hbv分类医学的课件资料

hbv分类医学的课件资料第1页/共27页概要1、主要的类型2、世界性的分布3、在中国的分布4、现有的几种实验室hbv感染模型第2页/共27页1、主要的类型HBV是肝脏DNA病毒属的一位标志性的代表。1、哺乳动物肝脏DNA病毒感染人类的HBV可以分为八个基因型（以差别至少8%为依据）A、B、C、D、E、、F、G、H还有许多的亚基因型（以差别至少4%为依据）2、鸟类肝脏DNA病毒第3页/共27页具体的基因型（哺乳动物的）图片来自于WJGv13i1第24页【白臂长臂猿】【猩猩】【大猩猩】【毛猴】【土拨鼠】【地松鼠】【北极松鼠】【土拨鼠】【地松鼠】【北极松鼠】【毛猴】【白臂长臂猿】【猩猩】地松鼠和土拨鼠只有8%的基因型差异第4页/共27页八种HBV（人）的基因型的区别基因型基因组长度开放阅读框的差异A3221HBc插入氨基酸153和154B3215C3215D3182删除preS1的1-11氨基酸E3212删除preS1的11位氨基酸F3215G3248HBc插入12个氨基酸删除preS1的11位氨基酸H3215第5页/共27页30000年前DHBV和它们共同的祖先，之后它们分离DHBV和它们共同的祖先，之后它们分离WBV和GSBV从HBV相互分离10000年前3000年前WBV和GSBV从HBV相互分离HBV和HBV的血清型相互分离根据HBV同义替代率为4.57×10-5位点每年推算得知第6页/共27页图片来自于WJGv13i1第25页【北京鸭】【灰短颈野鸭】【苍鹭】【长毛鸭】【罗斯鹅】【雪白鹅】【白鹳】【Demoiselle鹤】【灰冠鹤】具体的基因型（鸟类动物的）最远的基因型只有40%的同源性第7页/共27页【灰冠鹤】【罗斯鹅】【雪白鹅】【苍鹭】【鹳】第8页/共27页2、世界性的分布第9页/共27页八种基因型分布的差异1、D1和D2、D3的分布是广泛的，在东印度、南非和欧洲（塞尔维亚）都有发现。2、除了E和G其他的基因型都有亚基因型第10页/共27页3、HBV在中国第11页/共27页目的了解中国不同地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型及基因亚型分布特点。方法从我国东部(山东、江苏)、西部(新疆)、南部(广东、广西)、北部(吉林、北京)及中部(河南、河北)5个地区的9个省、自治区、直辖市收集735份慢性HBV感染者血清样品,用本实验室建立的型特异性引物巢式聚合酶链反应法(nPCR)检测HBV基因型及基因亚型。第12页/共27页结果显示在735份样品中71.8%(528/735)为C型，C2亚型占94.0%(496/528),C1亚型占4.9%(26/528),C1+C2混合亚型占1.1%(6/528);10.3%(76/735)为B型，B2亚型占90.8%(69/76),B1亚型占5.3%(4/76),B1+B2混合亚型占3.9%(3/76)6.3%(46/735)为D型11.6%(85/735)为混合型C型样品中,除西部新疆地区C型相对较少(31/116,26.7%)外,其他地区均以C型为主。D型主要分布在西部新疆地区,占31.9%(37/116)。混合型在各地区均有发现,但以西部和南部地区相对多见,分别占30.2%(35/116)和20.0%(22/110)。第13页/共27页结论结论我国HBV基因型和基因亚型的分布有明显的地域性差异。除西部新疆地区以D型为主外,其他地区均以C型为主,且主要为C2亚型。B型中主要为B2亚型以上数据结果结论均引用自中国病毒病杂志2011.03第14页/共27页4、实验室用来研究乙肝感染的模型4.1灵长类动物hhbv感染模型

