沼液中挥发性成分的提取与测定

浙江林学院本科生毕业设计（论文）PAGEPAGE15PAGE1沼液中挥发性成分的提取与测定摘要:沼液是人、畜粪便以及农作物秸秆等各种有机物经厌氧发酵后的残余物,其中含有多种水不溶性物质。因此,沼液中的挥发性成分的提取与测定具有重要的意义。为了比较不同方法提取沼液中挥发性成分的效果，用了水蒸气蒸馏法、溶剂提取法和超声波辅助提取法进行提取，气相色谱-质谱联用结合计算机检索对其化学成分进行了分析和鉴定。关键词：沼液；气相色谱-质谱法；挥发性成分；提取方法；测定TheextractionanddeterminationofvolatileingredientsinbiogasslurryAbstract：Biogasslurryistheodd-come-shortofvariousorganicmatterssuchaspersonandrearexcrement，farmcropstraws，whicharedisgustedwithoxygentoferment，havemanywater-insolublecompound.Inconsequence,Itisofsignificancetotheextractionanddeterminationofvolatileingredientsinbiogasslurry.Comparingtheextractionmethoddifferenceofvolatileingredientsinbiogasslurry，itwasextractedbyvapordistillation,solventextractionandultrasonicextraction,theextractionsampleshavebeenanalysedbygaschromatograp(GC-MS)massspectrometry.KeyWords：biogasslurry;Gaschromatography-massspectrometry;volatileingredients;extractionmethods;determination目录1.前言 11.1沼液 11.1.1沼液的研究目的及意义 11.1.2沼液的研究现状 11.2气相色谱-质谱法（GC-MS） 31.2.1气相色谱—质谱法（GC-MS）的特点 31.2.2气相色谱-质谱(GC-MS)的优势 31.3提取方法 31.3.1超声波辅助提取法 41.3.2溶剂直接提取法 41.3.3水蒸气蒸馏法 52.实验内容 62.1材料与仪器 62.1.1材料 62.1.2装置、仪器 62.2提取步骤 62.2.1沼液中提取挥发性成分的步骤: 62.2.2铵盐中含氮量的测定 62.2.3GC-MS测定挥发性成分 63.结果与讨论 73.1超声波辅助提取法 73.2溶剂直接提取法 103.3水蒸气蒸馏法 133.4沼液中铵根离子含量测定 154.结论 16参考文献 17致谢 191.前言1.1沼液1.1.1沼液的研究目的及意义国家“十一五”规划提出到2010年新建大中型沼气工程约4000处，08年为扩大内需新增农村沼气投资30亿元，发展沼气工程的资金障碍得到了缓解。循环农业的发展瓶颈将顺延到沼渣沼液的利用，使建设的沼气工程能正常运行，确保沼气工程的持续发展，沼渣沼液的利用课题需摆到议事日程。据丹麦等先进的沼气工程技术经验知，沼渣沼液可完全还田，并给沼气工程增加收益。我国在实践中也积累了很多利用沼渣沼液的技术和经验，但没有规模化推广【1】。研究大中型沼气工程沼渣沼液的成分（尤其是沼液中挥发性成分的提取和测定）、价值、用途和利用方式，确定适合我国国情的鼓励政策与推广模式，对推动循环农业建设，实现沼气产业可持续发展，具有重要意义。沼液是人畜粪便等生物质经沼气池厌氧发酵的残留液体，主要包括发酵过程中产生的有机、无机盐类,如铵盐、钾盐、磷酸盐等可溶性物质。