2018版高考生物复习现代生物科技专题第42讲基因工程其安全性学案

第42讲基因工程及其安全性1.基因工程的出生(Ⅰ)2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)3.基因工程的应用(Ⅱ)4．蛋白质工程(Ⅰ)5.实验：DNA的粗提取与判定基因工程的操作工具1．基因工程的观点理解供体：供给目的基因。操作环境：无菌。操作水平：DNA分子水平。原理：基因重组。受体：表达目的基因。实质：性状在受体生物体内表达。长处：战胜远缘杂交不亲和阻碍，定向改造生物的遗传性状。2．DNA重组技术的基本工具限制性核酸内切酶(简称：限制酶)①根源：主假如从原核生物中分别纯化出来的。②作用：辨别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。③结果：产生黏性尾端或平尾端。(2)DNA连结酶项目·coliDNA连结酶T4DNA连结酶E根源大肠杆菌T4噬菌体功能连结黏性尾端连结黏性尾端和平尾端结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键(3)载体化学实质：双链环状DNA分子能自我复制①常用载体：质粒特色有一个至多个限制酶切割位点有特别的标志基因②其余载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。③具备的条件a．能在宿主细胞内稳固保存并大批复制。b．有一个至多个限制酶切割位点，以便与外源基因连结。．拥有特别的标志基因，以便进行挑选。④作用a．作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。b．利用它在宿主细胞内对目的基因进行大批复制。1．限制性核酸内切酶(限制酶)辨别序列的特色：体现碱基互补对称。不论是奇数个碱基仍是偶数个碱基，都能够找CCAGGA到一条中心轴线，如，以中心线为轴，双侧碱基互补对称；=====以=====为轴，双侧碱GGTCCT基互补对称。切割后尾端的种类限制酶的选择技巧①依据目的基因两头的限制酶切割位点确立限制酶的种类a．应选择切割位点位于目的基因两头的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。b．不可以选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不可以选择SmaⅠ。c．为防止目的基因和质粒的自己环化和任意连结，也可使用不一样的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要保证质粒上也有这两种酶的切割位点)。②依据质粒的特色确立限制酶的种类a．所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致，以保证产生同样的黏性尾端。b．质粒作为载体一定具备标志基因等，所以所选择的限制酶尽量不要损坏这些构造，如图乙中限制酶SmaⅠ会损坏标志基因；假如所选酶的切割位点不仅一个，则切割重组后可能丢掉某些片段，若丢掉的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不可以自主复制。2．限制酶和DNA连结酶的关系限制酶和DNA连结酶的作用部位都是磷酸二酯键。限制酶不切割自己DNA的原由是原核生物中不存在该酶的辨别序列或辨别序列已经被修饰。(3)DNA连结酶起作用时，不需要模板。3．载体上标志基因的标志原理载体上的标志基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵挡有关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵挡相应抗生素，所以在受体细胞的培养系统中加入该种抗生素就能够只保存转入载体的受体细胞，原理以下图：对于基因工程工具的几个易错点限制酶是一类酶，而不是一种酶。限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适合的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生同样的黏性尾端或平末端。(4)将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性尾端或平尾端。(5)不一样DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性尾端都同样，同一个DNA分子用不一样的限制酶切割，产生的黏性尾端一般不同样。(6)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不一样。基因工程的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。(7)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。1．(2016·高考全国卷乙，40)某一质粒载体以下图，外源DNA插入到r或r中AmpTet会致使相应的基因失活rr表示四环素抗性基因)。有人将(Amp表示氨苄青霉素抗性基因，Tet此质粒载体用BamHⅠ酶切后，与用BamHⅠ酶切获取的目的基因混淆，加入DNA连结酶进行连结反响，用获取的混淆物直接转变大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转变，有的被转变。被转变的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答以下问题：质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有__________________________________(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除知足上述基本条件外，还需拥有启动子和停止子。(2)假如用含有氨苄青霉素的培养基进行挑选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转变的和仅含环状目的基因的细胞是不可以划分的，其原由是____________________________________________________________________________________________________；并且______________和______________________的细胞也是不可以划分的，其原由是________________________________________________________________________。在上述挑选的基础上，若要挑选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有

