抗体检测介绍详解演示文稿

抗体检测介绍详解演示文稿当前1页，总共35页。优选抗体检测介绍当前2页，总共35页。HCV病毒学特征黄病毒属1有衣壳蛋白包裹2

已知6种基因型，>80个亚型3病毒基因组具有高度变异性3形成不同基因构成的病毒亚群或准种1,4增殖速度：1012个/天21.PurcellR.NIHConsensusConferenceonHepatitisC.1997;2.NeumannA,etal.Science1998;282:103;3.LauerG&WalkerB.NEnglJMed2001;345:41;4.HoofnagleJ.NIHConsensusConferenceonHepatitisC.1997衣壳

RNA基因组病毒颗粒核心蛋白当前3页，总共35页。中国丙肝临床报告病例逐年递增中国卫生部公告.庄辉.2012世界肝炎日全国丙肝专题会议.

中国目前约有1000万例丙肝感染者当前4页，总共35页。临床报告病例仅是总体患者的冰山一角中国目前约有1000万例HCV感染者中国卫生部公告.庄辉.2012世界肝炎日全国丙肝专题会议.

超过90%的HCV感染者尚未被发现历年报告临床病例总和<100万例当前5页，总共35页。HCV特征决定

准确的检测是疾病管理最重要防线病毒基因组具有高度变异性目前尚无预防性疫苗HCV在体外持久的稳定性丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性对于Anti-HCV筛查阳性者应及早确诊、规范治疗当前6页，总共35页。HCV感染诊断实验的选择

方法筛查确诊疗程疗效的评估持久性应答预测ALT※Anti-HCV※RIBA※HCV

RNA※※※※HCV基因分型※当前7页，总共35页。Anti-HCV是HCV感染筛查的指标

80%急性感染进展为慢性感染当前8页，总共35页。Anti-HCV的漏检和假阳性

是困扰实验室问题之一当前9页，总共35页。

Anti-HCV确认阳性*+-Anti-HCV+9999(TP)9900(FP)PPV=9999/(9999+9900)=50.25%-1(FN)980100(TN)NPV=989,010/(1+989,010)=99.9999%感染者10,000未感染990,000灵敏度=99.99%特异性=99%prevalence=1%在低感染人群，假阳性不可忽略

1%的感染率，如特异性99%，PPV只有50%当前10页，总共35页。

抗-HCV筛查检测报告阴性或根据S/Co比值判定为阳性所有阳性结果高S/Co比值阳性*报告低S/Co比值阳性*RIBAHCV检测或阳性报告阴性报告不确定报告阳性阴性RIBAHCV检测HCVRNA的NAT检测阳性报告阴性报告不确定报告报告美国CDCAnti-HCV实验室检测结果报告导则11，MiriamJ.Alteretal-GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus当前11页，总共35页。RIBA（以Chiron为例）

两个以上条带（＞1+）为阳性当前12页，总共35页。Anti-HCV检测灵敏度也是不能忽略<==窗口期==>（70天）DNA阳性3rdgen1stgen2ndgen不同的3rd试剂当前13页，总共35页。第三代试剂之间也有明显差异

2006Hep/RetroSymposiumIIIWashingtonD.C.,24-26September2006当前14页，总共35页。Anti-HCV有反应性进一步结果解释Anti-HCV有反应性RIBA（+）

Anti-HCV有反应性HCVRNA（+）

Anti-HCV确认阳性Anti-HCV确认阴性CDC，GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus

2003Anti-HCV有反应性RIBA（-）；Anti-HCV有反应性HCVRNA(-）/RIBA（-）HCVRNA（-）/RIBAIND视为低风险当前15页，总共35页。Anti-HCV有反应性进一步结果解释HCV有反应性RNA(-)仍需要进行RIBA

确认，尤其是低流行区域根据流行率的确认流程流行率<10%先RIBA，后RNA最经济

流行率>20%先RNA，后RIBA最经济流行率10-25%两者方案，费用相当CDC，GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus

2003当前16页，总共35页。

临床需要高性能的检测试剂假阳性不必要的补充确认检测不必要的就诊和心理伤害医疗纠纷假阴性传播扩散风险医疗安全风险延误病情当前17页，总共35页。CE1E2NS2NS3NS4NS5ANS5B5´UTR结构蛋白非结构蛋白3´UTRa)b)

对于HCV病毒认知的深入使检测试

剂性能逐渐提高聚合酶抑制剂NS5A抑制剂蛋白酶抑制剂新药物诊断试剂Core蛋白和NS3蛋白的免疫原性最强，是抗体检测最重要组份；当前18页，总共35页。第三代Anti-HCV检测试剂

精选抗原靶位，提升检测性能NS3/Core抗体出现最早NS3抗原在早期诊断和提高灵敏度上都均有重要价值，提高NS3抗原的配比Core抗原中的N端保守区域易产生交叉反应，适度减少Core抗原的配比随着重组技术的进展，使原料抗原的活性更强