与沼渣相比,沼液虽然养分含量不高,但其养分主要为速效性养分。这是由于发酵物长期浸泡水中,可溶性养分自固相转入液相,提高了速效养分含量。沼液不仅含有丰富的氮、磷、钾等大量营养元素和钙、铜、铁、锌、锰等微量营养元素,还含有丰富的氨基酸、B族维生素、各种水解酶、某些植物激素以及对病虫害有抑制作用的物质或因子【2】。它含有丰富的有机物质、腐殖酸、微量营养元素、多种氨基酸、酶类和有益微生物，是一种优质、高效的无公害有机肥料，极宜作根外施肥，其效果比化肥好。沼气发酵是通过厌氧微生物的分解作用，不断变化发酵物——粪便、秸秆等有机物的生物化学过程，沼液就是这些发酵后的残余物，含有多种植物生长所需的水溶性营养物质。它不仅可以把能作燃料利用的碳、氢元素和能作肥料利用的N、P、K元素分开利用，而且还能把许多畜类、鱼类难以消化的营养物质转化为他们能够吸收利用的的各种氨基酸和多种维生素，使“三料”(燃料、饲料、肥料)都能各得其所，物尽其用【3】。同时，微生物的分泌物还使沼气渣沼液中增加了许多益于农业但没有完全被认识的新物质，沼液的广泛推广和应用，不仅对高效庭院经济发展，甚至对现代农业的发展，都具有重要的意义。1.1.2沼液的研究进展沼液喂鸡是用沼液替代一部分水供鸡食用。一种喂法将沼液拌合在鸡饲料中饲用,另一种方法是与清水混合后供鸡饮用。利用沼液饲喂肉鸡,90天后比不添加沼液的鸡重34%左右。利用沼液饲喂蛋鸡,产蛋率提高8%左右。沼液不但含有优质的有机肥料,而且含有大量的氮、磷和无机盐类,可肥沃水质,使得鱼塘的各种浮游生物大量生长、繁殖,为鱼类提供丰富的天然营养物质。用沼液养鱼较传统喂养、畜粪便养鱼能明显降低池塘水体溶解氧的消耗,提高浮游生物量,加强光合作用,减少鱼病发生,提高鱼苗成活率12%以上,增产成鱼20%以上，鱼苗的规格与成鱼品质均有明显提高。沼液是一种较完备的饲料添加剂,含有铜、铁、镁、锰、锌等微量元素,还含有赖氨酸、色氨酸、谷氨酸、烟氨酸和核黄素。农村家用沼气池的发酵原料主要是粪便、半纤维素、粗蛋白、粗酯肪几大类有机物,在沼气内经过各种细菌消化分解为葡萄糖、果糖、氨基酸、酯肪酸等,故沼液中含有上述各种营养物质及其衍生物如乙醇,醋酸有机氮,磷钾等【4】。另外沼气中种类多,数量大的细菌群落具有极强的繁殖能力,在新陈代谢中产生大量的细菌蛋白,使沼液中有效营养十分丰富。试验和检测证明,通过厌氧发酵后的沼液,不仅留存多种营养物资、杀灭了许多病菌,而且安全无毒。据专家检测,厌氧消化后的沼液寄生虫减少了98%,沼液中有害元素镉、铅、汞等含量也均低于国家规定的生活饮水标准。沼液浸种、育秧腐熟的沼气发酵液即沼液,含有作物种子所需的多种养分,如氮、磷、钾和铜、铁、镁、锌等微量元素以及一些氨基酸(赖氨酸、色氨酸),还有生长调控物质和维生素、生长激素等。在浸种过程中,种子吸收了沼液中的各种营养物质和微生物分泌的多种活性物质,这些物质能够激活种子内酶的活动,促进胚细胞分裂,刺激生长。沼液中的多种微生物及其分泌的活性物质对种子表面的有害病菌具有一定的抑制和杀灭作用,沼液中的氨离子也能杀灭种子病菌,起到药浸种的同等效果。用沼液浸种可提高种子的发芽率,促进种子生理代谢,可以增强作物的抗寒、抗病、抗逆能力,使种芽出苗健壮、整齐,有较好的经济效益【5】。沼液能防治作物的某些病虫害沼液是有机物经沼气池制取沼气后的液体残留物。它不仅含有作物生长所必需的氮、磷、钾、微量元素、氨基酸等多种营养物质，而且含有丁酸、吲哚乙酸、维生素B12等活性、抗性物质。因此，有着促进作物生长和控制病害发生的双重作用。沼液对小麦、豆类和蔬菜的蚜虫有明显的防治作用,纯沼液防治菊花蚜虫,5天后蚜虫全部死亡。沼液防治小麦赤霉病效果与多菌灵相近。沼液喷施叶面对瓜类枯萎病,也有防治效果,能解决西瓜在重茬地上种植并获增产。50%沼液叶面喷施可防治桃树蚜虫、红蜘蛛等。