吩噻嗪类药物的分析

吩噻嗪类药物的分析第1页，共58页，2023年，2月20日，星期四一、基本结构1.硫氮杂蒽母核10123456789R：具有2～3碳链的二甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物R’：-H，-Cl，-CF3，-COCH3吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核，基本结构如下：

第一节基本结构与主要性质第2页，共58页，2023年，2月20日，星期四氯丙嗪异丙嗪第3页，共58页，2023年，2月20日，星期四奋乃静奋乃静盐酸氟奋乃静第4页，共58页，2023年，2月20日，星期四盐酸三氟拉嗪盐酸硫利达嗪第5页，共58页，2023年，2月20日，星期四1.弱碱性:具有弱碱性，极弱脂肪烃氨基、呱嗪及呱啶等衍生物所含氮原子碱性较强，可用于鉴别和含量测定二、主要性质：第6页，共58页，2023年，2月20日，星期四硫氮杂蒽环上硫原子为2价，易氧化呈色。母核易被氧化成等不同的产物，随取代基的不同，呈现不同的颜色。2.氧化呈色：易被硫酸、硝酸、过氧化氢、三氯化铁氧化，可用于鉴别和含量测定，过程与产物比较复杂第7页，共58页，2023年，2月20日，星期四3.与金属离子配合呈色：硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子，易与金属离子络合呈色。其氧化产物砜和亚砜无此反应。第8页，共58页，2023年，2月20日，星期四

4.紫外和红外吸收：含S、N的三环共轭的大体系。S、N与苯环形成p-共轭。紫外吸收主要由母核三环的π系统所产生，一般具三个峰值。204～209nm（205nm附近）、250～265nm（254nm附近）和300～325nm（300nm附近）。最强峰多在250～265nm。

2位上取代基（R′）不同，会引起吸收峰发生位移。结构中2价硫，易氧化，产物砜及亚砜有四个吸收峰。第9页，共58页，2023年，2月20日，星期四第10页，共58页，2023年，2月20日，星期四5.红外吸收光谱特性:由于取代基R和R’的不同，具有不同的红外光谱，已被药典用于不同品种鉴别。第11页，共58页，2023年，2月20日，星期四第二节鉴别试验一、化学法（一）与生物碱沉淀试剂反应吩噻嗪类药物10位的含氮取代基有碱性，可与生物碱沉淀试剂反应第12页，共58页，2023年，2月20日，星期四（二）氧化显色反应：

氧化剂氧化显色：H2SO4、溴水、FeCl3、H2O2

吩噻嗪环为一良好电子给予体。相继失去电子形成几个不同的氧化阶，而形成自由基型产物（自由基、半醌自由基）和非离子型氧化产物（亚砜、砜、3-羟基吩噻嗪、吩噻酮等）故可被多种氧化剂氧化而呈色。第13页，共58页，2023年，2月20日，星期四

显色反应

药物名称硫酸硝酸过氧化氢

盐酸氯丙嗪显红色,渐变淡黄色—

盐酸异丙嗪显樱桃红色,放置生成红色沉淀,加热即溶解,

后颜色渐变深溶液由红色转变为橙黄色奋乃静—

—

显深红色;放置后红色渐褪去盐酸氟奋乃静显淡红色,温热—

—

后变成红褐色盐酸三氟拉嗪—

生成微带红色的白色沉淀;放—

置后,红色变深,加热后变黄色

盐酸硫利达嗪显蓝色

—

—

第14页，共58页，2023年，2月20日，星期四例：盐酸氯丙嗪ChP（2010）[鉴别]（1）取本品10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴，即显红色，渐变成行色。例：盐酸氯丙嗪（糖衣）片ChP（2010）[鉴别]（1）取本品，除去糖衣，研细，称取细粉适量，加水1ml,振摇使盐酸氯丙嗪溶解，滤过；滤液照盐酸氯丙嗪项下的鉴别试验，显相同反应。第15页，共58页，2023年，2月20日，星期四（三）与钯离子络合显色利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。该反应被ChP（2010）用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别。不受氧化产物亚砜和砜的干扰第16页，共58页，2023年，2月20日，星期四（四）含卤素取代基的反应1.焰色反应2.显色反应吩噻嗪类药物2位的含氟取代基，可经有机破坏后，分解后的氟化物，在酸性条件下，与茜草锆试液反应呈色。第17页，共58页，2023年，2月20日，星期四（五）氯化物的鉴别反应1.硝酸银的沉淀反应2.氧化还原反应第18页，共58页，2023年，2月20日，星期四1、特征的紫外吸收：

