NK细胞在肿瘤疾病应用

生物免疫疗法简介生物免疫治疗是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法，临床上主要用于抗肿瘤治疗，并取得显著的治疗效果。继手术、放疗、化疗之后的第四大肿瘤治疗技术。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后再回输到病人体内的方法来激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤目的，也成为自体免疫细胞疗法。2009年5月1日卫生部印发《医疗技术临床应用管理方法》，明确将体细胞免治疗列入第三批允许临床应用的第三类医疗技术。第一页，共32页。生物免疫疗法的发展80年代末期开始，日本研制和开发出特制人体活化自身淋巴细胞体外培养液，成功地建立起崭新的细胞免疫疗法。采取病人少量的血液，将分离出的淋巴细胞在含有特殊细胞刺激因子及营养素的培养液中培养，使培养细胞定向分化和大量增殖为活性NK细胞。临床应用治疗取得了良好疗效，同时没有副作用出现。细胞免疫疗法最早从LAK的临床应用开始。1984年Rosenberg研究组经美国食品和药品检验局(USFoodandDrugAdministration,FDA)批准下，首次应用IL-2与LAK协同治疗癌症并获得明显疗效。但由于IL-2在治疗过程中出现毒副反应（毛细血管渗漏综合征，capillaryleaksyndrome,CLS)，主要表现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺间质水肿和充血性心力衰竭。引起CLS的机理可能与内皮细胞损伤和产生血管活性物质有关。1992年美国的RosewellPark医院中止了此疗法。第二页，共32页。癌细胞每天都在发生体的细胞数大约有60兆至70兆个，其中包括有增殖能力及没有增殖能力的细胞群。有增殖能力的细胞群每天都在新旧交替以维持正常组织结构和机能。健康人的体内每天会有3000-5000个细胞发生癌变，之所以没有出现癌变，是因为体内的免疫系统及早识别了癌细胞，并将其杀死，阻止癌细胞的过度增殖，防止癌变的发生。人体的免疫系统是抵御癌症的“防火墙”。当某种原因导致免疫系统失衡时，机体防御能力下降，免疫系统失去有效的杀伤癌细胞的能力，最终导致癌症的发生。第三页，共32页。抗肿瘤免疫疗法主动免疫疗法Vaccine

疗法癌抗原接种树状细胞(DC)疫苗Cytokine疗法Interferon(IFN)Interleukin-2分子靶向疗法Herceptin

曲妥珠单抗Mabthera

利妥普单抗其它（健康食品等）被动免疫疗法树突状细胞疗法（DC)活化NK细胞疗法（NK)肿瘤组织浸润淋巴细胞疗法（TIL)杀伤性T细胞疗法（CTL)活化自体淋巴细胞疗法(LAK、CIK)第四页，共32页。扫描电镜显示杀伤细胞攻击癌细胞第五页，共32页。血液构成示意图血液红细胞白细胞血小板血浆淋巴细胞单核细胞粒细胞NK细胞T细胞B细胞其他辅助性T细胞杀伤性T细胞抑制性T细胞巨噬细胞树突状细胞组织内分化嗜中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞第六页，共32页。癌症的治疗1、手术疗法2、放射线疗法3、化学疗法4、免疫疗法第七页，共32页。ＮＫ细胞大约在１９７０年被发现，是来源于造血细胞的一种大粒状淋巴细胞。NK是机体重要的免疫细胞，与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有密切关系。什么是NK细胞？第八页，共32页。NK细胞排除癌细胞的三个途径（1）GranuleExocytosisPathwayCaspase-dependentand–independentdeathpathwaysCelldeath+-NKactivatingreceptorNKinhibitoryreceptorNK：formsporesinthetargetcellmembrane,allowstheentryofgranzyme,fluidandsaltssothatthetargetcelleventuallybursts.TumorcellsPerforin：serineproteases,mediateapoptosisoftargetcellsthroughcaspase-dependentand–independentpathways.Granzymes第九页，共32页。NK细胞排除癌细胞的三个途径（2）Death-receptorPathwayFASligand(FASL)andtumor-necrosis-factor-relatedapoptosis-inducingligand(TRAIL)canbindtoandactivatetheirreceptors,FASandTRAILR,whichareexpressedbytumorcells.FAS(CD95)TRAILR(DR4andDR5)Tumorcellsc-FLIPFASLTRAILapoptosisNKcellNKcellThisinteractioninducestumor-cellapoptosis.Theproteinc-FLIP(FLICEinhibitoryprotein)blocksapoptosisinductionthroughthispathway.第十页，共32页。NK细胞排除癌细胞的三个途径（3）IFN-g,NitricOxideNKcellssecreteanumberofeffectorcytokines,suchasIFNg,TNF,granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor(GM-CSF),IL-5,IL-10andIL-13.NK-cellproductionofTH1(proinflammatorycytokine:IFNg)andTH2(IL-4,IL-5,IL-13)cytokinesoccursatdistinctstagesofNK-celldifferentiation.MatureNKcellslosetheabilitytoproducethetype2cytokinesandacquiretheabilitytoproduceINFg.NKcellIFN-gCytotoxicityTumorcellsInductionofMHCmoleculesanti-angiogeniceffectNitricoxideActivation第十一页，共32页。NK细胞在癌免疫反应中的作用IFN-gActivationCD8+Tcell(CTL)CD4+Tcell(HelperTcell)NK1.1+Tcell(NKTcell)BcellDCDCActivationMaturationIFN-gHelpingCTLgenerationGlycolipidligand/CD1IL-12Anti-tumorAbsAg-specificCTLresponseAgpresentationTumorAguptakeandgenerationofAg-specificimmuneresponseCytokineStressligandDangersignal?Immunepressure(Activationandproliferation)(Activationandproliferation)NKcell第十二页，共32页。自体NK细胞疗法自体NK细胞疗法是抗肿瘤生物免疫治疗之一。简单说就是从患者的静脉血管中抽取20-50ml血液，从中分离出少量的免疫细胞，利用最新科技手段，通过体外选择性诱导、增殖、激活后，将高活性高数量NK细胞回输患者体内，以此来提高患者的免疫力和对癌细胞的杀伤能力，达到治疗目的的一种先进抗肿瘤治疗方法。第十三页，共32页。NK细胞活性实验癌细胞(T)和不同浓度的effector(E)细胞进行处理,比较活性化自身NK细胞和PBMC的活性，其结果活性化自身NK细胞的杀伤力与细胞浓度相关。同时随着细胞数量的增加其细胞杀伤力的活性显著增强。此外，PBMC的活性则随着细胞浓度的增加其细胞杀伤力几乎没有变化。第十四页，共32页。NK细胞免疫疗法NK细胞选择性诱导Thecellsarewashedandresuspendedinisotonicsodiumchloridesolution.Check:CellcountMorphologyViabilityCellmarkers:CD56,CD16,CD3,CD4,CD8etc.cellcytotoxic%MicroorganismtestCulturedwithhumanNKcellculturemediumat37℃inahumidified,5%CO2incubatorforabout10~14days.细胞刺激因子混合培养NK细胞MIXTUREabout2-6x109Cells20~30ml分离淋巴细胞采血第十五页，共32页。NK细胞疗法肿瘤患者治疗流程医院细胞处理中心介绍生物免疫治疗治疗的充分商量NK细胞的分离与培养NK细胞的一部分冻结保管2～3周检验及血液的采取必要应对的培养，再培养自体NK细胞制定治疗方案