沼液作基肥,叶面喷散可防治大蒜病毒病、棉花枯萎病。果树喷施沼液,不仅对果树提高产量有显著作用,同时又可起到防虫治病、减少农药用量和降低生长成本,还可以提高果子品质。用纯沼液喷施果树,对红、黄蜘蛛、矢尖蚧、蚜虫有明显的杀灭作用。沼液宜作追肥,可采用叶面喷肥沼液施肥不仅对粮食作物增产效果明显,而且对经济作物、蔬菜作物有非常好的增产效果。在作物各个生长关键时期之前施用,效果更好,将化肥配合沼液施用,取长补短,提高肥效的作用。叶面喷施沼液既可补充营养,促进生长平衡,增强光合作用,又可抑制病虫害的发生,在粮食、棉花、果树、蔬菜上均可施用,尤其是在果树、蔬菜上施用,保花保果效果好,显著提高商品果率。试验证明,果树地上部分每一个长期前后,都可喷施沼液【6】。叶片生长期喷施沼液,可增强光合作用,有利于花芽形成和分化;花期喷施沼液,可保证所需营养,提高座果率;果实长期喷施沼液,可促进果实膨大,提高产量,含糖量能高0.5～1度,着色好口感好,可提前成熟。沼液用做叶面肥,能提高小麦的受粉率,同时小麦长的粗壮,抗倒伏、抗干热风;能提高穗粒数5粒左右,千粒重提高2g左右,对不同品种小麦均有增产效果。1.2气相色谱-质谱法（GC-MS）1.2.1气相色谱—质谱法（GC-MS）的特点气相色谱法（gaschromatography,GC）是一种应用非常广泛的分离手段，它是以惰性气体作为流动相的柱色谱法，其分离原理是基于样品中的组分在两相间分配上的差异。气相色谱法虽然可以将复杂混合物中的各个组分分离开，但其定性能力较差，通常只是利用组分的保留特性来定性，这在欲定性的组分完全未知或无法获得组分的标准样品时，对组分定性分析就十分困难了【7】。随着质谱（massspectrometry,MS）、红外光谱及核磁共振等定性分析手段的发展，目前主要采用在线的联用技术，即将色谱法与其它定性或结构分析手段直接联机，来解决色谱定性困难的问题。1.2.2气相色谱-质谱(GC-MS)的优势质谱分析具有灵敏度高、定性能力强等特点，但对多组分复杂混合物的鉴定、定量分析比较困难；色谱法则具有高效分离多组分混合物和定量分析简便的特点，但定性能力较差。将两种分析技术联用，可以相互取长补短，以扩大应用范围。色谱仪是质谱法理想的进样器，试样经色谱分离后以纯物质形式进入质谱仪，从而避免复杂混合物同时进入离子源，便于检测；质谱仪则是色谱法理想的检测器，它几乎可以检测出全部的化合物，并且灵敏度高。由于色谱-质谱联用分析兼有色谱和质谱两种方法的优点，故在复杂的有机混合物的定型鉴定、定量分析、结构推测方面得到广泛应用。该技术已经应用到石油、化工、医药、有机合成、精细化工、高分子材料、天然有机化合物等领域【8】。例如，石油馏分是一种多组分和宽沸程的混合物，使用高效毛细管色谱-质谱联用分析，可以快速分离和定性鉴定出240多个烃类组分。色谱-质谱联用在生命科学、药物学、毒物学、环境科学、法医学、临床医学等有关学科领域都得到越来越广泛的应用。在300℃左右能汽化的样品，可以优先考虑用GC-MS进行分析，因为GC-MS使用EI源，得到的质谱信息多，可以进行库检索。进行GC-MS分析的样品应是有机溶液，水溶液中的有机物一般不能测定，须进行萃取分离变为有机溶液，或采用顶空进样技术。有些化合物极性太强，在加热过程中易分解，例如有机酸类化合物，此时可以进行酯化处理，将酸变为酯再进行GC-MS分析，由分析结果可以推测酸的结构【9】。GC-MS是气相色谱和质谱联用，GC分离，MS检测。本文采用适当的预处理方法为GC-MS分析提供了适宜的挥发性成分的数量和质量,使得GC-MS鉴定更加准确可靠。用气相色谱法测定氨基酸需先将氨基酸衍生化,使之生成易挥发且高温稳定的衍生物,衍生化反应容易进行且速度快。因此建立气相色谱-质谱法测定沼液中的挥发性成分含量的方法,具有实际意义【10】。