合率为97.45%，总符合率为96.53%，Youden91.10%，KappaKappa=0.906>0.7595%的置信区间内，表明试剂和试剂检测EGFR_19del有较好的一致性；华大吉比爱生物技术生产的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）相对于试剂盒检测EGFR_L858R的阳性符合率为92.00%，符合率为98.56%，97.30%，Youden90.56%，KappaKappa=0.913>0.75，表明在95%的置信区间内，表明试剂和试剂检测EGFR_L858R有较好的一致性综上所述，华大生物技术的人EGFR20种突变检测试剂男，医学，副医师，教授，导师。现任长、病理科行政副、福省肿 分子病理研究室政 、肿瘤组织库织病理感，尤其擅长淋巴生polymerasechainreaction(PCR) Real-timePCR 实时荧光定量PCRepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)表皮生长因子受体一、引言肺癌是严重危害人民生命和健康的常见病。肺癌在城市占 的38.08%,女性患者约为16均居首位肺癌治疗效果多年来一直没有显著提高总治愈率仅为10%左右其原因一方面由于其生物学特性十分复杂恶性程度高且多药药另一方面关键还在80%以上的肺癌在确诊时已属晚期晚期非细小性肺癌的传疗方法是以化疗为主的综合治疗，经年来虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是其疗效没有明显的提高。针对表皮生长因子受体(pidermalgrowthftorrpto,E)的靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂因其疗效好、副作用小，在全世界范围内应用开来，目前在临床广泛使用的药物有吉非替尼(Ir)和厄洛替尼。研究表明表皮因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)突变与肺癌对与酪氨酸激酶抑制剂的敏感性有关。根据国内据统计数据，我国非小细胞肺癌EGFR突变率在30%左右其中21号外显子L858R和19号外显子的缺失是主要突变位点，占EGFR总突变的90%以上。而肺癌的前期临床试验表明，在含铂类药物联合化疗失败后，仍有12%-18%的客观有效率，疾病控制率在50%左右，中位生存期约为7个月左右，受试者的症状改善且安全性良好，所以EGFR突变检测对于临床医生进行肺癌的化治疗具有重要的参考价值。至目前为止东方人NSCLC的有效率多在25%～35%，而西方人的有效率仅在8%～15%。因此，EGFR突变检测，尤其是19号和21号外显子突变检测对于临床医生进行肺癌的化治疗具有重要的参DNA法是目前临床检测突变的公认标准方法，但由于其分辨度低（20%以瘤细胞用于后续检测；此外，由于需要扩增后再进序，所需检测时间长且费用高，目前临侧重于使用基于荧光定量PCR技术核酸检测技术的检测试剂盒已经批准临床使用的试剂盒也主要集中于EGFR的19号和21号外显子，主要厂家有：北京金菩嘉医疗科技的EGFR突变检测试剂（荧光PCR法可检测EGFR19、21外显子4个常见突变型；厦门生物科技人类EGFR京雅康博生物科技的人EGFR突变检测试剂盒(荧光PCR法)可检测EGFR18、19、21外显子12种突变型；源奇生物科技人EGFR突为了考核华大生物技术研制的人EGFR20种突变检测试报告中国医学协和医院作为临床牵头单位组织此次临床试验的设计和实施二、研究目的和内容研究目本临床试验目的为考核华大生物技术生产的人EGFR研究内本研究收集了肺癌患者手术切除肿瘤组织石蜡样本，采用对比试剂对样本中EGFR样本，进行复测，复测仍不一致的经第试剂进行验证；通过对检测结果进行统计分析，评价本试剂盒检测EGFR20种突变的临床灵敏度、临床特异性、检测结果的准确性，从而验证本产品与已上市产品的等效性；在此基础上出具临床。三、试验管理承担临床研究机构的临床实验单位及主要参加人单位为福建省肿瘤医院。室内质量控制情本有严密的体系，全部实验均按科室相关操作规范进行，实验记录参加和省临检中心室间质量评价，测定项目合格编订作业指导书，对仪器进行定期、校准和功能检查的操作和测量操作规范。数据管理及统计情研究过程中发生的问题及处理措四、试验设计试验方案检测严格按照华大生物技术生产的人EGFR20种突变检汇总检测结果并进行统计分析，总结于临床试验设计和研究方法选择样本选择：肺癌患者，包括鳞癌、等样本、保存：试验样本均来源于福建省肿瘤医院临床检测石蜡包埋组织样本样本量：259本试剂盒的临床试验选择市场占有率较高的厦门生物科技的人类(荧光PCR法（国食药监械(准)2010第号）作为对比试剂，以该对比试剂检测结果评价华大生物技术生产的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-第试剂验证：对比对结果不一致的样本进行复测，复测仍不一致样本，选用酶切的方法进行验证。临床用产品被测试试剂人EGFR20种突变检测试剂（PCR-荧光探针法）批号 规格：24人份/盒，均为华大生物技术生产，效期9个月，保存对比试剂：厦门生物科技的人类，批号 人份/盒，效期：8第验证：酶切荧光定量PCR仪ABISteponeplusABI7500PCR漩涡振荡临床试验方案由华大生物技术与福建省肿瘤医院参照《体外诊试验用试剂的制造、处理、均应符合产品标准规定研究者应保证将数据真实、准确、完整、及时、合法地载入试验记录和临床报告中监查员应与研究者迅速发生的严重不良，采取必要的措施以保证临床试 符合率：试验检出的样本占对比试剂检出样本总数的比例Youden指数：是阳性符合率与符合率之和减1，用于表示诊断准确度。 