医学微生物学 第七章细菌感染的检查方法与防治原则

第7章细菌感染的检查方法与防治原则第一节细菌学诊断一、标本的采集原则1．取样部位2．无菌操作3．妥善处理4、及时送检分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。二、致病菌检查程序

（一）检查致病菌1.涂片镜检来自正确部位且形态染色性上具有特征的病原菌，进行直接涂片镜检后均有初步诊断价值。2.分离培养采用需氧培养法、高渗培养法和厌氧培养法。

3.生化检测不同致病菌有不同酶进行分解代谢,代谢产物不同。根据生化反应不同鉴别细菌。例如，肠道菌种类繁多，形态、染色性和菌落等较为相似，但肠道菌可根据其分解糖和蛋白质的差异进行区别。4.抗原检查用已知的特异性抗体检查鉴定未知标本分离的纯种细菌。方法:玻片凝集试验,免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶联免疫吸附试验等试验可快速、灵敏地检出标本中微量致病菌抗原,有助于病原菌的确定。5.动物试验用于某些疑难的、新的病原菌的分离鉴定、测定菌株的产毒性和科学研究。常用的实验动物有小鼠、豚鼠和家兔等。接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内和灌胃等。6.药物敏感试验药敏试验方法有：纸碟法、打孔法、小杯法和试管法等多种，以纸碟法和试管稀释法较常用。药敏试验指导临床用药，及时治疗和控制耐药菌感染意义较大。（二）检测致病菌成分1.检查抗原常用的方法有：免疫荧光、协同凝集、ELISA、间接血凝、乳胶凝集及对流免疫电泳等。原理是用已知的特异抗体检测未知的抗原。例如，脑膜炎奈瑟菌感染引起的急性化脓性脑膜炎可用特异抗体作对流免疫电泳检查其脑脊液中相应的抗原,1h内可出结果。

2.检测核酸

(1)核酸杂交(nucleotidehybridization)

原理是应用已知序列的核酸单链作为探针(probe),探针事先已用放射性同位素,如32P或非放射性物质,如生物素、地高辛或辣根过氧化物酶等标记。在一定条件下,按照碱基互补原则与处理后的标本中未知的单链核酸杂交,然后通过探针上标记物的反应信号,得知标本中有无特异序列与探针结合。(2)多聚酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的无细胞分子克隆技术。在体外数小时内可将标本中含有的某段基因序列扩增上百万个同一基因片段。(3)DNA指纹(fingerprinting)或图谱(profile)包括细菌染色体DNA或质粒DNA指纹或图谱。主要用于追踪鉴定传染源及流行病学调查等方面的研究。(4)DNA芯片(DNAchip)技术原理是先合成上千万个特异的寡核苷酸探针，并有序地点布在硅片及玻片等固相支持物上组成微点阵(microarray)，即DNA芯片(DNAchip)；随后抽提待测样品中的mRNA，用荧光染色标记后与芯片上的探针进行杂交。第二节血清学诊断一、抗体效价及其判定

不同的病原体，不同的病程，初次感染和再次感染，抗体产生的量均可不同，并存在动态变化。在血清学试验中，可先将血清稀释成不同的比例，再与一定量的已知抗原相互作用，最后测出抗体的含量。抗体效价(titer)是以明显观察到抗原抗体反应出现的最高血清稀释度为单位。

二、常用血清学诊断方法的种类用于细菌感染的血清学诊断方法有凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、中和试验和免疫标记技术等。凝集试验尽管敏感性不高，但临床仍然有应用，如肥达试验(诊断伤寒及副伤寒)，外斐试验(诊断立克次体病)，显微镜凝集试验(诊断钩端螺旋体病)，乳胶凝集试验诊断脑膜炎奈瑟菌和梅毒等感染；由于临床对微量物质检测的要求，目前应用最多的是免疫酶标记技术的方法。第三节人工主动免疫

免疫类型

获得方式主动免疫

自然主动免疫隐性或显性感染

人工主动免疫接种疫苗或类毒素被动免疫

自然被动免疫通过胎盘和初乳

人工被动免疫注射抗毒素、免疫球蛋白、免疫细胞及转移因子等

一、概念

用人工方法将疫苗或类毒素等免疫原接种于人体，使之产生特异性免疫力称为人工主动免疫。人工主动免疫获得免疫力较慢，但维持时间长，主要用于某些传染病的预防。20世纪初叶欧洲的免疫接种20世纪中我国开展免费接种二、常用制剂(一)疫苗(vaccine)1.灭活疫苗

细菌等微生物经人工方法大量培养后再用理化方法杀死制成。死疫苗仍保留抗原性。又称死疫苗。

2.减毒活疫苗指通过人工培养筛选或经基因突变或重组使有毒力的细菌变为弱毒或无毒但保留抗原性且遗传性稳定的活菌。

3.亚单位疫苗

用化学方法裂解和提取或通过基因工程产生的细菌保护性抗原成分(不含病原体的核酸)制成的疫苗。

4.核酸疫苗也称DNA疫苗或基因疫苗

5.DNA重组疫苗

通过DNA重组技术制备所需的疫苗(二)类毒素(toxoid)细菌外毒素经甲醛液作用3～4周后，毒性消失但仍保留免疫原性,则为类毒素。类毒素中加入适量的磷酸铝或氢氧化铝等吸附型佐剂便成为精制吸附类毒素。它们在体内吸收速度明显减慢,能长时间刺激机体产生较强的免疫效果。例如，白百破三联疫苗是由白喉类毒素、百日咳鲍特菌和破伤风类毒素混合而成。第四节人工被动免疫

一、概念用人工方法将抗体,如抗毒素或免疫细胞等直接注入人体，使机体迅速获得免疫力的方法称为人工被动免疫。主要用于某些感染性疾病的紧急预防和治疗。二、常用制剂(一)抗毒素(antitoxin)一般用细菌类毒素或外毒素免疫动物(如马),取动物血清分离纯化而制成。(二)丙种球蛋白从正常人血清中提取的则为人血清丙种球蛋白。于丙种球蛋白缺乏者细菌感染的防治及其麻疹、甲型肝炎和脊髓灰质炎等疾病的紧急预防。(三)抗菌免疫血清是用细菌免疫人或者动物制备的含特异性抗体的血清。在某些多重耐药菌,如铜绿假单胞菌感染治疗时,可考虑使用该种血清。目前有人绿脓免疫血浆注射制剂和血清纯化的特异性Ig制品。(四)免疫细胞和细胞因子输入免疫细胞有抗感染作用,称为过继免疫,如LAK细胞CIK细胞等。细胞因子制剂主要适用于一些病毒性疾病,常用的细