在王贤亲等对苍南四季柚果皮挥发油成分的气相色谱-质谱联用分析中,所利用水蒸气蒸馏法提取四季柚果皮挥发油，用气质联用法对挥发油成分进行分析，结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定，应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量，效果理想，对本次实验的进行提供了很好的思路【11】。1.3提取方法因为考虑到用单一的方法进行对沼液的提取会使很多的有机相在提取过程中被遗漏，故在翻阅了大量的文献资料后，确定了三种不同的提取方法，分别为超声波辅助提取法、溶剂直接提取法、水蒸气蒸馏法。在用这三种方法进行比较的同时，大大降低了把沼液中某种有机物遗漏的可能性，使数据更加精确，大大的降低了误差。且三种方法用的是不同的原理，适用于不同的有机物萃取，为后期挥发性成分的鉴定工作提供更好的依据。以下为三种方法的提取原理和特点做简要的介绍：1.3.1超声波辅助提取法超声波萃取中药材的优越性，是基于超声波的特殊物理性质。主要是主要通过压电换能器产生的快速机械振动波来减少目标萃取物与样品基体之间的作用力从而实现固--液萃取分离【12】。超声波辅助提取法适用于中药材有效成份的萃取，是中药制药彻底改变传统的水煮醇沉萃取方法的新方法、新工艺。与水煮、醇沉工艺相比，超声波萃取具有如下突出特点：（1）无需高温。在40℃－50℃水温F超声波强化萃取，无水煮高温，不破坏中药材中某些具有热不稳定，易水解或氧化特性的药效成份。超声波能促使植物细胞地破壁，提高中药的疗效【13】。（2）常压萃取，安全性好，操作简单易行，维护保养方便。（3）萃取效率高。超声波强化萃取20～40分钟即可获最佳提取率，萃取时间仅为水煮、醇沉法的三分之一或更少。萃取充分，萃取量是传统方法的二倍以上。据统计，超声波在65～70ºC工作效率非常高。而温度在65ºC度内中草药植物的有效成份基本没有受到破坏。加入超声波后（在65度条件下）,植物有效成份提取时间约40分钟。而蒸煮法的蒸煮时间往往需要两到三小时，是超声波提取时间的3倍以上时间【14】。每罐提取3次，基本上可提取有效成份的90%以上。（4）具有广谱性。适用性广，绝大多数的中药材各类成份均可超声萃取。（5）超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质（如极性）关系不大。因此，可供选择的萃取溶剂种类多、目标萃取物范围广泛。（6）减少能耗。由于超声萃取无需加热或加热温度低，萃取时间短，因此大大降低能耗。（7）药材原料处理量大，成倍或数倍提高，且杂质少，有效成分易于分离、净化。（8）萃取工艺成本低，综合经济效益显著。1.3.2溶剂直接提取法溶剂直接提取法，顾名思义，即直接用溶液将样品中存在的有机物质溶解到溶剂中，再向溶液中放入一定量的溶解剂促进溶解，放置适量的时间后，用过滤的方法出去有机相中的水分，最后在恒温水浴上旋转蒸发浓缩，当提取液剩至一定量时讲液体移至容器中待测。溶剂直接提取法适用于绝大多数的物质提取，方法简单，操作简便，但是对溶剂的选择要求很高，因为同一种物质在不同溶剂中的溶解率不同，不同的物质在同一种溶剂中的溶解率也不同。而且因为温度对溶解率的影响很大，所以在溶解时对温度的控制也变的很重要【15】。另一方面，由于溶质对溶剂的选择性，使得在提取时不可避免的会使某些有机相无法溶解到溶液中，在测定时会提取不到一些已知的有机物，使实验结果存在误差。1.3.3水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法是指将含挥发性成分样品片，浸泡湿润后，直火加热蒸馏或通入水蒸汽蒸馏，样品中的挥发性成分随水蒸气蒸馏而带出，经冷凝后收集馏出液，一般需再蒸馏1次，以提高馏出液的纯度和浓度，最后收集一定体积的蒸馏液；但蒸馏次数不宜过多，以免挥发油中某些成分氧化或分解【16】。