临床微生物检查课件 第17章-支原体-11检本

2023/4/41支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、呈高度多形性、能通过除菌滤器,在无生命培养基中能生长繁殖的最小的原核细胞型微生物.能通过0.45um滤菌器,细胞膜含胆固醇,二分裂繁殖,含DNA与RNA.由于它们能形成有分枝的长丝,故称之为支原体.2023/4/42柔膜纲支原体目支原体科无胆甾支原体科螺旋原体科支原体属脲原体属分类与命名：2023/4/43对人致病的主要有：肺炎支原体人型支原体生殖器支原体穿通(穿透)支原体溶脲脲原体(解脲脲原体)2023/4/44第2节肺炎支原体

(Mycoplasmapneumoniae)2023/4/45微生物特性形态与结构：大小:0.3～0.5m×2～5m环状双股DNA无细胞壁,高度多形性有球形、杆状、丝状体等,有时可见分枝与星状体.G—,不易着色;Giemsa染色:淡紫色.2023/4/462023/4/47细胞膜:胆固醇约占36%凡能作用于胆固醇的物质均可破坏支原体细胞膜,使其死亡.如：二性霉素B、皂素、毛地黄苷等顶端结构粘附功能P1蛋白、43kd菌体蛋白.2023/4/48培养特性：营养要求高于一般细菌：需要加入10~20%马或小牛血清,用于提供胆固醇和其他长链脂肪酸.多数支原体还需添加新鲜酵母浸液、组织浸液、核酸提取物、辅酶等.2023/4/49pH：为7.8～8.0,低于7.0易死亡.温度：37℃繁殖方式：二分裂,出芽等胞浆分裂落后于基因组的复制,可形成多核丝状体2023/4/410生长缓慢,在固体培养基上37℃培养2～3天(有的需2周),形成菌落.典型菌落呈荷包蛋样.肺炎支原体菌落人型支原体菌落和解脲脲原体呈微小菌落2023/4/411液体培养基：支原体的生长量较少,且个体小,一般不易见到混浊,只有小颗粒沉于管底。2023/4/412生化反应：支原体可根据是否能利用葡萄糖、水解精氨酸和尿素来进行鉴别

支原体葡萄糖精氨酸尿素致病性肺炎支原体＋－－肺炎、支气管炎人型支原体－＋－泌尿生殖道感染生殖器支原体＋－－泌尿生殖道感染穿通支原体＋＋－多见于艾滋病解脲脲原体－－＋泌尿生殖道感染2023/4/413分解尿素或水解精氨酸产碱发酵葡萄糖产酸2023/4/414抗原结构：细胞膜外层蛋白质：型特异性抗原.生长抑制试验(GIT)和代谢抑制试验(MIT)鉴定.P1蛋白和43kda菌体蛋白,是主要特异性抗原.2023/4/415抑菌环型特异性抗血清纸片生长抑制试验(growthinhibitiontest,GIT)2023/4/416代谢抑制试验(metabolicinhibitiontest,MIT)支原体接种在一个含有抗血清的酚红葡萄糖培养基中,若抗体与支原体型相应,则抑制支原体的生长代谢,不能分解葡萄糖产酸,酚红不变颜色2023/4/417抵抗力：无细胞壁,对理化因素的影响比一般细菌敏感,易被消毒剂灭活耐冷,-70℃或液氮可长期冻存对热、干燥敏感对青霉素不敏感,培养基中加入可抑制杂菌对醋酸铊和亚甲蓝耐受。2023/4/418临床意义原发性非典型肺炎致病性机制——形成细胞损伤获得养料.产生有毒代谢产物：如过氧化氢等.免疫损伤——迟发型变态反应.2023/4/419微生物检验标本采集：咽拭子、痰、鼻咽洗液、支气管分泌物等.立即接种,或置于运送培养基(蔗糖磷酸盐缓冲液),4℃能保存72h,-70℃或液氮能长期保存.2023/4/420分离培养：培养基：牛心消化液＋20%小牛血清及新鲜酵母浸液液体或固体培养基加入青霉素、醋酸铊、美蓝抑制杂菌生长增菌培养：含有葡萄糖、酚红、美蓝的液体培养基2023/4/4211周后培养基由紫变绿,液体清晰转种固体培养基在含5%CO2环境下培养,10天左右长出菌落(致密的圆形、无明显的周边,常不出现荷包蛋样),多次传代后生长加快,菌落形成典型荷包蛋样2023/4/422鉴定：形态、典型菌落发酵葡萄糖产酸、不利用精氨酸和尿素美蓝还原试验(＋)(将蓝色氧化型美兰还原成白色的还原型美兰)TTC还原试验(＋)(将无色的氯化三苯基四氮唑还原成粉红色的甲臢)红细胞吸附试验(＋)GIT、MITPCR:检测和鉴定肺炎支原体2023/4/423抗原、核酸检测：测P1蛋白,敏感性和特异性均高.PCR测DNA2023/4/424血清学诊断：ELISA：可检测IgM和IgG抗体,为目前诊断Mp感染的可靠方法补体结合试验和间接血凝试验主要检测IgM抗体,仅在初次感染时出现(＋),再次感染时常不出现(＋)存在抗原交叉,可出现假阳性冷凝集试验:非特异性试验效价≥1：64(＋)、双份血清效价呈4倍以上增高→近期感染的可能性较大.2023/4/425第3节溶脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum)2023/4/426微生物特性形态与结构：大小:0.05m～0.3mGiemsa染色:紫兰色.在液体培养基中以球形为主,单个或呈双排列.2023/4/427培养特性：最适pH为5.5～6.5,因在培养时分解尿素产氨,使pH升高.当培养基指示剂变色即需移种,否则将迅速死亡.菌落较小.人型支原体菌落和解脲脲原体呈微小菌落2023/4/428液体培养基：解脲脲原体在生长量最大时每ml不超过106～107个CFU——培养液清亮.抗原结构：脲酶抗原——Uu的种特异性抗原.2023/4/429生化反应：