____________的固体培养基。(3)基因工程中，某些噬菌体经改造后能够作为载体，其

DNA复制所需的原料来自____________。分析：(1)

作为运载体的质粒上应有一个至多个限制酶切割位点，

在细胞中能够自我复制，且含有特别的标志基因。(2)未被转变的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌中均未导入质粒载体，而质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，所以这样的大肠杆菌在含有氨苄青霉素的培养基中不可以生长。含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因，两者在含有氨苄青霉素的培养基中都能生长，所以没法划分两者。依据题图，用BamHⅠ切割质粒后将四环素抗性基因损坏，所以可将经氨苄青霉素培养基挑选出的菌落置于含有四环素的培养基上再次挑选，能在含四环素培养基上生计的是含有质粒载体的大肠杆菌，不可以生计的是含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。(3)噬菌体为病毒，经改造后作为载体时，其DNA复制所需原料来自受体细胞。答案：(1)能自我复制、拥有标志基因(2)两者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长

含有质粒载体

含有插入了目的基因的重组质粒

(或答含有重组质粒

)

二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长

四环素

(3)受体细胞2．(2016·高考全国卷丙，40)图(a)中的三个DNA片段上挨次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的辨别序列与切割位点，图

(b)为某种表达载体的表示图

(载体上的

EcoR

Ⅰ、Sau3A

Ⅰ的切点是独一的

)。依据基因工程的有关知识，回答以下问题：(1)经BamHⅠ酶切后获取的目的基因能够与上述表达载体被

____________酶切后的产物连结，原由是

________________________________________。若某人利用图(b)所示的表达载体获取了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图(c)所示。这三种重组子中，不可以在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不可以表达的原由是______________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)DNA

连结酶是将两个

DNA片段连结起来的酶，常有的有

____________________和____________________，此中既能连结黏性尾端又能连结平尾端的是

____________。分析：

(1)由图(a)

可知，只管

BamH

Ⅰ和

Sau3A

Ⅰ两种限制酶的辨别位点不同样，但两种酶切割后产生的

DNA片段拥有同样的黏性尾端，故被

BamH

Ⅰ酶切后获取的目的基因能够与图(b)

中表达载体被

Sau3AⅠ酶切后的产物连结。

(2)运载体上的启动子和停止子拥有调控目的基因表达的作用，因为甲和丙的目的基因分别插入在启动子的上游和停止子的下游，故这两个运载体上的目的基因都不可以被转录和翻译。

(3)常有的

DNA连结酶是

E·coli

DNA连结酶和T4DNA连结酶，但作用有所差异，T4DNA连结酶既能连结黏性尾端，又能连结平尾端，而E·coliDNA连结酶只好连结黏性尾端。答案(1)Sau3AⅠ两种酶切割后产生的片段拥有同样的黏性尾端(2)甲和丙甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在停止子的下游，二者的目的基因均不可以被转录(3)E·coli

DNA连结酶

T4DNA连结酶

T4DNA连结酶基因工程的基本操作程序1．目的基因的获取目的基因：主要指编码蛋白质的基因，也能够是一些具调控作用的因子。从基因文库中获取人工利用mRNA反转录合成(2)方法合成经过DNA合成仪用化学方法人工合成利用PCR技术扩增2．基因表达载体的建立——基因工程的核心目的：使目的基因在受体细胞中稳固存在，并且能够遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体的构成建立过程3．将目的基因导入受体细胞植物：农杆菌转变法、基因枪法、花粉管通道法。动物：显微注射技术。微生物：感觉态细胞法。4．目的基因的检测与判定利用DNA分子杂交技术检测目的基因的有无。利用分子杂交技术检测目的基因的转录。利用抗原—抗体杂交检测目的基因的翻译。利用个体生物学水平的检测判定重组性状的表达。1．基因组文库与部分基因文库基因文基因组文库部分基因文库库种类(cDNA文库)某种生物发育的某个某种生物所有DNA时期的mRNA建立基↓限制酶↓反转录因文库很多DNA片段cDNA的过程与载体↓连结导入与载体↓连结导入受体菌集体受体菌集体2.PCR技术原理：DNA复制。需要条件：模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳固DNA聚合酶(Taq酶)。过程：DNA受热变性解旋为单链、冷却后引物与单链相应互补序列联合，而后在热稳固的DNA聚合酶作用下延长合成互补链。3．将目的基因导入受体细胞生物植物动物微生物种类常用农杆菌转变法显微注射技术感觉态细胞法方法主要受体体细胞受精卵原核细胞细胞将目的基因插入到Ti将含有目的基因的表质粒的T-DNA上→转达载体提纯→取卵转变入农杆菌→导入植物(受精卵)→显微注射过程细胞→整合到受体细→受精卵发育→获取胞的染色体DNA上→拥有新性状的动物表达目的基因检测与判定的“四个层面”

