吴梧桐主编《生物制药工艺学》学习笔记电子教案

学习学习 好资料更多更多第一章生物药物概论1、生物药物的分类〔1〕〔2〕〔3〕〔4〕局部合成的药物。DNADNA〔术〕制造的重组多肽、蛋白质类药物和疫苗、单克隆抗体与细胞因子等；基因药物即以基因物质〔DNARNA〕为根底，争论而成的基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。2、生物药物的作用特点：药理学特性〔1〕〕〔3〕〔4〕生理副作用常用发生。1〕〔2〕〔3〕〔4〕生物药物制剂的特别要求。3DNA〔1〕细胞因子干扰素类：-干扰素、-干扰素、-干扰素2〕细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子：白介素-2〔IL-2〕和突变型白介素-2〔Ser125-IL-2〕肿瘤坏死因子类主要有TNF-α和TNF-α〔〕造血系统生长因子类：粒细胞集落刺激因子G-CSF、巨噬细胞集落刺激因子M-CSF、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子GM-CSF、促红细胞生成素EPO、促血小板生成素TP〕SCF〔4〔IGF〔EGF〔PDFD、转化生长因子TGF-αTGF-β、神经生长因子及各种神经养分因子〔5〕重组人胰岛素rhInsulin、重组人生长激素rhGH、促卵胞激素FSH、促黄体生成素LH〕和绒毛膜促性腺激素HCG、重组人白蛋白和重组人血红蛋白〔6〕心血管病治疗剂与酶制剂：Ⅷ因子、水蛭素、tpA、rtpADNsae〔7〕重组疫苗与单抗制品：重组乙肝外表抗原疫苗、乙肝基因疫苗、AIDS4术语药物：用于预防、诊断、治疗保健的一类物质。药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。药。自然药物一般来源于自然界，很少有人工加工过程，药物成分相对较简洁。〔biopharmaceutics〕生物化学与分子生物学、微生物学与免疫学、物理化学与工程学和药学的原理与方法加工制造而成的一大类用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品。〔包括基因工程技术和蛋白质工程技术〕制造的重组多肽、蛋白质类药物和疫苗、单克隆抗体与细胞因子等。片段、重组疫苗、反义药物和核酸等。〔包括动物、植物、微生物和海〕分别、纯化得到的一些重要生理活性物质，经药效学和毒理学争论证明对于疾病的防治是安全有衍生物。10~DNAmRNAISISFDAAIDS核酸疫苗：将编码某种抗原蛋白的外源基因〔DNA或RNA〕直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，诱导宿主产生对该抗原蛋白质的免疫应答以到达防病治病的目的。1、生物活性物质的浓缩与枯燥的方法：生物活性物质的浓缩〔1〔〔Sephadex4〕用聚乙二醇〔PEG〕〔5〕〔6〕真空减压浓缩与薄膜浓缩〔1〕〔2〕喷雾枯燥〕冷冻枯燥2简述生物活性物质分别纯化的主要原理：混合物置于某一相中，外加确定作用力，使多组分安排于不同区域，从而到达分别的目的。主要纯化原理〔1〕依据分子的外形和大小不同进展分别〔2〕依据分子电离性质〔带电性〕的差异进展分别〔3〕〔4〕依据物质吸附性质的不同进展分别〔5〕依据配体特意性进展分别3、保存菌种、菌种退化、检查菌种退化冻保藏法、其他如沙土管保藏法。把菌株的生活力、产孢子力气的衰退和特别产物产量的下降统称为退化。1〕单位容积中发酵液的活性物质含量〔2〕〔3〕〔4〕发酵过程的pH变动状况〔5〕味、色泽重组DNA〔1〕鸟枪克隆法〔2〕12、化学合成法常见的基因载体有，如何构建基因重组体DNAphage(cosmid病毒载体等。DNA表达宿主，如酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、植物细胞等。一代，便于大规模培育，本钱较低，表达水平较高〔可达总蛋白的5%~6%易于把握。