支原体葡萄糖精氨酸尿素致病性肺炎支原体＋－－肺炎、支气管炎人型支原体－＋－泌尿生殖道感染生殖器支原体＋－－泌尿生殖道感染穿通支原体＋＋－多见于艾滋病解脲脲原体－－＋泌尿生殖道感染2023/4/430抵抗力：与肺炎支原体相似.脲原体对醋酸铊敏感.2023/4/431临床意义引起泌尿生殖道感染;不育症吸附宿主细胞后,可产生磷脂酶分解细胞膜中的磷脂,影响细胞生物合成尿素酶可分解尿素产氨,对细胞有毒性作用,且可促使结石形成产生IgA蛋白酶,破坏泌尿生殖道黏膜表面的IgA的局部抗感染作用,有利于黏附于泌尿生殖道黏膜表面而致病有粘附精子作用,影响精子的运动,产生神经氨酸酶样物质干扰精子和卵子的结合,且与人精子膜有共同抗原,可因免疫损伤而致不育2023/4/432微生物检验：标本采集：中段尿、前列腺液、精液、阴道分泌物、宫颈分泌物等标本接种于加尿素和酚红的液体培养基(含青霉素、血清),5%CO2环境,37℃,在1～2天内解脲脲原体分解尿素产碱,使培养液呈红色,

并且培养液澄清.2023/4/433取培养物转种于新的液体培养基和相应的固体培养基,培养2天后低倍镜观察,有典型荷包蛋样菌落为(＋)含有尿素和MgSO4(NH3的指示剂)的固体培养基→→黑褐色菌落2023/4/434

鉴定：形态、染色生化反应分解尿素,不分解葡萄糖和精氨酸MIT和GIT2023/4/435核酸检测：通过特异性引物扩增尿素酶基因等来检测解脲脲原体,敏感性高、稳定可靠、快速简便.免疫斑点试验(IDT)：可用于检测标本中抗原或鉴定培养物抗体检测：意义不大2023/4/436第4节人型支原体(M.hominis,Mg)2023/4/437形态结构与Uu相似。对醋酸铊不敏感2023/4/438微生物检验：培养基：(牛心消化液为基础,添加小牛血清、酵母浸液、精氨酸)液体培养基:分解精氨酸→→氨→→指示剂变色(培养液呈红色).固体培养基:2～4天,呈典型的荷包蛋样菌落.鉴定：生化反应、GIT、MIT2023/4/439穿通支原体(M.Penetrans,Mpe)2023/4/440穿通支原体：形态为杆状或长烧瓶状,大小0.2~0.4um×0.8~2.0um.一端为尖形结构和肺炎支原体相似,具有粘附、穿入细胞的作用.2023/4/441临床意义多见于艾滋病1990年首次从1例HIV阳性艾滋病患者尿中分离出的一种新支原体致病性与其尖形结构有关,具粘附和穿入人或动物的红细胞、淋巴细胞、单核吞噬细胞,引起细胞损伤穿通支原体感染是艾滋病的辅助致病因素2023/4/442微生物检验标本：

AIDS患者或HIV感染者的咽拭子,血液、尿液等分离培养：接种SP-4培养基,37℃,每天观察,由红变黄透明无沉淀——培养可疑阳性——用滤膜过滤,滤液转种传代——培养基再由红变黄——初代培养阳