本方法的基本原理是根据道尔顿定律，相互不溶也不起化学作用的液体混合物的蒸汽总压，等于该温度下各组分饱和蒸气压（即分压）之和。因此尽管各组分本身的沸点高于混合液的沸点，但当分压总和等于大气压时，液体混合物即开始沸腾并被蒸馏出来【17】。该方法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的样品成分的浸提。水蒸气蒸馏法可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法。为提高馏出液的浓度，一般需将馏出液进行重蒸馏或加盐重蒸馏。常用设备为多能提取罐、挥发油提取罐【18】。水蒸气装置如图所示：图1水蒸气蒸馏装置水蒸气蒸馏法只适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，与水不发生反应，且难溶或不溶于水的成分的提取。此类成分的沸点多在100℃以上，与水不相混溶或仅微溶，并在100℃左右有一定的蒸气压。当与水在一起加热时，其蒸气压和水的蒸气压总和为一个大气压时，液体就开始沸腾，水蒸气将挥发性物质一并带出【19】。例如中草药中的挥发油，某些小分子生物碱一麻黄碱、萧碱、槟榔碱，以及某些小分子的酚性物质，都可应用本法提取。有些挥发性成分在水中的溶解度稍大些，常将蒸馏液重新蒸馏，在最先蒸馏出的部分，分出挥发油层，或在蒸馏液水层经盐析法并用低沸点溶剂将成分提取出来。例如玫瑰油、原白头翁等的制备多采用此法。水蒸气蒸馏法需要将原料加热,不适用于化学性质不稳定组分的提取。2.实验内容2.1材料与仪器2.1.1材料：试剂均为分析纯：乙醚，NaCl，无水硫酸镁，正己烷，滤纸2.1.2装置、仪器超声波装置，索式提取器，GC-MS仪器，旋转蒸发仪，100ml量筒，300ml锥形瓶，滴管等。2.2提取步骤与结果2.2.1沼液中提取挥发性成分的步骤:(1)超声波辅助提取法:取沼液50ml,放入300ml的锥形瓶中,用乙醚,提取3次,每次加入50ml,并置于超声波清洗器中开机处理30min,把3次的提取液合并过滤,35℃旋转蒸发挥干乙醚,再用1ml乙醚溶解待测。(2)溶剂直接提取法:取50ml样品，加入NaCl到饱和，在分液漏斗中用4份50ml乙醚溶剂萃取3次，合并有机相，向有机相中加入少量无水硫酸镁，稍稍振动放置约30分钟，然后过滤除去有机相中的水分，选择30℃恒温水浴上旋转蒸发浓缩，当提取液剩至1-2ml时将液体转移至容器中待测。(3)水蒸气蒸馏法:使用索式提取器,取沼液50ml,将滤纸浸泡入其中1h,然后放入提取器的上口，加入正己烷50ml，600c回流提取2h,加热至沸腾,保持微沸3h,收集挥发成分待测。2.2.2铵盐中含氮量的测定准确移取50ml三份沼液分别置于锥形瓶中，加10-20ml水溶解，加入1–2滴甲基红指示剂，用0.1102mol/LNaOH标准溶液滴至溶液由红色刚转变成黄色（去除铵盐样品中可能含有的游离酸），加入30ml20％甲醛溶液，充分摇匀后放置1–2分钟，再加上1–2滴酚酞指示剂，用NaOH标准溶液滴至溶液呈淡红色并持续30秒不褪，即为终点。根据NaOH溶液的体积计算试样的含氮量，平行测定三份。2.2.3GC-MS测定挥发性成分（a）色谱条件:进样口温度200℃,无分流压力进样,压力51171kPa,解吸时间1min;柱箱温度:初温35℃,保持2min,再以8℃/min的速率上升至180℃,保持4min,再以15℃/min的速率上升至230℃,保持1min;载气为氦气,恒线速,37cm/s,流量为310mL/min。质谱条件:离子源为EI,离子源温度200℃,接口温度180℃,检测电压0180kV。