目前使用最广泛、最成功的表达系统。14。8g/L;③培育本钱低；④适用高密度发酵；⑤杂蛋白少，产物易纯化。哺乳动物表达系统：中国仓鼠卵巢细胞〔CHO〕和猴肾细胞〔COS〕优点是能识别和剪切外源基因的内含子并加工成为成熟的mRNA.但其培育技术难度大，本钱高，争论与生产周期长。表达体系产物表达体系产物产生部位培育方式提纯产物活性潜在危急大肠杆菌多肽、蛋白菌体内蛋白质简洁局部可获得高产一般对原核者好真核者稍差不大酵母化蛋白胞简洁可高产简洁真核的接近天然不大哺乳动物细胞化蛋白质胞较难本钱高可高产简洁几乎可为自然产物需留意有致癌因素生物制药工艺中试放大的目的，如何进展中试放大。法有阅历放大法，相像放大法和数学模型放大法。主要承受阅历放大法。术语微生物纯培育：系指只在单一种类存在的状态下所进展的生物培育。全部微生物、植物和动物都可以进展这种培育，高等植物或动物的无菌培育〔无菌饲养〕也可说是一种纯培育。纯培育最重要的是在于微生物界中，有的培育条件很困难，特别是具有亲热共生关系的生物及进展寄生性养分的生物；也有一些在理论上不行能进展纯粹培育的生物。3蛋白质工程：在基因水平上设计表达功能蛋白。因稳定地子代，使子代表现外源基因的性状。第三章、生物材料的预处理1、去处发酵液中的杂蛋白的方法〔1〕〔〕〔〕〔〕5〕电点沉淀〔6〕加各种沉淀剂2、去处发酵液中的钙、镁、铁离子的方法：〔1〕〔2〕沉淀法钙与草酸钠或草酸镁的去处用草酸沉淀不完全，碱性条件下用磷酸盐，或三聚磷酸钠，生成络合物〔污染河水〕3、影响絮凝效果的主要因素：絮凝剂分子量、絮凝剂用量、pH及操作条件絮凝剂分子量越大，链越长，吸附桥架效果就越明显，但分子链越大，絮凝剂在水中的溶解度降低；使胶粒稳定，降低絮凝效果；pH4方法原理特点机法械匀浆法基于液相的剪切力活珠磨法研磨作用裂开生物活性物质失活超声波超声波的空穴作用裂开产热大，散热不易，本钱高，适用小量样品裂开物法理枯燥法菌体细胞膜渗透性变化，自溶较猛烈，易引起蛋白质或其他组分变性冻融法胞内冰晶引起细胞膨胀裂开渗透压冲击法速膨胀变化较温存，但裂开作用较弱，常与酶法合用化法学化学试剂处理化学试剂溶解细胞或抽提某些细胞成分大规模生产制成丙酮粉质与脂质结合的键快速脱水，削减蛋白质变性，促进某些结合酶释放生法物酶解法用酶反响分解破坏细胞壁上特有的化学键组织自溶法细胞构造、使组织自溶的提取5、超声波裂开细胞的原理：地产生巨大的压力和拉力。由于拉力的作用，消灭细小的空穴。这种空穴泡在超声波的连续作用下，又快速闭合，产生一个极为猛烈的冲击波压力，由它引起的黏滞性旋涡在悬浮细胞上造成了剪切应力，促使其内部液体发生流淌，而使细胞裂开。术语：1〔coagulation〕破坏了胶体系统的分散状态，而使胶体粒子聚拢的过程。2〔flocculation团上，而且一个高分子聚合物的很多链节分别吸附在不同颗粒的外表上，产生架桥联接，形成粗大的絮凝团沉淀的过程。3水分快速渗入胞内，使细胞快速膨胀而裂开，使产物释放到溶液中。4无视的程度，而通过过滤介质的流速却比较小。第四章萃取法1、溶液萃取法的根本原理：如某一抗生素在有机溶剂〔不溶于水〕中溶解度较大，当料液与有机溶剂接触后，抗生素就从水相转移pH〔如游离态酸、碱或成盐，其安排系数亦有差异，假设适度转变pH，可将抗生素自有机相再转入水相，这样反复萃取，可以到达浓缩和提纯的目的。2、溶液萃取法按操作方式不同，可分为单级萃取和多级萃取，后者分为错流萃取和逆流萃取。当萃取剂多级逆流与错流萃取相比，萃取剂耗量较少，萃取液平均浓度较高。3〔1外表形成保护层。、界面电荷的影响：O/W，W/O、介质黏度：乳化剂能增加乳状液的黏度，增加保护膜的机械强度，则形成的界面膜不易被破坏，并可阻挡液珠的聚结。4、破坏乳化剂的方法：1、参与外表活性剂〔2〕〔3〕加电解质4〕〔5〕吸附法破乳6〕〔7〕稀释法〔8〕其他途径：超滤、反响萃取、中性磷萃取、脂肪类萃取剂5、影响乳化剂类型的因素有：〔1〕乳化和破乳化〔2〕pH的影响〔3〕温度和萃取时间的影响〔4〕盐析作用的影响〔5〕溶剂种类、用量及萃取方式的选择〔2〕〔3〕电化学安排——盐类的影响〔4〕〔5〕温度及其他因素7〔1〕压力的影响〔2〕〔3〕助溶剂4〕物料性质的影响8术语数的差异来进展萃取的方法。