2＋Ca办理细胞→感觉态细胞→重组表达载体DNA分子与感觉态细胞混淆→感觉态细胞汲取DNA分子基因工程操作过程中的几个易错点(1)目的基因的插入位点不是任意的：基因表达需要启动子与停止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与停止子之间的部位。基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象：第一步存在逆转录法获取DNA，第二步存在黏性尾端连结现象，第四步存在检测分子水平杂交。(3)农杆菌转变法原理：农杆菌易感染植物细胞，并将其Ti质粒上的TDNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。转变：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内保持稳固和表达的过程，称为转变。转变的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。标志基因的种类和作用：标志基因的作用——挑选、检测目的基因能否导入受体细胞，常有的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。受体细胞的选择：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则一定用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用支原体，原由是它营寄生生活；必定不可以用哺乳动物成熟的红细胞，原由是它无细胞核，也没有核糖体等细胞器，不能合成蛋白质。还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子(DNA片段)≠开端密码子(RNA)；停止子(DNA片段)≠停止密码子(RNA)。②基因表达载体的建立是最核心、最重点的一步，在体外进行。1．(高考全国卷改编)依据基因工程的有关知识，回答以下问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其尾端种类有__________和__________。质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段以下：AATTCGGCTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶一定拥有的特色是__________________________________________________________________。按其根源不一样，基因工程中所使用的DNA连结酶有两类，即__________DNA连结酶和____DNA连结酶。反转录作用的模板是____________，产物是__________。若要在体外获取大批反转录产物，常采纳__________技术。基因工程中除质粒外，__________和__________也可作为运载体。若用重组质粒转变大肠杆菌，一般状况下，不可以直接用未办理的大肠杆菌作为受体细胞，原由是____________________________________________。分析：限制性内切酶切割DNA分子形成的尾端往常有两种，即黏性尾端和平尾端。为使运载体和目的基因连结，两者一定拥有同样的黏性尾端，因此当使用除EcoRⅠ以外的其余酶进行切割时，应当产生同样的黏性尾端。

DNA连结酶的根源有两个：一是大肠杆菌，二是

T4噬菌体。反转录是由

RNA形成

DNA的过程，获取大批反转录产物经常用

PCR扩增技术。基因工程常用的运载体是质粒，除此以外，噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。假如用大肠杆菌作受体细胞，一定用钙离子办理，使其处于感觉态(此状态汲取外源DNA的能力加强)。答案：

(1)黏性尾端

平尾端

(2)切割产生的DNA片段尾端与

EcoRⅠ切割产生的同样(3)大肠杆菌

T4

(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)噬菌体

动植物病毒

(6)未办理的大肠杆菌汲取质粒(外源DNA)的能力极弱2．(2016·高考天津卷，7)人血清白蛋白(HSA)拥有重要的医用价值，只好从人血浆中制备。以下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条门路。为获取HSA基因，第一需采集人的血液，提取________合成总cDNA，而后以cDNA为模板，采纳PCR技术扩增HSA基因。以下图中箭头表示一条引物联合模板的地点及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的地点及扩增方向。(2)启动子往常拥有物种及组织特异性，建立在水稻胚乳细胞内特异表达需要选择的启动子是________(填写字母，单项选择)。A．人血细胞启动子B．水稻胚乳细胞启动子

rHSA的载体，C．大肠杆菌启动子

D．农杆菌启动子利用农杆菌转变水稻受体细胞的过程中，需增添酚类物质，其目的是______________________________________________________________。人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确空间构造才有活性。与门路Ⅱ对比，选择门路Ⅰ获取rHSA的优势是__________________________________________________________。(5)为证明rHSA拥有医用价值，须确认rHSA与________的生物学功能一致。分析：(1)cDNA是以mRNA为模板逆转录获取的，要合成总cDNA，需要采集人的血液，提取总