药物溶剂浓度(μg/ml)λmax

(nm)A盐酸氯丙嗪盐酸(9→1000)52540.46915306－－盐酸异丙嗪盐酸(0.1mol/L)6249－883~937奋乃静无水乙醇72580.65－癸氟奋乃静乙醇10260－－盐酸氟奋乃静盐酸(9→1000)10255－553~593盐酸三氟拉嗪盐酸(1→20)10256－630盐酸硫利达嗪乙醇8264与315－－二、光谱法

第19页，共58页，2023年，2月20日，星期四盐酸氯丙嗪及其制剂的有关物质检查第三节有关物质的检查合成工艺第20页，共58页，2023年，2月20日，星期四第21页，共58页，2023年，2月20日，星期四第22页，共58页，2023年，2月20日，星期四其他烷基化吩噻嗪类化合物第23页，共58页，2023年，2月20日，星期四贮藏不当产生的氧化物第24页，共58页，2023年，2月20日，星期四LOGO有关物质的检查方法:(ChP2010)

HPLC法供试品：0.4mg/ｍl对照品：供试品稀释至2μg/ｍl色谱柱：辛烷基硅烷键和硅胶流动相：乙腈-0.5%三氟乙酸（50：50）检测波长：254nm

判定：供试品溶液如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于主峰面积（0.5%），各杂质峰面积和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0%）。注：避光操作；溶液临用新配。主成分自身对照法离子对试剂，增加氯丙嗪的保留同时检查多个有关物质第25页，共58页，2023年，2月20日，星期四第四节含量测定酸碱滴定法非水溶液滴定法乙醇-水溶液中的氢氧化钠滴定法紫外分光光度法高效液相色谱法第26页，共58页，2023年，2月20日，星期四

吩噻嗪类原料药物含量测定大多利用其侧链脂肪胺碱性，国内外药典多采用非水滴定法测定本类药物及其盐酸盐原料药的含量。非水溶液滴定法一、酸碱滴定法第27页，共58页，2023年，2月20日，星期四【ChP盐酸氯丙嗪含量测定】

取本品约0.2g．精密称定．加冰醋酸10ml与醋酐30ml溶解后，照电位滴定法，用高氯酸(0.1mol/L)滴定液滴定，并将滴定结果用空白试验校正。

每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于35.53mg盐酸氯丙嗪。氯丙嗪的碱性较弱，醋酐解离生成醋酐合乙酰氧离子比醋酸合质子的酸性强，更利于增加氯丙嗪的碱性第28页，共58页，2023年，2月20日，星期四注意：滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，故高氯酸滴定液的浓度受温度的影响。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差超过10℃时,应重新标定；温差未超过10℃时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：N测=N标/[1+0.0011（t测-t标）]第29页，共58页，2023年，2月20日，星期四乙醇-水溶液中的氢氧化钠滴定法

吩噻嗪类药物的盐酸盐的水溶液显酸性，在乙醇-水溶液中，可采用氢氧化钠滴定液测定其含量。ChP盐酸异丙嗪含量测定采用此法第30页，共58页，2023年，2月20日，星期四操作：取10片，除去糖衣后，精称，研细→称取粉末适量→加水、盐酸溶解→过滤，取滤液于249nm处测定。已知：盐酸异丙嗪E=910，即可计算优点：不需标准品缺点：仪器精密度要求高测定中注意问题：避光、防止氧化。1.直接分光光度法：盐酸异丙嗪片的测定二、紫外分光光度法第31页，共58页，2023年，2月20日，星期四

盐酸异丙嗪：片剂测定波长为249nm（为910）；注射液为了消除抗氧剂维生素C（max243nm）对测定的干扰，测定波长改为299nm（为108）。

同理，盐酸氯丙嗪片剂测定波长为254nm（为915）；注射液测定波长改为306nm（为115）。盐酸异丙嗪注射剂的测定波长的选择第32页，共58页，2023年，2月20日，星期四1、盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，选择在299nm波长处测定，其原因是（C）A、299nm处是它的最大吸收波长B、为了排除其氧化产物的影响C、为了排除抗氧剂的干扰D、在299nm处，它的吸收值最稳定E、在299nm处测定误差最小第33页，共58页，2023年，2月20日，星期四2.提取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液第34页，共58页，2023年，2月20日，星期四3.提取后双波长分光光度法：用于校正样品中氧化产物对测定影响（1）原理在待测组分（a）的最大吸收波长（测定波长，1）处测定待测组分和干扰组分（b）吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，2）测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大。第35页，共58页，2023年，2月20日，星期四（2）定量依据

样品在二波长下吸收度差值（A）：即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。第36页，共58页，2023年，2月20日，星期四双波长分光光度法波长选择：测定波长测，参比波长参⊿A标测参⊿A样⊿A样=A测’

-A参’

