免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中应用

目录1免疫磁珠技术的介绍2免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用3小结第一页，共19页。1、免疫磁珠技术的介绍1.1免疫磁珠技术简介

免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB,简称磁珠)技术,是近年发展起来的将固化试剂特有优点与免疫学反应高度特异性结合于一体的一项新技术。以免疫学为基础,渗透到病理、生理、药理、微生物、生化及分子遗传学等各个领域,其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到越来越广泛应用。全自动免疫磁珠技术细胞分选系统AutoMACSPro第二页，共19页。1.2免疫磁珠的结构磁性微球高分子材料免疫配基第三页，共19页。1.3IMB技术的基本原理磁珠特异性抗体免疫磁珠加入待测液中抗原-抗体-磁性免疫复合物复合物分离出来撤去磁场抗原鉴定磁性外力第四页，共19页。以细胞分离为例图解免疫磁珠技术的原理第五页，共19页。1.4IMB技术作用方式免疫磁珠分离技术直接法间接法第一抗体第二抗体

直接法是先用抗体包被磁珠,使抗体与磁珠给合(物理吸附或化学结合),再加入抗原物质,二者结合形成磁珠-第一抗体-抗复原合物,在磁力作用下,与其它物质分离。

间接法是先用羊抗鼠IgG(第二抗体)包被磁珠,使磁珠作为第二抗体载体,当抗原与第一抗体结合后,加入带有第二抗体磁珠,磁珠上第二抗体便与第一抗体结合,形成磁珠-第二抗体-第一抗体-抗原复合物,在磁力作用下,与其它物质分离。第六页，共19页。1.5IMB技术的优点

特异性强、分离速度快、效率高可重复性好、操作简单不需要昂贵的仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等第七页，共19页。2、免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用大肠杆菌布鲁式菌单增李斯特菌副溶血性弧菌沙门式菌黄曲霉菌金黄色葡萄球菌阪崎肠杆菌第八页，共19页。2.1IMB技术对大肠杆菌O157H7的检测(GB/T4789.36-2008)第九页，共19页。2.2IMB技术对单增李斯特菌检测(SN/T

0184.3-2008)第十页，共19页。2.3IMB技术对布鲁氏杆菌检验(DB32/T-2016)第十一页，共19页。2.4IMB对副溶血性弧菌检验(DB32/T-2010)第十二页，共19页。2.5IMB技术对其余食源性致病微生物的检测应用

刘琳琳等人利用“自制的金属螯合免疫磁珠”来检测食品中金黄色葡萄球菌。该法能够在30min内富集检测金黄色葡萄球菌且检测低限可达100cfu。同时磁珠可保持活性达3周以上。此检测方法同传统鉴定和分离金黄色葡萄球菌的方法相比具有速度快、灵敏性高、成本低的优点。

杜强等人利用“全自动免疫磁珠分选系统”检测食品中沙门氏菌，与国标法相比，全自动免疫珠分选系统取消了SC和TTB增菌，经BPW增菌后直接使用系统富集目标菌并接种显色平板。结果免疫磁珠法阳性检出率为32％，国标法阳性检出率为31％，二者无显著性差异(P>0.05)。但磁珠法取消了二次增菌的步骤，检测时间比国标法节省24h，且平板上的单个菌落生长率和菌株特异性也更好。第十三页，共19页。

支援等人基于抗原抗体反应的免疫学特异性,以及量子点荧光标记的高灵敏度,免疫磁珠磁性分离,免疫量子点荧光标记联合应用的检测方法,对阪崎肠杆菌试验结果表明，能在2h内对乳制品样品中的食源性致病菌（阪崎肠杆菌）进行检测，且方法特异性好，灵敏度高（达10²cfu/mL），其在食品检测领域的应用成为可能。