RNA(或mRNA)。PCR扩增目的基因时DNA的合成方向老是从子链的5′端向3′端延长，两条模板链指导合成的子链延长方向相反。

(2)启动子拥有物种和组织的特异性，

要建立在水稻胚乳细胞内特异表达

rHSA的载体，应选择水稻胚乳细胞的启动子。

(3)自然条件下农杆菌可感染双子叶植物和裸子植物，而对大部分票据叶植物没有感染能力，当植物受损害时，伤口处的细胞会分泌大批的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞。水稻为票据叶植物，利用农杆菌转变水稻受体细胞的过程中增添酚类物质，可吸引农杆菌移向水稻受体细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。(4)大肠杆菌为原核生物，只有核糖体一种细胞器，不可以对翻译形成的肽链进行加工修饰，水稻为真核生物，细胞内拥有生物膜系统，能对来自核糖体的初始rHSA多肽进行高效加工。(5)HSA拥有重要的医用价值，要证明rHSA拥有医用价值，须确认rHSA与HSA的生物学功能一致。答案：(1)总RNA(或mRNA)(2)B吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有益于目的基因成功转变水稻是真核生物，拥有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工(5)HSA基因工程的应用与蛋白质工程1．基因工程的应用动物基因工程：用于提升动物生长速度从而提升产品产量；用于改良畜产品质量；用转基因动物生产药物；用转基因动物作器官移植的供体等。植物基因工程：培养抗虫转基因植物、抗病转基因植物和抗逆转基因植物；利用转基因改进植物的质量。比较基因治疗与基因诊疗项目原理操作过程进展利用正常基因导入有基基因基因表达因缺点的细胞中，以表达临床实验治疗出正常性状来治疗(疾病)基因制作特定DNA探针与病碱基互补配对人样品DNA混淆，剖析杂临床应用诊疗交带状况2.蛋白质工程(1)流程图写出流程图中字母代表的含义：A．转录，B.翻译，C.分子设计，D.多肽链，E.预期功能。结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。应用：主要集中应用于对现有蛋白质进行改造，改进生物性状。1．基因工程的应用乳腺生物反响器①长处：产量高、质量好、成本低、易提取等。②操作过程：获取目的基因→建立基因表达载体→显微注射导入哺乳动物受精卵中→形成初期胚胎→将胚胎移植到受体动物子宫内→发育成转基因动物→在雌性个体中目的基因表达，从分泌的乳汁中提取所需蛋白质。基因工程药品①生产方式：利用基因工程培养“工程菌”来生产药品。a．“工程菌”：用基因工程的方法，获取使外源基因高效率表达的菌类细胞株系，如含有人胰岛素基因的大肠杆菌菌株、含有抗虫基因的土壤农杆菌菌株等。b．经过基因工程生产的药品，从化学成分上剖析都应当是蛋白质类。②成就：生产出细胞因子、抗体、疫苗、激素等。2．蛋白质工程与基因工程的比较差异项目蛋白质工程基因工程预期蛋白质功能→设计预期的蛋白获取目的基因→基因表达载体的构过程质构造→推断应有的氨基酸序列→建→将目的基因导入受体细胞→目找到相对应的脱氧核苷酸序列的基因的检测与判定定向改造生物的遗传特征，以获取人实质定向改造或生产人类所需的蛋白质类所需的生物种类和生物产品结果可生产自然界没有的蛋白质只好生产自然界已有的蛋白质联系①蛋白质工程是在基因工程的基础上，延长出来的第二代基因工程。②基因工程中所利用的某些酶需要经过蛋白质工程进行修饰、改造。有关基因工程应用的四个易错点动物基因工程主假如为了改良畜产品的质量，而不是为了产生体型巨大的个体。(2)Bt毒蛋白基因控制合成的Bt毒蛋白并没有毒性，进入昆虫消化道被分解成多肽后产生毒性。青霉素是青霉菌产生的，不是经过基因工程产生的。并不是所有个体都可作为乳腺生物反响器。操作成功的应当是雌性个体，个体自己的生殖速度、泌乳量、蛋白含量等都是应当考虑的要素。命题1基因工程的应用1．为了增添油菜种子的含油量，研究人员试试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获取了转基因油菜品种。研究人员依照基因的已知序列设计引物，采纳________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切点以下图，则用____________________酶办理两个基因后，可获取____________端(填图中字母)相连的交融基因。将上述交融基因插入以下图Ti质粒的T－DNA中，建立__________________并导入农杆菌中。将获取的农杆菌接种在含________的固体平板上培养获取含交融基因的单菌落，再利用液体培养基振荡培养，能够获取用于转变的侵染液。(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是

