医学微生物学教学课件：实验一 微生物的生物性状遗传变异

做实验前要预习，实验后认真完成实验报告，真实准确记录实验结果。坚持无菌操作；严禁将实验物品带出；进实验室穿白大衣

。示教的实验材料等不要乱动，看完后放回原处，在什么地方看的就要放回什么地方。实验完毕，打扫卫生整理好实验材料，将应回收物品放入回收器内，关好水电，然后离开。微生物实验报告于明天中午前收齐按学号顺序交于B1-201外面的书架子上，下次实验课前领回发放。油镜的使用：光线要强，应将光圈开足；用毕要用二甲苯（擦镜油）清洗物镜。微生物学实验须知实验一微生物的生物性状/遗传变异一、细菌的形态与结构1、细菌的基本形态——球菌、杆菌、弧菌的形态观察 示教2、细菌的特殊结构——芽胞、荚膜、鞭毛 示教3、细菌染色检查法——革兰氏染色 1份/组二、化脓性细菌1、金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌在血平板上的菌落形态、溶血环、色素示教2、甲、乙、丙链球菌示教3、肺双在血平板上的菌落形态、溶血环 示教

一：细菌的形态结构与染色主要内容:细菌的基本形态：球菌、杆菌、弧菌（示教）细菌的特殊结构：芽胞、荚膜、鞭毛（示教）细菌染色检查法：革兰氏染色法1片/组球菌：葡萄球菌螺形菌弧菌：霍乱弧菌螺菌1、细菌的基本形态杆菌：大肠杆菌2、细菌的特殊结构芽胞——增强细菌对不良环境的抗性荚膜——抗吞噬、抗损伤、抗干燥鞭毛——运动器官，单生、双生、丛生、周生。菌毛——在电镜下才可以见到。细菌的特殊结构形态芽胞荚膜鞭毛肺炎双球菌的荚膜伤寒杆菌的鞭毛枯草芽孢杆菌的芽胞细菌的特殊结构芽胞：细菌（G+）的休眠形式，保存细菌的全部生命必需物质，增强细菌对不良环境的抵抗能力。芽胞鉴别破伤风梭菌的芽胞

芽胞荚膜：细胞壁外的一层黏液物质，去除后不影响细菌生命活动。牢固与细胞壁结合，≥0.2μm，边境明显。抗吞噬、抗损伤、黏附作用。血清分型产气荚膜梭菌的荚膜鞭毛：所有弧菌和螺菌运动器官，在液体环境中自由游动单生、双生、丛生、周生。伤寒杆菌的鞭毛鞭毛4.革兰氏染色的原理G+菌胞壁结构致密。肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫—碘复合物从胞内渗出。G-菌较为疏松，肽聚糖层很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性变大，使结晶紫--碘复合物被乙醇溶解析出而脱色。G+菌等电点（PH2~3）比G-菌（PH4~5）低。在相同PH下，G+所带的负电荷比G-多。故与带正电的结晶紫染料结合较多，不易脱色.核糖核酸镁盐的含量有关:G+多于G-上述原因中以1更重要，如G+菌胞壁有破损，其染色性由G+->G-涂片干燥固定涂片制备：

涂片------干燥------固定严格无菌操作涂片薄而均匀

固定时注意勿将标本烤枯固定目的：杀菌，粘附，通透性切忌紧靠火焰,以防菌体变形

革兰氏染色法步骤（GramStain）涂片固定A:初染（结晶紫）１min甩去水珠，吸水纸吸干B:媒染（碘液）１min甩去水珠，吸水纸吸干C:脱色（乙醇）30sec甩去水珠，吸水纸吸干D:复染（复红）１min甩去水珠，吸水纸吸干镜检水洗水洗水洗水洗1-2滴结晶紫初染１min

1-2滴碘液媒染1min2-3滴乙醇脱色30sec1-2滴复红复染1min涂片固定革兰氏染色法步骤（GramStain）吸水纸印干，镜检H2O轻轻冲洗H2O轻轻冲洗H2O轻轻冲洗H2O轻轻冲洗影响实验结果的因素：菌龄,

G+G-如果细菌细胞壁破损

G+G-脱色过长G+G-，脱色过短G-G+结果:

阳性菌——蓝紫色

阴性菌——红色革兰氏染色注意点严格无菌操作涂片薄而均匀干燥时注意勿将标本烤枯固定目的：杀菌，粘附轻轻冲洗吸水纸印干影响实验结果的因素菌龄，

稳定期

G+G-如果细菌细胞壁破损

G+G-脱色过长G+G-，脱色过短G-G+革兰氏染色的意义：鉴别细菌指导用药了解细菌的致病性，大多

G+,外毒素，G-内毒素二、化脓性细菌1.葡萄球菌根据色素，生化反应等不同类型，分为三种：主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶＋－－α溶血素＋－－SPA＋－－甘露醇发酵＋－－致病性强弱无血平板色素柠檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黄色葡萄球菌溶血现象柠檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黄色葡萄球菌2.链球菌属(streptococcus)链球菌分类：根据溶血现象分类：甲型溶血性链球菌(α-hemolyticstreptococcus)----产生甲型溶血（α溶血），草绿色溶血环，条件致病菌乙型溶血性链球菌(β-hemolyticstreptococcus)----产生乙型溶血（β溶血），透明无色溶血环，致病菌丙型溶血性链球菌(γ-streptococcus)----无溶血环，一般不致病链球菌血平板菌落形态甲乙丙Hemolysis

alphabetagamma链球菌血平板菌落形态3.肺炎链球菌生物学性状形态与染色G+球菌，菌体矛头状，成对排列，无鞭毛，芽孢，有荚膜培养特性营养要求较高(血平板)菌落：α-溶血，光滑（有毒株），后期呈脐状（稳定期产生自溶酶）抵抗力：对消毒剂敏感，抗干燥（荚膜）肺炎双球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别鉴别项目肺炎球菌甲型溶血性链球菌菌落形态扁平或呈脐状隆起荚膜有无胆汁溶菌试验被溶解不被溶解菊糖发酵试验分解菊糖产酸不分解小白鼠接种死亡存活实验一微生物的生物性状/遗传变异一、细菌的形态与结构1、细菌的基本形态——球菌、杆菌、弧菌的形态观察