双节线：高聚物P、Q相的分界限叫双节线多级错流萃取：料液经萃取后的萃余液再用颖萃取剂进展萃取的方法。〔F萃取液挨次作为前一级的萃取剂。由于料液移动的方向和萃取剂移动的方向相反，故称为逆流萃取。其中外表活性剂的非极性基团在外，与非极性的溶剂接触，而极性基团在外，形成极性核，从而能够溶解极性物质，进展萃取。supercriticalfluidSCF〕具有特异增加物质溶解力气来进展分别纯化的技术。第五章沉淀和结晶的物或杂蛋白以沉淀形式析出，从而到达纯化目的的方法。白质的电性，使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互结合。水区域，疏水区相互作用，使其沉淀。2〔1〔2〔蛋白质〔3温度的影响〔5〕pH3〔1〕〔2pH〔3〕〔4〕某些金属离子的助沉淀作用〔6〕样品浓度4、形成过饱和溶液的方法〔〕2〕3〕〔〕〔〕有机溶剂结晶法〔6〕等电点法〔7〕微量集中法〔8〕〔9〕共沸蒸馏结晶5〔1〕过饱和度：增加过饱和度能使成核速度和晶体生长速度加快，对前者影响较大，过饱和度增加，晶体较细小〔2〕〔3〕搅拌速度：搅拌能促进成核和加快集中，提高晶核长大的速度，过快则晶体会被打碎。阅历说明，搅拌速度愈快，晶体愈细〔4〕的外形、大小和均匀度。6、等电点沉淀的特点，如何应用对于两性物质，等电点时净电荷为零，使稳定的双电层及水化膜变弱或破坏，分子间排斥电位降低，吸引力增大，相互聚拢，产生沉淀。等电点沉淀法操作简便，试剂消耗少，给体系引入的外来物质少，常用的纯化方法，主要适用于水化程度不大，在等电点时溶解度很低的物质。应用：胰岛素纯化时，在pH8。0pH3。07术语Ks盐析：在确定的pH〔盐浓度〕进展盐析。βpH和温度进展盐析。盐析分布曲线：蛋白质沉淀的速度可用—dS/dP对盐饱和度〔P〕作图表示。蛋白质沉淀的速率开头时格外快速，以后变慢，从起始沉淀到沉淀完毕，形成具有尖峰的曲线。下，进展透析。第六章吸附法1、化学吸附与物理吸附的区分：工程作用力吸附力选择性工程作用力吸附力选择性吸附分子层物理吸附范德华几乎没有较快，需要活化能很小单分子层或多分子层化学吸附库仑力有选择性慢，需要较高的活化能单分子层2、吸附剂及被吸附物的极性对吸附的影响：附极性物质，非极性吸附剂适宜从极性溶剂中吸附非极性物质。如活性炭从水中吸附有机化合物；硅胶是极性的，适宜从有机溶剂中吸附极性物质。3、吸附剂用量及吸附剂浓度对于吸附效果的影响：提高吸附选择性，常将料液适当稀释。吸附量是指单位重量吸附剂所吸附物质的量。4人造沸石：人工合成的无机阳离子交换剂。带正电荷。与钠离子交换。磷酸钙凝胶：吸附作用主要是钙离子与蛋白质负电基团结合。硅胶：活性强弱与自由水的含量有关，自由水多，活性低，自由水少，活性高。5、大网格高聚物吸附剂与传统吸附剂相比的优点：6负吸附：去除提取液中的杂质。质与活性炭、硅胶等吸附剂相像。第七章凝胶层析1Ve=Vo+KdVi各字母的含义，凝胶层析的原理。Ve——淋出体积VoVi——填料的孔体积Kd——排阻系数或安排系数已屡次进出于填料的孔，到达平衡。平衡条件只是在流速很慢时一个极端状况。2、常用凝胶的名称、特点及用途。名称名称葡聚糖凝胶〔SephadexG〕特点重复使用用途分别修饰葡聚糖凝胶聚丙烯酰胺凝胶化学稳定好，成分不易脱落，适用pH广，机械强度好，无带电基团，区分率较高琼脂糖类凝胶多孔玻璃微球疏水性凝胶化学稳定性高、强度大、高压下操作，好的流速；缺点是对糖类、葡萄糖吸附只适用分别分子量较小的物质 分别不溶水的有机物质3〔入限与排阻限，理化稳定性、强度、非特异吸附性质等；另一方面还要留意分别目的和样品的性质。4、好的凝胶层析效果如何选柱、装柱。55：110：1，对于分级分别，要求柱床体2525~1001/5水或溶剂。所用的凝胶必需是用相应溶剂系统充分溶胀的。