阳性符合率=A/(A+C符合率=D/(B+D总符合率=(A+DA+B+C+DYouden指数{A/(A+C1D/(B+DKappa五、六、表一福建省肿瘤医院使用和试剂盒检测肺癌石蜡样本中EGFR-19del突变结果54 259对于19del缺失突变检测中：试剂盒检测肺癌石蜡样本中19del为阳性的样本共63例（突变类型见附件一；而试剂检测19del为阳性例数64例。4例试剂盒见附件二，3例酶切法为19del突变阳性样本（包括2例E746_A750（2、1例E746_A750（1，119del阳性而试剂盒试剂检测19del，采用酶切法进行检测，4例样本19del缺失突变阳性（2E746_A750（2）样本，1E746_T751>A样本，1，119del阳性符合率19del符合率19del总符合率19delYouden指数={93.651-97.45对称值近似值近似值 有效案例中的将福建省肿瘤医院样本用试剂和试剂共同检测259例样本的检测结果使用SPSS软件中Kappa检验软件包进行统计学分析，结果见图1。试剂和试剂检测EGFR突变的Kappa检验结果0.906>0.75，表明试剂和试剂检测19del有较好的一致性。表二福建省肿瘤医院使用和试剂盒检测肺癌石蜡样本中EGFR-L858R突变结果34 在L858R的检测中：试剂盒检测肺癌石蜡样本中L858R为阳性的样本共50例；而试剂检测L858R为阳性例数49例。4例试剂盒试剂检测L858R阳性而吉爱试剂检测L858R，采用酶切法进行检测，1例酶切法为野生型，2例酶切法为L858R阳性，1例样本浓度低达不到要求，可能由于经酶切后，样本度偏低。3例试剂检测L858R阳性而试剂盒试剂检测L858R，采用酶切法进行检测，1例酶切法为L858R阳性，2例样本浓度低达不到要求。人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）检测EGFR临床分析性能L858R阳性符合率=46/50×100%=92.00%L858R符合率=206/209×100%=98.56%L858R总符合率=(46+206)/259×100%=97.30%L858RYouden指数={92.001-98.56对称值近似值近似值 有效案例中的图2试剂（GBI）与Sanger法检测K-ras突变经SPSS软件Kappa检验结将福建省肿瘤医院样本用试剂和试剂共同检测259例样本的检测结果使用SPSS软件中Kappa检验软件包进行统计学分析，结果见图2。试剂和试剂盒检测EGFR突变的Kappa检验结果0.913>0.75，表明试剂和试剂检测L858R有较好的一致性。八、讨论和结论通过对福建省肿瘤医院的259份临床试验数据综合分析，华大生物技术生产的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）相对于剂盒检测EGFR_19del的阳性符合率为93.65%，符合率为97.45%，总符合率为96.53%，Youden91.10%，KappaKappa=0.906>0.7595%的置信区间内，表明试剂和试剂检测EGFR_19del有较好的一致性；华大吉比爱生物技术生产的人EGFR20种突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）相对于试剂盒检测EGFR_L858R的阳性符合率为92.00%，符合率为98.56%，97.30%，Youden90.56%，KappaKappa=0.913>0.75在95%的置信区间内，表明试剂和试剂检测EGFR_L858R有较好的一致性。综上所述，华大生物技术生产的人EGFR20种突变检测九、附件附件一、对比试剂检测EGFR突变阳性样本各突变类型统计附件二、酶切法进行第验证附件四、人EGFR20种突变检测试剂盒临床试验项目病例报告附件一、对比试剂检测EGFR突变阳性样本各突变类型统BaseAminoAcid检测阳p.E746_A750del80p.E746_T7510300p.E746_A750del000p.L747_E7490p.L747_T7510p.L747_S75200050p.L747_T751006319del31例可确定具体突变型，32例附件二、酶切法进行第验证一、酶切法进行第验证采用临床分子诊断金标准的CR作为作为第试剂，验证考核试剂与对比试剂检测结果不一致样本。同时，在CR.第一轮CR酶切：对捕获出的目的区域进行酶切反应，消化野生型片段。第二轮PCR：进行第二轮PCR富集反应，富集目的区域，达到标准。二、实验设计EGFR19del酶切限制性内切酶MseI，可特异性识别TTAA位点。在第一轮PCR反应后时，突变位点不能被内切酶MseI识别；未发生缺失突变的TTAA可被MseI限制性内切酶识别并酶切，从而使突变型得到富集[1,2,3,4]。引物设计（生工合成EGFR19del酶切限制性内切酶MscI，可特异性识别TGGCCA位点。在第一轮PCR反应后对产物进行酶切消化。L858R突变发生在TGGCCA位点(T>G)，当发生突变时，突变位点不能被内切酶MscI识别；未发生缺失突变的TGGCCA可被MscI内切酶识别并酶切，从而使突变型得到富集[1,2,3,4]。引物设计（生工合成Exon21-三、酶切流1反应组F0.2（10R0.2（10水人组3共PCR95℃95℃10s,55℃35s，20cycles；72℃5min；12forever2、酶反应组215共酶切PCR37℃60min，65℃3反应组F0.6（10R0.6（10水5共PCR95℃95℃10s,55℃35s，35-4012℃4、将二轮PCR的产物取5ul电泳剩余25ul送生工或英俊进序5、结果判、成功样本，根据峰图是否出现突变峰判定结果CR1CR野生型存在被完全酶切情况如果样本中无突变则可能被完全酶切导致失败2样本片段化严重有效DNA含量低存在CR抑制剂等导致CR扩增失败。参考文1YangF,ChenK,JiangG,LiJ,WangJ.ModifiedRestrictionEnzyme-basedDetectionofEGFRMutationsinLungCancer.ZhongguoFeiAiZaZhi2011Aug;14(8):637-41.