自体NK细胞第十六页，共32页。NK细胞疗法适应症（临床）1、手术后患者，可防止肿瘤转移复发。2、无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者。3、放疗、化疗失败的患者。4、放疗或化疗患者的综合治疗。5、骨髓移植后或化疗换届后的白血病患者。6、癌性胸、腔积液患者。除来源于T淋巴细胞和NK细胞的原发性肿瘤、白血病、败血病、以及自身免疫病患者外，适用于所有其他肿瘤患者。第十七页，共32页。NK细胞疗法优势4.NK细胞疗法可调节和增强全身免疫机能，创造更多的治疗机会。采血提取免疫细胞模拟骨髓微环境定向扩增激活NK细胞-196℃液氮储存NK细胞免疫保健1.

NK细胞是用患者本身的细胞，没有副作用和排斥反应。2.NK细胞可有效地杀伤残余的肿瘤细胞，防止肿瘤的复发、转移。3.NK细胞疗法可联合手术、放疗、化疗治疗，达到相乘效果。第十八页，共32页。NK细胞疗法（日程安排）治疗日程安排根据患者的病情或以往病史，大夫和患者（患者家属）商量之后决定。标准的一个疗程是6针，隔两周抽血、回输一次，约三个月一个疗程。与三大治疗（手术、放疗、化疗）联合治疗时候，可调节治疗日程安排。采血2点滴1采血3点滴2采血4点滴3采血5点滴4采血6点滴5

采血2点滴1采血1培养期间2星期培养期间2星期培养期间2星期培养期间2星期培养期间2星期培养期间2星期第十九页，共32页。细胞制备中心与硬件展示低温离心机流式细胞仪细菌检测仪细胞培养室液氮冻存罐cGMP制备室第二十页，共32页。安全的冻存、运输与输注采集检测培养冻存采集检测培养冻存第二十一页，共32页。安全管理体系免疫细胞及干细胞质量受三大阶段和主体的制约，即严格的血液采集质量标准、严格的制备检验和科学的培养进程是获得高质量细胞制剂的关键要素！质量污染第二十二页，共32页。NK细胞疗法临床病例1（胃癌67岁男性）2009年4月胃镜中发现胃前壁有２型肿瘤，诊断为进展期胃癌服用抗癌药（ＴＳ－１）效果欠佳。2009年5月接受第１次活性ＮＫ細胞治療。2009年9月复查CT，与ＮＫ細胞治療前相比肿瘤明显缩小。治疗前治疗后第二十三页，共32页。