苏惠玉等人应用“山羊抗黄曲霉菌血清的免疫磁珠”捕获食品中的黄曲霉菌，不需要进行增菌培养，应用磁捕获-荧光聚合酶链式反应(LMC-FPCR)技术快速检测鉴定食品中的黄曲霉菌。结果：IMC-FPCR方法检测黄曲霉菌的最低检测值为2cfu／mL。结论：建立了黄曲霉菌的磁捕获-荧光聚合酶链式反应法(IMC-FPCR)，该方法可用于食品中黄曲霉菌的快速检测及鉴定。第十四页，共19页。2.6IMB技术在病毒检测中应用研究者利用抗病毒表面蛋白的单抗或多抗，开发了能捕获病毒颗粒的免疫磁珠，并对其应用时各个影响因素(孵育温度，时间等)进行了初步评估，证明了利用免疫磁珠技术可捕获病毒颗粒并用于各种检测的可行性。

如Park等制备了针对诺如病毒(norovirus)的GⅠ-1和GⅡ-4外膜蛋白的多克隆抗体，与磁珠偶联获得了相应的免疫磁珠后，采用IMBS技术与荧光逆转录PCR联用(IMBS-real-timeRT-PCR)，对人为污染已知量的诺如病毒的草莓进行检测，结果表明其检出限可低至3～7个RT-PCR单位。第十五页，共19页。2.7IMB技术在微生物检测应用时的主要影响因素1免疫磁珠的质量2目标菌、杂菌及磁珠的比例3待测标本的性状4磁珠与待测标本的反应条件第十六页，共19页。2.8IMB技术在食源性致病菌检测中应用进展1IMB技术结合显色培养基对食源性致病菌进行检测2IMB技术结合PCR技术对食源性致病菌进行检测3IMB技术结合免疫学技术对食源性致病菌进行检测4IMB技术结合电化学技术对食源性致病菌进行检测5IMB技术结合流式细胞仪对食源性致病菌进行检测第十七页，共19页。3、小结

IMB技术在微生物学检测领域中的应用越来越广泛，其方便有效性主要在于代替了常规的选择性增菌培养过程，可特异地将目的微生物从样品中快速分离出来。与其他先进检测技术结合使用，充分发挥二者优势，还能节约更多时间、发挥更大的作用。

但目前在免疫磁珠的生产上还存在一些问题，其制备难度大，要获得均匀性好、超顺磁性、粒度适中、易于结合蛋白质的磁珠很难。现今大部分的磁珠市场被瑞士Dynal和德国的Miltenyi两大公司所占有，其产品价格昂贵，这极大地限制了免疫磁珠技术在我国的普及及应用。因此，商业化生产优质的国产免疫磁珠是今后研究的主要方向。相信随着研究的不断深入，免疫磁珠技术的应用前景定会更加广阔。第十八页，共19页。References:[1].苏惠玉,谢荣珍与牛建军,免疫磁珠捕获结合荧光PCR技术检测食品中黄曲霉菌的研究.食品科学,2010(10):第287-291页.[2].费枫与黄迅辰,免疫磁珠的原理与特性及其在动物源性食品检测中的应用研究.浙江畜牧兽医,2014(05):第43-47页.[3].刘细霞与涂俊铭,免疫磁珠分离技术及其在食源性致病菌检测中应用的进展.中国抗生素杂志,2014(12):第956-960页.[4].盛跃颖与陈敏,免疫磁珠分离技术在病原微生物检测中的应用.中国食品卫生杂志,2011(05):第478-481页.[5].杜强与屠博文,全自动免疫磁珠分选系统检测沙门氏菌.食品安全质量检测学报,2016(05):第1836-1839页.[6].支援等,一种快速检测阪崎肠杆菌的新方法——免疫磁性分离荧光标记.乳业科学与技术,2010(05):第231-233+245页.[7]马燕萍.免疫磁珠技术简介[J].山西职工医学院学报.2000.l0:l0.[8]范蓉,钱和年.免疫磁珠技术一一种新的免疫学技术[J].国外医学(免疫学分册).1998,21(1):3.[9]陆东东.免疫磁珠技术的应用研究[J].陕西医学检验.l999.14(2):10.[10]PetzingerE,WeidenbachA.Mycotoxinsinthefoodchain:eroleofochratoxins[J].LivestockProductionScience,2002.76(3):245-250.[11]PetzingerE,ZieglerK.OchratoxinAfromatoxicologica1