临床微生物检查课件 第7章G-球菌

第五节奈瑟菌属脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌奈瑟菌属共性1、G–双球菌；2、有菌毛，无鞭毛和芽胞；3、氧化酶（+），触酶（+）；4、除淋病奈瑟菌寄居于泌尿生殖道粘膜外，其它均位于鼻咽腔粘膜临床意义—脑膜炎奈瑟菌致病物质荚膜—抗吞噬作用菌毛—粘附易感细胞表面内毒素—主要致病物质IgA1蛋白酶—破坏粘膜表面特异性IgA1细菌的释放裂解肾上腺小血管毛细血管皮肤瘀斑肾上腺出血DIC中毒性休克内毒素大量所致疾病脑膜炎奈瑟菌飞沫鼻咽部多数少数普通型爆发型慢性败血症鼻咽炎或带菌状态败血症穿过血脑屏障传染源——带菌者和病人从潜伏期末至发病10天内具有传染性传播途径——飞沫传播易感者——6个月至2岁发病率最高流行季节——从前一年11月份开始，次年3、4月份达高峰，5月份开始下降临床表现：突起高热、头痛、呕吐、皮肤粘膜瘀点、瘀斑（在病程中增多并迅速扩大），脑膜刺激征致病物质内毒素—炎症反应菌毛—粘附人类尿道粘膜外膜蛋白PⅠ破坏中性粒细胞膜PⅡ细胞间的粘附作用PⅢ抑制杀菌抗体活性IgA1蛋白酶—破坏粘膜表面特异性IgA1临床意义—淋病奈瑟菌所致疾病自然宿主传播途径临床表现人类是唯一宿主

性接触（最主要）间接接触垂直传播尿道炎、宫颈炎等尿道炎前列腺炎精囊炎输精管炎附睾炎尿道炎前列腺炎、精囊炎、输精管炎、附睾炎男性不育临床表现男性临床表现子宫颈炎子宫内膜炎输卵管炎输卵管闭锁子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管闭锁女性不孕尿道、宫颈炎女性人类无天然抵抗力细胞免疫和体液免疫（免疫力不持久）再感染、慢性患者普遍微生物学检验

基本特性形态结构G-双球菌，双肾形或咖啡豆样，两菌接触面平坦或略向内陷脑脊液—多位于中性粒细胞内，形态典型急性淋病脓标本—多位于中性粒细胞内慢性淋病病人标本—多分布在细胞外

无鞭毛，无芽胞，新分离菌株大多有菌毛和荚膜脑膜炎奈瑟菌（油镜）脑膜炎奈瑟菌电镜图淋病奈瑟菌营养要求高：巧克力色平板、BAP专性需氧，初次分离需要5%-7%的CO2和高湿度刺激生长最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长，淋球菌高于38.5℃生长也停止培养超过24小时后产生自溶酶★细菌抵抗力弱，对冷、热、干燥等均敏感，培养标本应及时接种（床边接种）

培养特性巧克力色平板上菌落灰色、透明或半透明、光滑、湿润、有光泽，边缘整齐不溶血,露滴状血平板上菌落卵黄琼脂平板:无色、光滑、湿润、有光泽，边缘整齐、易乳化，质地呈奶油状液体培养基:轻度或中度混浊，无菌膜氧化酶（+）触酶（+）-延长奈瑟菌除外

对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据脑膜炎奈瑟菌氧化分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气

淋球菌只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解其他糖类

生化反应

脑膜炎奈瑟菌：荚膜多糖群特异性抗原——目前国外已分成A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135和L等10个血清群。我国建立了H、I、K3个新血清群，故总计13个血清群，95%以上是A群,其中以C群致病力最强

抗原结构与分类外膜蛋白型特异性抗原——根据外膜蛋白组分不同，脑膜炎奈瑟菌各血清群又可分为若干血清型。但A群除外，其所有菌株的外膜蛋白相同脂寡糖抗原（LOS)——由外膜上糖脂组成，有抗原性，我国把A群分为L9、L10、L11三型，是脑膜炎球菌的主要致病物质淋病奈瑟菌：外膜蛋白抗原：包括PI、PII和PIII。PI为主要的外膜蛋白，占淋病奈瑟菌外膜总重量的60%以上，是淋病奈瑟菌分型的主要基础，可分成A~H、N、R~V、W和X等18个不同血清型，有助于流行病学调查

实验检查1、标本采集：CSF、血液、瘀点渗出液等,带菌者检查可取鼻咽拭子分泌物、尿液

立即送检或床边接种平板需预温

2、标本直接检查（1）直接涂片检查男性尿道口脓液涂片WBC内见G-双球菌——早期诊断

CSF沉渣瘀点渗出液涂片革兰染色亚甲蓝染色WBC内、外见G-双球菌初步报告

（2）抗原检查：脑膜炎奈瑟菌抗原检测——胶乳凝集试验、对流免疫电泳、SPA协同凝集试验ELISA检测淋球菌抗原在检测男性尿道分泌物标本时和涂片染色具有相同的敏感性和特异性

3、分离培养血液、CSF用血清肉汤增菌巧克力平板、BAP选择性培养基（MTM、NYC等）

37℃，5%~7%CO2环境观察72h后无生长方可报告（-）脑膜炎奈瑟菌直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片G-双球菌、氧化酶和触酶（+）初步定为奈瑟菌属葡萄糖和麦芽糖分解(+)、其他糖类分解(-)可确定为脑膜炎奈瑟菌分型血清确定血清型

鉴定淋病奈瑟菌可疑菌落直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落确认菌落涂片，见G-双球菌氧化酶和触酶（+）葡萄糖分解（+），其它糖类（-）奈瑟菌属鉴定双歧索引：G-球菌氧化酶、触酶（+）

DNA酶（+）（-）卡他莫拉菌奈瑟菌属营养琼脂上生长

（+）（-）其他奈瑟菌麦芽糖（+）（-）脑膜炎奈瑟菌淋球菌氧化酶试验阳性原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺1%盐酸二甲基对苯二胺方法：菌落法、滤纸法、试剂纸片法结果：细菌与试剂接触10秒内呈深紫色（+）脑膜炎奈瑟菌的检验程序脑脊液离心上清液荚膜多糖抗原直接凝集沉淀涂片染色初步报告瘀点穿刺液、鼻咽部分泌物、拭子分离培养挑选可疑菌落BAP巧克力血液增菌培养葡萄糖肉汤鉴定试验涂片镜检氧化酶试验糖分解试验荚膜多糖抗原直接凝集试验淋病奈瑟菌检验程序直接涂片镜检初报分泌物、脓液、关节液分离培养BAP、巧克力选择性培养基挑选可疑菌落鉴定试验染色镜检氧化酶试验触酶试验糖类分解

免疫学方法分子生物学方法抗原检测核酸检测药敏卡他莫拉菌（卡他布兰汉菌）存在——上呼吸道致病——中耳炎、鼻