为了防止柱中消灭气泡，凝胶悬液温度必需与室温平衡并用水泵减压排气。进胶过程必需连续、均匀，不要中断，并在不断搅拌下使胶粒均匀沉降，使不发生凝胶分层和胶面倾斜。5、溶质通过色谱峰时造成的峰加宽效应包括：分子集中：使用颗粒度小而均匀的填料可以降低扰动作用。涡流集中：涡流集中对凝胶色谱峰的加宽比较重要。应用小而均匀的填料严密地装在内径适当的柱中可以削减由涡流集中造成的峰加宽，提高效柱。流淌相中传质阻力造成的色谱峰加宽。集中速度越快，流速不平衡的影响就越小。〔1〕连接收路〔2〕检测池6、利用凝胶层析测量蛋白质的分子量。测定的依据是不同分子量的物质，只要在凝胶的分别范围内〔渗透限与排阻限之间VeKdVe=-KlgM+C(1CVeM标准曲线法以多个分子量的标准蛋白过柱，测取各自的VeVelgMVe，由标准曲线求得分子量。7柱比：层析柱的长度与直径的比值操作压：凝胶层析由于进出口之间液位差形成的对凝胶颗粒的压力分开样品分子中分子量悬殊较大的两类物质，并不要求分别分子量相近的组分。分级分别：分开分子量不Kd=1Kd=0限..区分率：R=△Ve/(1/2(Wa+Wb))区分率与洗脱体积的差值成正比，而与两物质的洗脱峰宽度成反比。81、离子交换常用洗脱方法：从树脂上洗脱目的物的方法主要有两种：pH换树脂的结合力而被洗脱下来。2、离子交换树脂的命名法。举两种树脂骨架。1~100101~200201~300301~400401~500。各种树脂除注明类别和编号外，还需标明载体的交联度。书写交联度时，将百分号除去，写在树脂编号后并用乘号“X1X77%。1〕〔〕〔〕树脂〔4〕〔5〕选择性离子交换树脂热再生离子交换树脂3|、交换环境的影响〔1〕溶液的pH〔2〕离子强度〔3〕有机溶剂四、树脂构造的影响〔1〕树脂载体交联度〔2〕关心力〔3〕其他结合力五、偶极离子排斥作用。4、偶极离子的交换特点：净电荷为零时，正电中心和负电中心并不重叠，遂成偶极。所以使树脂对氨基酸的吸附量大大降低。与树脂磺酸基没有排斥力。R1234小。均孔树脂的特点：主要为阴离子交换树脂，骨架的交联度比较均匀，孔径大小全都，重量和体积交换容量都较高，膨胀度、相对密度适中、机械强度好、抗污染和再生力气强。6、离子交换纤维素的特点及洗脱。区分率强，能分别简洁的生物大分子混合物。pHpH7、酸碱性蛋白选择适宜的离子交换纤维素。酸性蛋白质〔pH5DEAEpH5。5~90白质和交换剂都是解离的，带有相反的电荷。在CM-纤维素上层析则需限制在〔pH3.5~4.5〕之间。碱性蛋白质〔pH8〕作为一个阳离子，用羧甲基纤维素层析可在pH3.~7.58、离子交换聚焦色谱的原理：pH蛋白质的色谱行为：蛋白质所带电荷取决与他们的等电点和介质的pHpH时，蛋白质带正电荷，它不与阴离子交换剂结合，随洗脱液向下移动。聚焦效应：当一种蛋白质在柱上随洗脱液下移至等电点处，移动速度明显减慢。加上一样的其次个〔聚焦一起下移，往柱下一起洗脱出来。全部的样品必需在第一个样品峰尚未被洗脱前参与。9DEAE10、术语：CM-C：羧甲基纤维素。DEAE-C：二乙氨基乙基纤维素。PBE94：多缓冲交换剂尼柯尔斯方程：m1(1/z1)/m2(1/z2)Kc1<1/z1>/c2<1/z2>..交换容量：meq/g(毫克当量/克树脂)树脂再生：使用过的树脂重获得使用性能的处理过程。偶极离子排斥：被吸附的氨基酸的羧基所带的负电荷与树脂之负电荷产生排斥力。第九章亲和层析1、亲和层析原理，主要特点。利用生物体中多数大分子物质具有与某些相应的分子专一型可逆结合的特性。围广，特异性强，分别速度快，分别效果好，分别条件温存。缺点是吸附剂的通用性较差。2、选择配基的留意点1〕配基与配体由足够大的亲和力2〕配基与配体的结合应是专一的3〕具有化学活性。3、手臂，其长短与亲和层析的效果的联系，为什么。会使非特异性性吸附增加。4、制作高亲和力的亲和吸附剂:提高亲和层析效果，固定相的配基和流淌相的配基具有较强的亲和力。配10。空间障碍的影响：插入适当长度的手臂。配基与载体的结合位点的影响。