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/乙酰胆碱转移酶（ChAT）测试盒说明书乙酰胆碱转移酶（ChAT）测试盒说明书（测组织）一、测定原理：乙酰胆碱转移酶（cholineacetyltransferaseChAT）的测定是以乙酰辅酶A和胆碱为底物，在ChAT的作用下，反应的生成物和显色剂结合，在324nm处测定吸光度，以此计算ChAT的活力。二、试剂构成与配制（40管/20样）：试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。室温低时会有结晶析出，测试前37℃水浴至澄清。试剂二：粉剂×1支，临用前加220μL的蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂20℃以下保存。试剂三：粉剂×1支，临用时每支加双蒸水440μL，用不完的试剂20℃以下保存。试剂四：液体×1支，临用前每支用双蒸水1:1稀释，4℃保存。试剂五：液体×1支，4℃保存。试剂六：液体×1支，4℃保存。试剂七：液体×1支，4℃保存。三、操作步骤：1、样本前处理：10%匀浆液的制备：精准称取组织重量，按重量（g）：体积（mL）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，2500转/分，离心10分钟，取上清液，再用生理盐水2倍稀释后测定；2、操作表：测定管对比管试剂一（μL）105105试剂二（μL）55试剂三（μL）1010试剂四（μL）1010试剂五（μL）1010试剂六（μL）1010混匀，37°C水浴预温5分钟5%的组织匀浆上清（μL）25（煮沸的匀浆上清）25混匀，37°C水浴20分钟，100°C沸水水浴2分钟停止反应蒸馏水（μL）425425混匀,4000r/min×10min离心后取上清进行显色反应上清（μL）500500试剂七（μL）1010混匀，静置15分钟，在324nm处，用1cm光径，2mm内径的石英比色皿，蒸馏水调零，测定各管的吸光度值。四、测定意义:乙酰胆碱Ach是调整食道平滑肌运动的重要的兴奋性神经递质。食道平滑肌收缩重要是由于Ach释放引起。而乙酰胆碱转移酶（CholineacetyltransferaseChAT）和乙酰胆碱脂酶（AcetylcholinesteraseACHE）分别是Ach的合成酶和水解酶，调整Ach的代谢。食道组织中这两个酶的活力代表了食管内源性胆碱能神经功能状态。乙酰胆碱是延髓脊髓运动神经元，自主神经系统神经节前纤维，神经节后胆碱能（副交感神经）纤维，以及中枢神经系统内很多神经元（例如基底节，大脑运动区皮层）的重要神经递质。它是通过胆碱乙酰转移酶的作用，由胆碱与来自线粒体的乙酰辅酶A所合成。在获得释放后，乙酰胆碱刺激特别的胆碱能受体，这种相互作用很

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