⊿A标=A测-A参C样=C标⊿A样⊿A标第37页，共58页，2023年，2月20日，星期四①干扰组分在两个波长处吸收度相等②待测组分在两个波长处吸收度相差足够大（3）必要条件（4）应用氯丙嗪的最大吸收波长为254nm,其氧化产物在此波长也有吸收,同时在277nm处氧化产物也有吸收,且其吸收度与在254nm处吸收度相等,而氯丙嗪在此波长处无吸收。A=A254-A277第38页，共58页，2023年，2月20日，星期四①萃取：除去抗氧剂的干扰例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定（USP32-NF27)第39页，共58页，2023年，2月20日，星期四

②双波长分光光度法测定：排除氧化产物的干扰测定波长254nm

参比波长277nm

对照法定量(A254-A277)样(A254-A277)标×C标×

12.5/V第40页，共58页，2023年，2月20日，星期四抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定。4.二阶导数分光光度法盐酸氯丙嗪注射液

因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰266nm～谷254nm距离，标准曲线法定量。第41页，共58页，2023年，2月20日，星期四

原理：吩噻嗪类药物可与一些金属离子（如Pd2+）在适当pH值的溶液中形成有色的络合物，借以进行比色测定。5.钯离子比色法第42页，共58页，2023年，2月20日，星期四优点：钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定反应在pH2±0.1的缓冲液中进行第43页，共58页，2023年，2月20日，星期四（1）钯离子试剂：PdCl2和十二烷基硫酸酯钯盐。用PdCl2时，形成的有色络合物水中溶解度小,样品量大时,产生沉淀。十二烷基硫酸酯钯盐,其络合物溶解度大,吸收强度增大（约2倍）。讨论：第44页，共58页，2023年，2月20日，星期四三、高效液相色谱法：（一）反相高效液相色谱法固定相：十八烷基键合硅胶流动相：水-甲醇，水-乙腈中加入含氮碱性试剂（扫尾剂）如二乙胺、三乙胺等。采用反相HPLC法测定本类药物含量时，常常会产生拖尾现象，这是因为ODS固定相表面未被硅烷化的硅醇基与碱性药物发生了吸附或离子交换作用。第45页，共58页，2023年，2月20日，星期四解决的方法有：调整流动相pH，使呈弱碱性（pH7-8）加含氮碱性试剂（扫尾剂），最常用的扫尾剂为醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等更换固定相，用硅胶柱或金刚烷基硅烷化硅胶固定相离子对HPLC法(常用反离子为烷基磺酸盐)抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性第46页，共58页，2023年，2月20日，星期四离子型化合物或能解离的化合物用常规HPLC分离时，常会出现色谱峰拖尾和保留值不稳定等问题，用离子对色谱则能解决以上问题。（二）离子对色谱法离子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合，适用于pKa在2-8的弱酸和弱碱性化合物的分离。通常使用反相ion-pair色谱，因离子对试剂在极性流动相中易于溶解，并易于调整控制反离子的浓度和流动相的pH值。第47页，共58页，2023年，2月20日，星期四1.原理：在流动相中加入与成解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，使之与待测组分离子形成离子对，增加待测组分在非极性固定相中的分配，从而改善其色谱保留与分离行为。第48页，共58页，2023年，2月20日，星期四对于酸类样品（RCOOH），用四丁基铵盐（TBA+X-）RCOOHRCOO-+H+TBA+X-TBA++X-RCOO-+TBA+RCOO-TBA++++---第49页，共58页，2023年，2月20日，星期四离子对试剂因其烷基的疏水性，为C18或C8固定相所吸附，生成动态覆盖的离子交换剂，通过离子交换，保留样品离子对于碱性样品B，用烷基磺酸盐（R-SO3Na）做离子对试剂。B+HBH+R-SO3NaR-SO3-

+

Na+BH++R-SO3-

BH+R-SO3-

第50页，共58页，2023年，2月20日，星期四（1）离子对试剂的性质和浓度：在一定范围内，离子对试剂浓度增加，保留增加，通常所用浓度为0.003mol/ml～0.01mol/ml。（2）流动相PH：是IPC分离的重要条件，酸性样品PH应大于Pka两个单位，使其解离成RCOO-，碱性样品，PH应小于Pka两个单位，使其解离成BH+。（3）流动相的组成：（4）离子强度：2.影响离子对形成的条件第51页，共58页，2023年，2月20日，星期四①样品中含有-COOH,-SO3H基团时,选用的离子对试剂应是带正电荷的有机铵盐，以此增加样品阴离子在反相色谱中的保留值，选用的流动相一般都为甲醇/水；②除了加入离子对试剂外，还要加入磷酸盐或其他缓冲液，以控制流动相的酸度，从而使这些酸性或碱性官能团能完全解离，最大程度形成离子对；3.离子对试剂和其他添加剂的一般选用规则第52页，共58页，2023年，2月20日，星期四③样品中含有-NH2，-NH-基团或其他阳离子时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）其他盐类；④样品中同时含有-NH2，-COOH