载体孔径的大小对吸附剂的亲和力气有打算性的作用。微环境的影响，包括载体及手臂的电性、极性、次级键对配基亲和力的影响。5、非专一性吸附包括那些：如何抑制。亲和层析中的非专一性吸附有以下状况〔1〕〔〕ab性配基〔3〕复合亲和力确定离子强度以获得良好的分别效果6〔1〕pH〔2〕洗脱〔3〕7、二次作用亲和沉淀:利用在物理场〔如pH、离子强度、温度和舔加金属离子等〕转变时溶解度下降，发生可逆性沉淀的水溶性聚合物为载体固定亲和配基，制备亲和沉淀介质。亲和介质结合目的分子后，通过转变物理场使介质与目标分子共同沉淀的方法。〔1〕传质阻力小，到达吸附平衡的时间短，配基利用率高。〔20流速快，设备体积小，配基用量低。缺点：理论塔板很低，吸附和清洗率低。9术语：在亲和层析中起可逆结合的特异性物质。阻流值：Ve/Vo。正洗脱：吸附提取物中的有效成分。负洗脱：去处提取物中的杂质。金属螯合层析：利用金属离子的络合或形成螯合物的力气吸附蛋白质的分别系统。有机染料亲和层析：有机染料如蒽醌化合物和偶氮化合物具有类似于NAD+的构造，一些需要核酸类物质为辅酶的酶，对这些染料具有确定的亲和力，将这些染料共价偶联到纤维素或琼脂等多糖载体上，就制得亲和层析柱。flowfiltration)ACFF可逆的亲和反响后，用膜进展错流过滤，兼有亲和层析与膜过滤的优点。PGE〔上相〕的安排，提高目标产物的安排系数和选择性。亲和反胶团萃取：是指在反胶团相中除通常的外表活性剂〔如AOT〕外，舔加另一种亲水头部为目标分子提高目标产物的安排系数和反胶团萃取分别的选择性。第十章离心技术1〔RCF〕g”或“gRCF=11.18×106N2r(×g)2、离心机转子有几种，各自特点。使用便利，但离心管外壁易产生猛烈对流和涡流，同时管外侧会消灭沉淀，形成壁效应。Anderson量样品的密度梯度及等密度梯度离心。配有附属设备和仪器，操作过程简洁，设备较贵，但离心机使用效率高。于差速、密度梯度及等密度离心，用于平衡等密度离心时效果最正确。夜。用于试验室，也可用于小规模生产，最适宜自培育液中收集菌体及细胞。6000r/min。最适于自动植物培育液或发酵液中连续分别单细胞和菌体，回收浓度及回收率均较高。离心时间，使所需组分通过局部梯度液，形成的分别区带在到达其等密度区之前即停顿离心。速度区带离心的特点〔1〕样品加于梯度介质的顶步、离心时间需严格把握〔2〕〔3〕(4)分别依据是各组分之沉降系数差〔5〕区分率受组分沉降系数、离心时间、颗粒集中系数、介质黏度及梯度范围和外形的影响。本法适于分别颗粒大小不同而密度相近的组分，如DNA与RNA混合物、核蛋白体亚单位及线粒体、溶酶体及过氧化酶体。4、差分别心的特点、用途。纯度而不具有确定均一性。5〔1〕密度梯度介质的选用〔2〕梯度的密度范围〔3〕梯度的外形〔4〕〔5〕直线型梯度的斜率6〔1〕〔2〕混合梯度法〔3〕离心平衡法7〔1〕底部穿刺法〔2〕顶步收集法取代法虹吸法8Anderson品的密度梯度及等密度梯度离心。角度转子：定角转子速度区带离子法：离心操作时将样品液置于连续或不连续线形或非线形密度梯度液上，把握离心时间，使所需组分通过局部梯度液，形成的分别区带在到达其等密度区之前即停顿离心。得的沉淀物只具有相对纯度而不具有确定均一性。移动。当移动至其密度与介质密度相等的位置便不再移动，形成静止区带，即到达离心平衡。第十一章过滤和膜分别技术1、用于制作透析膜的材料所应具有的特点：料应具有亲水性，它只允许小分子溶质通过。在化学上呈惰性。不具有与溶质、溶剂起作用的基团。重复使用。2〔1〕旋转透析器〔2〕平面透析器3〕〔4〕浅流透析器3过于猛烈的措施易使蛋白质等生物大分子变性失活。此外，将某种水解酶类固定于膜上，能降解造成极化现象的大分子，提高流速。不过这种措施没有通用性，只适用于一些特别状况。4〔1〕无搅拌式装置〔2〕搅拌或振动式装置〔3〕小棒超滤器〔4〕道系统超滤装置5、膜孔径检测技术：D=4Kσcosθ/P修正为：D=4σ/PVGPt100ml100mlVGPt计算孔径：r= K S水

