李非博士NK、NKT 抗病毒、抗肿瘤作用的机制

NK细胞名称通常称自然杀伤细胞。稞细胞无B细胞的特有标志TCR或膜Ig。大颗粒淋巴细胞：形体较大，胞质内含较大的颗粒。自然杀伤细胞：具有杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞等活性作用。NKT细胞是一类同时表达恒定的T细胞受β 和NK细胞标志的CD4－CD8－、或CD4+的T细胞，NKT细胞约占肝内淋巴细胞总数的20%～30%，当NKT细胞活化后能迅速产生高水平的IFN-γ 。NK/NKT抗病毒、抗肿瘤作用的机制1、慢性HBV、病毒持续复制和宿主天然免疫和特异性免疫功能缺陷、低下及紊乱是疾病迁延不愈的两大主要原因。清除病毒，缓解肝脏病变，除了积极合理地应用抗病毒药物长期抑制病毒复制之外，增加自身免疫细胞数量、提升免疫细胞作用，是清除病毒、治愈肝病的关键。2NK细胞的作用一：最主要的天然免疫效应细胞群，承担着非常重要的免疫监督功能。其针对病毒感染细胞的作用特点：①不需要特异性的抗原激活NK细胞；②某些细胞因NK可在数小时或1天内达到高峰；NK细胞的作用二：④在抗病毒感染中主要是直接杀伤被病毒感染的细胞，在这类细胞中有损伤作用；⑤是免疫调节细胞，作用于CD4+细胞和CD8+CD16分子辅助B细胞诱导体液免疫；⑦分泌大量的具有抗病毒效应的炎症因子。3NKTNK细胞功能特征的TNKT细胞可NKT细胞的激活可抑制HBVNKT①与NK细胞不同，NKT细胞主要通过Fas配体系统发挥细胞毒作用；②NKT细胞激活后分泌IL-4和IFN-γ调节Th细胞诱发免疫反应；③活化其他淋巴细胞进一步抗病毒。④NKT细胞不识别病毒抗原，体内NKT细胞不被清除，如能激活慢性、HCV感染者肝内TT细胞天然免疫反应将打破V感染免疫耐受状态的特异性T细胞应答的一种补偿。4、肝脏NK/NKT细胞抗病毒作用肝脏是机体免疫中起重要作用，肝脏内的免疫系统亦包括天然免疫和特异性免疫二个组成部份。包括淋巴细胞的天然免疫细胞（NK/NKT淋巴细胞占肝脏淋巴细胞的和特异性免疫细胞（T.B淋巴细胞。肝脏的免疫状态影响慢性HBVHCV⑴慢乙肝天然免疫损伤：慢乙肝患者●体内NK/NKT淋巴细胞亚群的功能呈下降趋IL-2下降。●活化的NK细胞及CD8T淋巴表面的IL-2Ra链分离水平明显升高，妨碍了由IL-2诱导的免疫反应，造成肝脏内NKT特异性TT淋巴功能耗竭的因素：①病毒的持续存在和抗原长期作用；②辅助性CD4+细胞的数量减DCmDC表达CD80CD86T淋巴细胞NKNKT细胞群具有招募外周血循环中T淋巴细胞的作用，这些招募来的活化的T淋巴易于发生凋亡；②肝窦内皮细胞（LSEC）通过捕获和杀伤活化的特异性淋巴细胞，终止免疫反应；③慢乙肝后肝脏微循环改变mDC的成熟障碍，不成熟的DC易诱导耐受的发生。5、NK/NKT细胞与其他免疫细胞、细胞因子关系的研究⑴在慢性HBV，肝硬化、肝癌患者体内NKHCV持续复制部份原因应归结于病毒抑制了NK细胞。至于外周血NK细胞数量降低，是发生在患者感染HBV以前还是之后，目前尚无定论。⑵多种细胞因子可以诱导K成为杀伤细胞（经IFN—r等细胞因子的诱导成CIK细胞，NKT淋巴细胞比例显著上升，可达50%以上。激活的CD8+TNKT细胞数量和比例都大幅度提高CD256NKNKT细胞与DC、HCV细胞与DC相互作用后能维持机体自稳状态和协助抗病毒感染。DC产生的IFN-a介导NK细胞能释放IFN-r，其途径可能：①NK细胞激活依赖IL-12和DC产生的其他细胞因子或分子；②DC产生的IL-2联合其他细胞因子增强NKDC细胞因子与激活NKDC分泌IL-12P70诱导NKCD56造血干细胞来源的。提供的辅助因子5和，促进K细胞增殖和存活。CIK疗法临床抗HCV的进展⑴“”是英文cytokineinducedkiller的简称，中文翻译名为“细胞因子诱导的具有NK1999年进行肿瘤年7炎的治疗。