(b)色谱柱为HP-5MS5%PhenylMethylSiloxane(30m×0.25mm×0.25μm)弹性石英毛细管柱,柱温60℃,以10℃·min-1升温至100℃,再以4℃·min-1升温至200℃后,以15℃·min-1升温至280℃,保持2min;汽化室温度250℃;载气为高纯He.3.结果与讨论用三种不同的方法提取沼液中挥发性成分后，将挥发性成分采用气相色谱-质谱联用仪进行分析，所得到的各化合物经计算机检索和人工解析及对照标准图谱索引进行对照鉴定。根据各化合物峰面积以面积归一化法计算各组分在总样品中的质量分数。超声波辅助法图2超声波辅助法总离子流图图3色谱图化学名称分子式结构式分子量含量Thimethylsilymethanol三甲基甲硅烷基甲醇C4H12OSi10497.7Propana12,3-dihydroxy2，3二羟基丙醛C3H603900.68Undecane十一烷C11H141560.05Undecane4,6-dimethyl4，6-二甲基十一烷C13H281840.19Heptadecane十七烷C17H362400.071-Dodecanol,3,7,11-trimethyl3,7,11,三甲基1-十二烷醇C15H32O2280.11Dodecane,5,8-diethyl5,8-二乙基十二烷C16H342260.02Cedran-diol柏木二醇.C15H26O22380.02Tricyclo［5,4,0,0(2,8)］undec-9-ene,2,6,6,9-tetramethy1三环-5,4,0,0(2,8)-十一碳-9-烯2,6,6,9-［5,4,0,0(2,8)］--2,6,6,9-四-甲基-十一碳-4--烯C15H242040.06Tetradecane,2,6,10-trinethyl2,6,10-三甲基十四烷C17H362400.1Dodecane,5,8-diethy15,8二乙基十二烷C16H342260.05Cedrane,8-propoxy8-丙醚基柏木烷C18H32O2640.08Hexadecane,2,6,10,14-tetramethy12,6,10,14-四甲基十六烷C20H422820.11Octadecane,3-ethyl-5-(2-ethylbuty1)3-乙烷基-5-（2-乙烷基丁基）十八烷C26H543660.041,2-Benzenedicarboxylic,bis(2-methylpropyl)ester1，2苯二羧基酸2-甲基丙烷基酯C16H22O42780.41Octadecane,1,1-［1,3-propanediylbis(oxy)］bis1,1-［1,3-含氧丙烷基］十八烷C39H80O25790.19用超声波辅助提取法提取到了16种物质，其中Thimethylsilymethanol（三甲基甲硅烷基甲醇）含量最高，为97.28%，不溶于水；2,3-二羟基丙醛含量次之为0.68%,可以作为营养剂；Undecane（十一烷）含量为0.06%，可以用于制造制冷剂、杀虫剂等,说明沼液可能有天然杀菌效果;Tricyclo-［5,4,0,0(2,8)］-undec-9-ene,2,6,6,9-tetramethy（三环［5,4,0,0(2,8)］-2，6,6,9-四-甲基-十一碳-4-烯）含量为0.06%，经文献检索可能有抗菌活性。3.2．溶剂直接提取法图4溶剂直接提取法总离子流图图5色谱图化学名称分子式结构式分子量含量Thimethylsilymethanol三甲基甲硅烷基甲醇C4H12OSi10497.28Butane,1-(1-methylethoxy)1-（1-甲基甲氧基）丁烷C7H16O1160.73Undecane十一烷C11H241560.06Dodecane十二烷C12H261700.14Dodecane,4,6-dmethy14,6二甲基十二烷C14H301980.04Eicosane二十烷C20H422820.13Heptacosane二十七烷C27H563800.1Tetradecane,2,6,10-trimethyl2，6，10三甲基十四烷烃C17H362400.111,2-Benzenedicarboxylic,bis(2-methylpropyl)ester1，2-苯二羧基酸-2-甲基丙烷基酯C16H22O42780.58Ethano1,2-(octadecyloxy)十八烷氧基乙醇C20H42O23140.05Tetratetracantane四十四烷C44H906180.09Octadecane,3-ethyl-5-(2-ethybutyl)3-乙烷基-5-（2-乙烷基丁基十八烷烃）C26H543660.16Stearicacid-3-(octadecyloxy)propylester十八烷基-3-（十八烷氧基）丙酯C39H78O35940.09用溶剂直接提取法提取到13种物质主要都是烷烃和几种酯类，如Dodecane（十二烷），含量为0.14%，可用于生产十二碳二元酸、直链醇和卤代烷;二十七烷含量0.07%;Eicosane（二十烷）含量为0.13%，该物质在人体中也存在。Ethano1,2-(octadecyloxy)（十八烷氧基乙醇），含量为0.05%，具有抗放射作用，能防治白细胞减少，临床用于因用抗肿瘤药及放射治疗而引起的白细胞减少，也可用于小儿粒细胞缺乏症。3.3水蒸气蒸馏法图6色谱图化学名称分子式结构式分子量含量Dodecane,2,6,11-trimethyl-2,6,11-三甲基十二烷C15H322121.73Tetradecane十四烷C14H301983.581,2,4-Metheno-1H-indene,octahydro-1,7a-dimethy1-5-(1-methylethyl)1,7a-二甲基-1,5-(1-甲基乙基),2,4-美替诺-1H-茚C15H242041.771H-3a,7-Methanoazulene,2,3,4,7,8,8a-hexahydro-3,6,8,8-tetramethyl2,3,4,7,8,8a-六氢化3,6,8,8-四甲基-1H-3a,7-亚甲基奥C15H242042.52Heptadecane,2,6,10,15-tetramethyl2,6,10,15-四甲基十七烷C21H4429614.11Tetradecane,2,6,10-trimethyl2,6,10-三甲基十四烷C17H362404.341,4-Methanoazulen-3-ol,decahydro-1,5,5,8a-tetramethyl1,5,5,8a-四甲基-1,4-亚甲基奥-十氢-3-酯C15H26O2223.09Hexadecane,2,6,11,15-tetramethyl2,6,11,15-四甲基十六烷C20H422823.2Eicosane,7-hexyl7-己基二十烷C26H5436616.23Heneicosane,11-(1-ethylpropyl)11-(1-乙烷基丙基)二十烷C26H543665.37Heptacosane二十七烷C27H5638012.75Tetratetracontane四十四烷C44H906183.09TetraTriacontane三十四烷C34H704785.87Octadecane,3-ethyl-5-(2-ethylbutyl)3-乙基-5-（2-乙基丁基）十八烷C26H543661.91Dodecane-5,8-dimethyl5,8-二甲基-十二烷C16H343806.61用水蒸气蒸馏法提取到了15种物质，其中Heptacosane（二十七烷），含量为0.1%，在丁香挥发油化学成分与抗菌活性研究中也提取到了二十七烷，从此推测此物质可能具有抗菌活性;Tetradecane（十四烷），含量为3.58%，不溶于水;同时发现了1,7a-二甲基-1,5-(1-甲基乙基),2,4-美替诺-1H-茚，它是激素及调节内分泌功能类原料药美替诺的代谢产物。