(其中r——滤膜孔隙半径，cm;K——0.265;S——膜的厚度，mm;V——蒸馏水体积，ml;G——干湿膜重量差，g;P——压力差，dyn/cm2;t——时间，s。)细菌过滤法6、超滤技术及优点。同分子量的物质进展选择性分别。使分别操作简化，避开生物活性物质的活力损失和变性。7术语超滤：以特别的超滤膜为分别介质，以膜两侧的压力差为推动力，将不同分子量的物质进展选择性分别。孔隙率：微孔滤膜孔隙总体积与滤膜总体积之比各向异性膜：在厚度方向上物质构造和性质不同的膜。浓度极化现象：超滤在外压作用下进展。外源压力迫使分子量较小的溶质通过薄膜，而大分子被截留于膜表700mmHg100ml100ml3~5mmdyn/cm2,进展计算。第十二章制备高效液相色谱1、HPLCt2、 理论塔板数及分别度的计算公式：理论塔板数N：N5.54( R )分别度Rs : R

t tR1 R2

2t12s (W)2 b1 b 23、制备型高效液相色谱的重要参数：分别度〔resolution、分别速度speed、回收率〔recovery、样品容量主要考虑样品容量、回收率、和产率。4、蛋白质分别的依据：蛋白质的疏水性、分子的大小、等电点。5、色谱介质按分别机理分为：色谱、聚焦色谱、金属螯合亲和色谱6HPLCHPLC参数分析型制备型柱内径〔mm〕2~5>10柱填料5、10μm30μm、50μm流淌相流速〔ml/min〕~1>10流淌相线速度〔cm/s〕0.1~10.01~0.5样品体积〔μl〕<200>1000要求的检测灵敏度高低注射的样品量〔mg〕7<0.5>100塔板理论：塔板理论把色谱柱看作一个分馏塔，有如下根本假设：固定相中到达平衡。流淌相通过色谱柱呈间歇式前进运动，每次前进为一个塔板体积。〔纵向集中可以无视。安排系数在各塔板上是常数。度H对载气流量μ作图为二次曲线，曲线最低点对应的塔板高度最小，柱效最高，此时流速为最正确流速〔〕H=A+B/μ+Cμ容量因子：溶质在固定相中的总摩尔数与流淌相中的总摩尔数之比。kkk选择因子：表示柱对难分别物质的选择性的好坏。 2k