______________________，进一步挑选后获取转基因油菜细胞，该细胞经过

__________________________技术，可培养成转基因油菜植株。用________________________法可检测转基因油菜植株中的交融基因能否成功表达。答案：(1)PCRClaⅠ酶和DNA连结A和D基因表达载体(或重组质粒)四环素(3)利用农杆菌将交融基因导入油菜细胞植物组织培养(4)抗原—抗体杂交命题

2

蛋白质工程2．(2015·高考全国卷Ⅱ，

40)已知生物体内有一种蛋白质

(P)，该蛋白质是一种转运蛋白，由

305个氨基酸构成。假如将

P分子中

158位的丝氨酸变为亮氨酸，

240位的谷氨酰胺变为苯丙氨酸，改变后的蛋白质

(P1)不仅保存

P的功能，并且拥有了酶的催化活性。回答下列问题：(1)从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，能够考虑对蛋白质的________________进行改造。以P基因序列为基础，获取P1基因的门路有修饰________基因或合成________________基因。所获取的基因表达时是按照中心法例的，中心法例的所有内容包含________________的复制，以及遗传信息在不一样分子之间的流动，即：________________________________________________________________________。蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本门路是从预期蛋白质功能出发，经过________________和________________，从而确立相对应的脱氧核苷酸序列，据此获取基因，再经表达、纯化获取蛋白质，以后还需要对蛋白质的生物________进行判定。分析：(1)从题中所述资料可知，将P分子中158位的丝氨酸变为亮氨酸，240位的谷氨酰胺变为苯丙氨酸后，该蛋白质的功能发生了改变，此过程是经过对构成蛋白质的氨基酸的摆列次序进行改造，从而改变了蛋白质的构造，从而改变了蛋白质的功能。在蛋白质工程中，目的基因能够以P基因序列为基础，对生物体内原有的P基因进行修饰，也能够经过人工合成法合成新的P1基因。中心法例的内容以下图：由图可知，中心法例的所有内容包含：DNA以自己为模板进行的复制，DNA经过转录将遗传信息传达给RNA，最后RNA经过翻译将遗传信息表达成蛋白质；在某些病毒中RNA可自我复制(如烟草花叶病毒等)，在某些病毒中能以RNA为模板逆转录合成DNA(如HIV)，这是对中心法例的增补。蛋白质工程的基本门路是预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质构造→推断应有的氨基酸序列→合成DNA→表达出蛋白质，经过该过程获取的蛋白质，需要对其生物功能进行鉴定，以保证其发挥正常作用。答案：(1)氨基酸序列(或构造)(其余合理答案也可)(2)PP1DNA和RNA(或遗传物质)DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质(或转录、逆转录、翻译)(3)设计蛋白质的构造推断氨基酸序列功能课时作业1．如图是基因工程的基本操作流程，请据图回答以下问题：(1)图中A是________；在基因工程的基本操作过程中，②是____________________。(2)在①②③④中，只有一个步骤无碱基互补配对，该步骤是________。受体细胞假如植物细胞，可采纳________，还可采纳________，而后用________________方法培养新个体。若受体细胞是工程菌，则合成“表达产物”一定经过的两个过程是________________。分析：(1)获取目的基因后，与载体联合，进行基因表达载体的建立。(2)①获取目的基因可用逆转录法，存在碱基互补配对，②基因表达载体的建立存在黏性尾端连结现象，④DNA的扩增存在DNA复制现象。(3)受体细胞假如植物细胞可采纳受精卵，还可采纳体细胞，而后用植物组织培养的方法培养新个体。(4)蛋白质的表达一定经过转录和翻译。答案：(1)载体基因表达载体的建立③受精卵体细胞植物组织培养转录和翻译2．(2016·高考江苏卷，33)下表是几种限制酶辨别序列及其切割位点，图1、图2中标注了有关限制酶的酶切位点，此中切割位点同样的酶不重复标明。请回答以下问题：限制酶HIBclI3AIHindⅢBamSau辨别序列及G↓GATCCT↓GATCA↓GATCA↓AGCTT切割位点CCTAG↑GACTAG↑TCTAG↑TTCGA↑A(1)用图中质粒和目的基因建立重组质粒，应采纳________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，经过________酶作用后获取重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于