Dodecane-5,8-dimethyl（5,8-二甲基-十二烷），含量为6.61%，具有洗涤柔软、抗静电、分散、抗菌消毒性能。3.4沼液中铵根离子含量测定表1沼液中铵根离子含量测定表试样1试样2试样3V起（ml）0.000.020.03V末（ml）17.9818.0117.92△V（ml）17.9817.9917.89CNH4+(mg/ml)0.71330.71360.7097CNH4+0.7122图中V起为NaOH起始刻度，V末为滴定完成后NaOH的最终刻度，△V为滴定用去的NaOH溶量,CNH4+为沼液中铵根离子的含量，△CNH4+为测得的沼液中铵根离子的平均含量。经计算所得，沼液中铵根离子含量为0.7122mg/ml，铵盐的含量高，是农作物容易吸收速效的营养物质,这是施用沼液作为肥料优于其他有机肥的原因之一，也说明沼液是一种优质、全效的有机肥料；另外已有研究证明铵态氮在沼液中含量较高,是沼液具有抗病防虫功效的主要因子之一,铵态氮含量越高沼液的抗病防虫的能力就越强。铵态氮含量不仅成为评价沼液肥效的主要指标，而且也成为评价沼液抗病防虫能力的一个主要指标。浙江林学院本科生毕业设计PAGEPAGE194.结论本实验用不同的方法提取出沼液中的挥发性成分，共检索出有机化合物38种，共有6成分具有抗病菌，不同的提取方法所得结果不一样。①水蒸气蒸馏法提取的挥发油颜色较浅杂质少，但是其缺点是比较耗时，而且由于长时间加热，其中一些热敏物质发生氧化、聚合等反应导致变性，此外，有一些挥发性成分未能提取出来。②溶剂直接提取法提取的挥发油也含有杂质，耗时比较长，提取到的有效成分少：超声波辅助提取法提取的挥发油也含有杂质，但能得到较全面的化学成分，无需加热、耗时少。③在超声波辅助提取法和溶剂直接提取法中，分别都提取出含有大量的三-甲基甲硅烷基甲醇，而在水蒸气蒸馏法中却未能提取出此类物质。说明在水蒸气蒸馏过程中三-甲基甲硅烷基甲醇早已分解成为了其他的物质。同时此方法提取到较多的抗菌活性物质。综合比较后，超声波辅助提取法与水蒸气蒸馏法是比较好的提取方法，溶剂直接提取法还存在很大的缺陷。本实验首次对沼液中挥发性成分进行分析，对沼液中的化学成分特别是有些抗菌成分有了初步的研究，特别是厌氧发酵液中NH4+对病虫具有较强的抑制作用，为以后的进一步合理开发利用该资源提供科学依据。参考文献张全国,李鹏鹏,倪慎军.沼液复合型杀虫剂研究[J]

.农业工程学报,2006,22

（6）:157.张亚莉，董仁杰，刘玉青.沼肥在农业生产中的应用[J].安徽农业科学，JournalofAnhuiAgriSci2007,35(35):47-49.B.AEBI,R.STURNY-JUNGO,W.BERNHARD,R.BLANKE,R.HIRSCH.QuantitationusingGC–TOF-MS:exampleofbromazepam[J].ForensicScienceInternational128(2002)84-89.Ö.ATICI,G.AĞARandP.BATTAL,Changesinphytohormonecontentsinchickpeaseedsgerminatingunderleadorzincstress[J].BiologliaPlantarum2005,49(2):215-222.孟庆国，赵风兰，王素青等.气相色谱法测定沼液中的游离蛋白氨基酸[J].农业环境保护2000，19（2）:104~105.庞启华，何建华，曾润娟，赵树进.不同方法提取高良姜挥发油的比较研究[J].药物生物技术2008，15（1）：54~58..黄克建，李洪森，潘智文.SPE-GC/MS法检测大鼠尿中尼美西泮及其代谢物[J].国法医学杂志2008,23(4):36-38