t tR 0t011 1 k 1综合表达式：R ( 〕〔 2

〕N2s 4 1 k2第十三章生化药物1(主要资源1〔2〔3〔4〔5〔6〕脂类药物〔7〕维生素及辅酶类1〕药理活性高〔2〕〔3〕〔4〕生理副作用常用发生。1〕〔2〕〔3〕生物材料易染菌，腐败。〔4〕生物药物制剂的特别要求。2解成多种氨基酸混合物，经分别纯化获得各种药用氨基酸。水解、分别、结晶。发酵法：微生物通过固氮作用，硝化复原及外界吸取氨使酮酸氨基化成相应的氨基酸。〔3〕制简洁。〔5〕化学合成法：以石油化工产品为原料，价格低廉，本钱低、适合工业化生产。关键酶：固定化天冬氨酸酶、固定化L-Asp-β-脱羧酶4、5组方的原理和原则：〔1〕所供氨基酸除质量要合格外，尚需依据组合原理确定氨基酸的比例及组成。〔E〕与非必需氨基酸〔N〕1：11：3〔3〕在输液中通常参与山梨醇或木糖醇，作为添加剂。〔1〕氨基酸养分输液2〕〔〕〔〕用氨基酸输液〔5〕治疗用氨基酸输液6、7多肽类药物的分类：〔1〕多肽激素①垂体多肽激素②下丘脑激素③甲状腺激素④胰岛激素⑤胃肠道激素⑥胸腺激素多肽类细胞生长调整因子表皮生长因子〔EGF〕转移因子〔TG〕心钠素〔ANP〕〔4〕含有多肽成分的其他生化药物血活素胚胎素蛇毒等。8材料选择：〔1〕 〔2〕发育生长阶段〔3〕生物状态〔4〕原料来源〔5〕原料解剖血部位245专一性的不同来纯化蛋白质6依据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质7依据蛋白质在溶9性质进展纯化纯化留意点：34分别纯化每一步骤的优劣进展综合评价9工艺流程：2.3~2.6倍的86%~88%乙醇〔W/W〕和5%草酸提取→用pH8.0~8.4浓氨水碱化，用硫酸酸化27%〔W/V〕固体氯化钠盐析→精制→除酸性蛋白质→锌沉淀→结晶→回收10、重组DNAABβ-半乳糖苷β-半乳糖苷酶基因的信号序列的把握mRNA,再翻译出AB〔CNBr〕AB反转录酶法：通过胰岛素原的cDNAmRNAcDNA，用化学合成法把甲硫氨酸密码子〔ATG〕接在胰岛素原cDNA5′末端，再将此基因插入pBR322大肠杆菌中增殖，连接物蛋氨酸使胰岛素原从融合的蛋白质中释放出来。胰岛素原折叠成三维构造，C-肽，即可获得人胰岛素。12首先将一个用Fmoc基团对α-氨基进展保护的氨基酸通过一个支臂连接到一个不溶性载体上，随后将α-用溶液洗涤，重复进展脱保护、偶联、直到得到目的肽，最终将肽—支臂—树脂—裂解。这种延长肽链的固相合成法既可承受连续的方法，也可使用连续流淌的方法。13、依据构造特点及临床应用核酸类药物分类：ATPA、脱氧核苷酸等。生干扰素、免疫抑制的抑制物质。如：叠氮胸苷、环腺苷酸等。12、用养分缺陷型菌株发酵生产核苷及核苷酸的原理和方法。13、依据成效和临床应用酶类药物分类酶类药物：依照其成效和临床应用分类消化酶类胰酶、胰脂酶、胃蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等消炎〔抗炎、粘痰溶解酶类 溶菌酶、玻璃酸酶、DNase..血管活性酶：激肽释放酶、弹性蛋白酶抗肿瘤酶天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶其它生理活性酶 青霉素酶、尿酸酶、细胞色素C14、从生物材料中提取酶的主要过程和分别纯化过程中应留意的问题酶的纯化：凡用于蛋白质的纯化手段均适用于酶的纯化留意两个问题：12.建立活力回收表2.3.防止酶被蛋白水解酶降解15、CuZn-SoDMn-SoD以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺：

【收集】 红细胞 【洗涤】离心 2％NaCl

【溶血】

【去血红蛋白】乙醇，氯仿，离心

上清【分级沉淀】丙酮

【溶解】浓缩浓缩

上清液【热变性】60～7010min

SOD粗提液【超滤】

【柱层析】DEAE-SephadexA50

【洗脱】

【超滤】

【冻干】

冻干粉pH7.6的2.5～50mmol/LPBSMn-SOD牛肝

pH7.8PBS

【离心】上清液 【热变性】 【离心】 上清液65℃5min45％、65％〔NH 〕 SO 饱和度4 2 4

沉淀 【溶解】

透析液DE-52

流出液 【超滤】【冻干】 冻干粉16、粘多糖的特点粘多糖：是指含有氨基糖与糖醛酸或它的衍生物的多糖。N-乙酰氨基己糖DL-艾杜糖醛酸；有两种氨基己糖，即：氨基-D-葡萄糖和氨基-D-半乳糖。17、多糖构造和多糖活性的关系〔1〕多糖的高级构造与生物活性的关系〔2〕多糖的分支度及其侧链与生物活性的关系～20Mw2～4〔4〕多糖中的取代基与生物活性的关系乙酰基：转变多糖的定向性和横次性..硫酸基：抗凝血…〔包括抗艾滋病病毒〕:abc18、盐解—离子交换法生产肝素的工艺1.盐解－离子交换生产工艺猪肠粘膜

PH9.0,50~55

提取液

714树脂吸附物

1.4mol/LNaCl

树脂吸附物

3mol/LNaCl洗脱液 【沉淀】

粗品肝素

【溶解】 滤液1%NaCl,pH1.5【脱色】 滤液 【沉淀】

肝素钠精品HO，pH11 2 219、术语〔biopharmaceutics〕物化学与分子生物学、微生物学与免疫学、物理化学与工程学和药学的原理与方法加工制造而成的一大类用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品。粘多糖：是指含有氨基糖与糖醛酸或它的衍生物的多糖。支的位置与长短以及糖基上羟基的取代状况等第十四章微生物药物品种的理化性质。β-内酰胺类抗生素:β-内酰胺类抗生素是一类在构造上具有β-内酰胺环〔β-lactam〕,呈抗菌活N-酰基-6-R和酯类溶剂中，其游离酸在水中的溶解度很小，但其金属盐类易溶于水，而几乎不溶于乙醚、三氯甲烷和GGC2pK<2.6(侧2pH>11氨基糖苷类抗生素:氨基糖苷类抗生素失在分子中含有氨基糖苷构造的一大类抗生素。它们的化学构造链霉糖和葡萄糖胺衍生物所构成的糖苷。其分子中含胍基，呈强碱性，比较稳定，易溶于水，难溶于有机溶剂。链霉素盐酸易溶于甲醇，难溶于乙醇，而硫酸盐即使在甲醇中也很难溶解。硫酸卡那霉素为白色或类白色粉末，无臭，味苦，有吸湿性。易溶于水，在乙醚或三氯甲烷中几乎不溶，不溶于乙醇、丙酮、pH2~11pH6~830min120℃1h,活力5%，暴露在阳光中变黑，但对效价没有影响。1~3甲烷、酯类、微溶于乙醚。溶解度在55℃时为最小。在室温存pH6~816元环内酯抗生素，白色结晶性粉末，无臭、有苦味，易溶于甲醇、乙醇、丙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙pH2.0~9.0之间的水溶液中最稳定，遇碱水解产生丙酸，遇酸水解产生氨基碳霉糖。对热、湿、光稳定。四环类抗生素的水溶液在不同pH下稳定性差异大。四环类抗生素对各种氧化剂，包括空气中的氧气在内，都是不稳定的。其碱性水溶液特别简洁氧化，颜色很快变黑形成黑色色素。四环类抗生素在弱酸性溶液中比较稳定。四环类抗生素能和很多高价金属离子如钙离子、镁离子等形成螯合物，这一性质用于从发酵液中提取四环素。四环类和尿素形成等摩尔比复合物，不溶于水，当溶于有机溶剂时，复合物即分别成四环素和尿素。2预处理和过滤—交换洗脱、萃取—精制—脱色、结晶—洗涤、枯燥3P577-P592pH尽量避开青霉素效价的破坏损失。工艺要点：发酵液预处理和过滤→萃取→脱色和脱水→结晶→洗涤枯燥C：工业上主要承受多种分别纯化方法相结合的生产工艺，先用大孔网状吸附剂从发酵液中初C，然后经离子交换法纯化，最终承受络盐沉淀法进展结晶。c.链霉素：提取目前均承受离子交换法、二次洗脱工艺要点：预处理及过滤→交换和洗脱→精制→脱色、枯燥d.卡那霉素：承受强酸型阳离子树脂进展提纯浓缩。工艺要点：预处理→树脂洗脱→脱色→粗制→精制e.红霉素：溶剂萃取法和大孔树脂吸附法工艺要点：发酵液的预处理和过滤→吸附→洗涤、解吸→反萃取→结晶f.麦迪霉素：它在不同的酸碱度溶解在不同溶剂中的特性，以丁酯和酸性水溶液反复萃取，最终转入酸型pHg.四环素：工艺要点：酸化过滤→粗品结晶→溶解→连续结晶→分别洗涤→气流枯燥→尿素复盐结晶→