________态的大肠杆菌。为了挑选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在挑选平板培养基中增添________，平板上长出的菌落，常用PCR判定，所用的引物构成为图2中________________________________________________________________________。若BamHⅠ酶切的DNA尾端与BclⅠ酶切的DNA尾端连结，连结部位的6个碱基对序列为________________________________________________________________________________________________________________________________________________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”“都不可以”或“只有一种能”)切开。若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获取________种大小不一样的DNA片段。分析：(1)由题图可知，质粒的两个标志基因中都含有BamHⅠ的切点，所以不可以用BamHⅠ进行切割，联合题干及表中信息可知也不可以用Sau3AⅠ进行切割，所以只好用质粒和目的基因中都含有切点的BclⅠ和HindⅢ这两种限制酶来切割目的基因和质粒。酶切后的载体和目的基因片段，经过DNA连结酶作用后获取重组质粒。要将重组质粒转入大肠杆菌，要先用CaCl2办理大肠杆菌，使其处于感觉态。(2)重组质粒中只含有四环素抗性基因这一个标志基因，所认为了挑选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在挑选平板培养基中增添四环素，含有重组质粒的大肠杆菌能在平板上长出菌落。要用PCR扩增目的基因，所用的引物构成为图2中引物甲和引物丙，因为从图2中能够看出，引物甲与引物丙与模板链联合后能达成目的基因的复制。(3)HⅠ酶切的DNA尾端是GBclT，Ⅰ酶切的DNA尾端是，那么这两个尾端BamCCTAGACTAGTGATCCGGATCA，因为连结此后的6个碱基对序连结后的连结部位的6个碱基对序列为ACTAGGCCTAGT列中没有HⅠ和BclⅠ能识其余酶切位点，故对于该部位，HⅠ和BclⅠ都不可以切开。BamBam因为质粒的BamHⅠ和BclⅠ辨别序列中都有Sau3AⅠ的辨别序列和切割位点，所以用3AⅠ切图1质粒最多可能获取7种大小不一样的DNA片段。3AⅠ切点及获取的7种大小SauSau不一样的DNA片段状况以下：①切点在1或2或3的地点能够获取1种大小的DNA分子；②切点在1和2的地点能够获取2种DNA分子；③切点在1和3的地点能够获取2种DNA分子；④切点在2和3的地点能够获取2种DNA分子，故最多可能获取7种大小不一样的DNA片段。答案：(1)BclⅠ和HindⅢDNA连结感觉(2)四环素引物甲和引物丙TGATCCGGATCA(3)都不可以ACTAGGCCTAGT(4)73．(2015·高考四川卷，9)将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获取抗棉铃虫的转基因棉，其过程以以下图所示(注：农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。过程①需用同种________________酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。为将过程②获取的含重组质粒的农杆菌挑选出来，应使用________培养基。(2)过程③中将棉花细胞与农杆菌混淆后共同培养，旨在让________进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上持续培养，目的是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________