各种抗原的配比调整第三代Anti-HCV的平均窗口期是6-8周；NS3和Core抗体要早于NS4和NS5抗体数周时间第三代试剂中加入Core，NS3，NS4（部分厂家加入NS5)抗原。

当前19页，总共35页。影响试剂性能的主要因素

各种抗原的配比平衡增加NS3抗原，同时减少核心区抗原益处：提升灵敏度减少了非特异性反应挑战：“度”的把握掌握不好，容易漏检

抗原的选择和生产工艺HCV病毒缺乏有效体外培养系统，难以从病毒中分离出天然抗原；生产的抗原材料与天然抗原的接近度越高，试剂性能越好。NS3是构像依赖性抗原，需要使用重组抗原不同批次间抗原的均一性非常重要；NS4/Core抗原通常使用合成多肽抗原；当前20页，总共35页。了解试剂性能，

是放心应用的前提！当前21页，总共35页。Elecsys®Anti-HCVII

双抗原夹心法，18分钟当前22页，总共35页。Elecsys®Anti-HCVII全面升级

viral(+)RNAgenomeviralpolyproteinCE1E2NS1NS2NS3NS4ANS4BNS5ANS5Bstructuralproteinsnon-structuralproteins合成肽合成肽重组抗原New!新的试剂缓冲液 减少干扰增强试剂的稳定性应用Core，NS3，NS4抗原片段不再应用NS5（对于灵敏度提升有限但是会降低检测特异性）当前23页，总共35页。Elecsys®Anti-HCVII多中心评估评估单位评估内容1st:多中心研究北京大学人民医院（Elecsys/Vitros/Architect）上海交通大学新华医院（Elecsys/Vitros）四川大学华西医院

(Elecsys/Lizvon/Intec)2nd:特殊样本的评估卫生部临检中心（多种方法）灵敏度血清转换盘样本日常检测阳性样本临检中心早期感染样本特异性实验室常规检测样本确认方法：MIKROGEN®RIBAHCVCHIRON®RIBAHCV3.0Cobas®TaqmanHCVRNA当前24页，总共35页。应用血清转换盘评估灵敏度

Elecsys®Anti-HCVII灵敏度最高当前25页，总共35页。血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度的标准当前26页，总共35页。常规样本的评估

北京大学人民医院(n=830)

样本数N=830Elecsys®Anti-HCVIIVitros®Anti-HCVArchitect®Anti-HCV阳性真阳性17171716假阴性001阴性真阴性813809805805假阳性488统计灵敏度100%100%94%特异性*99.50%99.02%99.02%阳性率2%*RIBA不确定+RNA(-)结果解释为阴性

当前27页，总共35页。常规样本的评估

上海交通大学新华医院（n=495)

样本数N=495Elecsys®Anti-HCVIIVitros®Anti-HCV阳性真阳性111假阴性00阴性真阴性494494492假阳性02统计灵敏度100%100%特异性*100%99.60%阳性率0.2%

*没有HCVRNA结果,排除RIBA不确定样本当前28页，总共35页。常规样本的评估

四川大学华西医院(n=1044)

样本数N=1044Elecsys®Anti-HCVIIElecsys®Anti-HCVIntec®Anti-HCVLizvon®Anti-HCV阳性真阳性88877假阴性8811阴性真阴性10361034102210361034假阳性21402统计灵敏度100%100%88%88%特异性*99.8198.64%100%99.81%阳性率0.8%*没有HCVRNA结果,排除RIBA不确定样本当前29页，总共35页。预选样本的评估

北京大学人民医院（n=67)

RIBA不确定样本的RNA结果均为(-)低S/CO样本中20%是真正阳性入选:Vitros(+)S/CO<8当前30页，总共35页。预选样本的评估

北京大学人民医院（n=67)

灵敏度：92%特异性*：93%灵敏度：92%特异性*：63%*RIBA不确定+RNA(-)结果解释为阴性

当前31页，总共35页。早期感染样本的灵敏度评估1

方法Elecsysanti-HCVIIABCDEFG有反应性11092989291868687灵敏率87.2%69.2%76.7%69.2%68.4%64.7%64.7%65.4%具体样本组成RIBA（+）99RNA（+）121RNA(-)&RIBA(+)RNA(+)&RIBA(+)RIBA(-)/IND&RNA(+)1287341卫生部临检中心评估数据HCVRNA和/或RIBA阳性（n=133)当前32页，总共35页。特异性评估1

方法Elecsysanti-HCVIIABC有反应性2213842无反应性305286269265特异性99.35%93.16%87.62%86.32%方法Elecsysanti-HCVIIABC有反应性3411611477无反应性385303315342特异性91.89%72.23%75.18%81.63%1卫生部临检中心评估数据RNA&RIBA阴性（n=307)RNA阴性&RIBA不确定(n=419)当前33页，总共35页。判定真阳性的Cutoff的初步分析1

基于全部1072例/243例确认阳性样本

方法S/COn>S/CO假阳性真阳性率S/COn1-S/CO

假阳性真阳性率Elecsys