8CIK细胞抗肿瘤，抗病毒作用的机制⑴CIK细胞疗法是过继性免疫疗法之一，在多种细胞因子IFN—r，抗CD3NK以CD3CD56细胞为主，能识别多种肿瘤细胞和病毒感染的细胞，通过与靶细胞直接接触、杀伤或分泌IFN—rTNF—a，IL—6等多种抗肿瘤和抗病毒的细胞因子，抑制杀伤肿CIK细胞分泌的细胞因子能有效调节机体的免疫功能。⑵CIK细胞抗肿瘤、抗病毒主要通过以下3条途径：①通过颗粒酶、穿孔素作用直接杀伤肿瘤和病毒感染细胞；②释放细胞因子（IFN-r、TNF-a、IL-L）提高机体免疫功能，抑制肿瘤生长、病毒Fas/FasLCIK细胞作用特点①CIK细胞的有效性●CIK细胞培养容易，经体外诱导培养后可以几十倍甚至上百倍增长，健康人可扩增到，肝癌患者达。●细胞表型发生CD3TCD8TCD25T20%上升到60%—80%。●NK细胞与IL—2结合后可杀死对NK细胞原不敏感的肿瘤细胞、病毒感染细胞等靶细胞。●CIK细胞的效应细胞中CD3CD56细胞外周血中极其罕见，培养后CD3CD56细胞增加1000倍以上。●CIK细胞治疗慢乙肝后肝硬化43例，治疗后33例A阳性中26例g阴（）3例g血清转换，部分肝功能好转，表现为、L下降、血清白蛋白上升。②CIK作用的专一性：回输的自体CIK细胞更具针对乙肝病毒的特异性和靶向性；HBVHBV感染细胞而清除病毒。③CIK细胞疗效的持续性：CIK细胞治疗是免疫细胞的治疗，通过CIK细胞的安全性：CIK细胞来自患者自体细胞，不会CIK作用仅对HBV硬化，不仅HBVDNA下降，HBeAg转阴，肝功能、、TBIL白蛋白均有明显改善。9、CIK细胞治疗的适应症①年龄16岁—65岁。②确诊为慢乙肝、慢丙肝、肝功能正常或异常，但ALT＜400u/L，TBiL＜85umol/L。③慢乙肝、慢丙肝抗病毒治疗效果不佳或反弹，包括初治失败，病毒变异或耐药者。④慢乙肝、慢丙肝后肝硬化代偿期患者。⑤早、中、晚期肝癌，包括已转移的患者，手术切除、放疗、化疗等治疗前后及肝移植前患者，由于病情已不适其他治疗的患者。10、禁忌症①肝硬化患者严重失代偿，高度腹水，有上消化道出血史者。②肝功能明显异常者：胆红素（TBiL）＞85umol/L（慢性肝炎患者＞45umol/L）谷丙转氨酶（ALT）＞400u/L，凝血酶元活动度（PTA）＜50%，血小板（PLT）＜40×109/L。③酒精性、药物性及自身免疫性肝病。④合伴有恶性肿瘤、艾滋病、精神疾病及严重的心脑血管疾病，糖尿病、肾功能不全者。⑤对注射有严重过敏史的过敏体质者制剂的患者。⑥有明确感染如结核、细菌感染者或有发热者。⑦孕妇或哺乳期妇女，育龄妇期患者接受治疗时必须坚持避孕。11、CIK细胞治疗的步骤一：①治疗前检查肝功能，乙肝二对半（定量A定量，血常规，凝血功能等常规项目。②用成分血分离采血机（spectrav6.1）采集患者外周血单核细胞，采集细胞数（1-4）×109，体积大约40—70ml，采集时间约需45分钟。③将采集到的细胞在符合GMP进口无血清培养基，不用外源性血清培养，避免了交叉感染的可能性）置于透气性培养袋中，在不同时间内加入一定剂量的rhIFN—ranti—CD3mAD等各种细胞因子，37℃，5%CO2悬浮培养，所有操作过程均在严格无菌条件9—12天。CIK细胞治疗的步骤二：④CIK10天将CIK细胞分3次在第101315天回输给患者。每次取CIK细胞悬液的体积、离心、洗涤和重悬浮后，制备成各成400-500ml的CIK1小时。⑤一个疗程约14-16天，以后间隔2-3个月可进行下一个疗程的治疗。12、CIK细胞治疗的注意事项勿食油腻食物或进食过饱。②细胞采集、CIK细胞回输中的不适反应及处理：少数患者在细胞采集中可能会出现口面部、四肢发麻，口服葡萄糖酸钙即可消失。身体虚弱者采集时间应适当延长。CIK细胞回输后，部分患者会出现一过性类流感样症状，如发热（37.5℃122-6小时内自行缓解