barker等［2］首次报道黑猩猩感染hhbv（人乙肝病毒）模型实验获得成功，研究中发现黑猩猩对四种亚型（adw、adr、ayw、ayr）hbsag阳性血清都可成功获得感染，并在黑猩猩的血清中检测出与接种物相同亚型的hbsag，其中以adr亚型的致病性较强。barker等［3］研究表明，恒河猴是最实用的hhbv易感动物，但其敏感性低于黑猩猩。感染hhbv后的恒河猴，其血清中hbsag和hbvs呈阳性，但在急性期未出现谷丙转氨酶异常升高和肝脏损害。张涛等［4］研究发现，猕猴感染hhbv后肝组织有类似人乙型肝炎的病理改变，免疫组化法与原位杂交法检测结果相吻合。实验研究发现，西里伯类人猿、palas猴，长尾黑颚猴、白脸猴、尤猴、新域猴、长臂猿、狒狒、卷毛猴、平顶猴、大猩猩及蜘蛛猴等均可用hhbv感染成功获得乙型肝炎动物模型，在它们体内均可检测出hbsag、抗hbs、抗-hbc、hbv-dna。第15页/共27页4.2鸭dhbv感染模型唐霓等［5］用不同日龄鸭接种dhbv建立急性和慢性感染模型，结果发现慢性感染的形成与幼鸭免疫系统发育尚未完善有关，即不同日龄的鸭肝细胞对dhbv易感性不同。姚云清等［6］用hbv-dna转染的原代鸭肝细胞与dhbv感染的原代鸭肝细胞进行比较，结果提示两者的复制与表达相似。朱清静等［7］用dhbv阳性血清反复攻击成功获得鸭乙型肝炎肝纤维化模型。鸭乙型肝炎并不能诱发肝细胞性肝癌，郝连杰［8］报道hans等经过对鸭乙型肝炎病毒基因结构的分析，证实鸭乙型肝炎病毒所有分离株中均存在一缺乏常规翻译起始密码子的x样开读框架，并不是没有x基因。第16页/共27页4.3hbv部分片段的转基因小鼠模型胡卫江等［9］应用受精卵原核显微注射的方法，制备了含有2.0拷贝hbv

（adr亚型）基因组的转基因小鼠，发现hbv基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，并有病毒颗粒形成。刘红等［10］采用受精卵显微注射的方法，建立了hbv核心抗原（ayw亚型）转基因小鼠模型，核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达并可稳定遗传。金艳花等［11］采用原核显微注射法将质粒pcdna3.1-pres/st注射入小鼠受精卵雄原核，成功获得了稳定遗传3′末端缺失的pres/s基因并表达pres2蛋白的转基因小鼠，命名为c57-tgn（pres/st）smmu。訾晓渊等［12］研究发现，f5代c57-tgn（hbvadr2.0）smmu小鼠具有基因组中稳定整合病毒dna，血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征，并具有一定的组织学变化。第17页/共27页4.4dna疫苗免疫hbv转基因小鼠模型

oka等［13］用单剂量质粒ps及ps2-s

免疫30例hbv转基因小鼠，导致了其中28例hbsag的清除；而hbsag蛋白疫苗在注射7个月之后，仅导致29例hbv转基因小鼠中10例hbsag的清除，提示dna疫苗免疫效果较好（？）。schirmbeck等［14］用hbv-dna疫苗及hbsag重组蛋白疫苗免疫h-2b小鼠及其同源hbv转基因小鼠，未诱导出免疫反应；但将免疫小鼠脾细胞转输入hbv转基因小鼠，则可导致血清hbsag滴度下降，抗hbsag抗体产生，并诱导出ctl反应，但未使肝脏hbsag转基因表达得到控制。第18页/共27页4.5hbv免疫缺陷小鼠模型

brown等［15］将非肿瘤源性永生性人肝细胞株ihbv6.7移植到重组激活基因-2（rag-2）剔除鼠体内，建立了长期hbv病毒血症模型。ilan等［16］给正常小鼠高剂量射线全身照射以消除小鼠的免疫活性，再将严重联合免疫缺陷鼠的骨髓细胞移植给该鼠，最后将已感染hbv的人肝组织移植到该鼠肝脏，成功建立了与人自然感染hbv过程相似的hbv三聚体小鼠模型。第19页/共27页4.6大鼠hbv感染模型谭龙益等［21］将经磷酸钙沉淀的含3.2kb全序列hbv-dna的hbv-pcncx质粒直接导入大鼠肝脏，成功建立了hbv感染模型，在该鼠血清中检测到hbsag和hbeag，肝细胞中hbv-mrna及hbsag得到表达。wu等［22］将人肝细胞移植到有免疫活性的sd大鼠体内，再接种hbv，成功建立了hbv感染模型，3w后即可在血清中检测到hbsag含量稳定上升，hbv-dna可至少持续60d；同时肝中出现hbv-rna，免疫荧光示成串的肝细胞含染色阳性的hbcag。蒋黎等［23］用与wu类似的方法成功建立了wistar大鼠乙型肝炎模型，人肝细胞型细胞角蛋白和hbsag在该模型肝组织中得到了表达。第20页/共27页4.7树鼩感染hhbv的模型苏建家等［24］给树鼩接种hhbv的新鲜血清建立了树鼩感染hhbv的模型，在树鼩血清中可观察到hbsag及dane颗粒。yan等［25］用树鼩模型，进行了黄曲霉毒素b1（afb1）摄入和hbv感染诱发树鼩肝癌及其机制的系列研究，首次在树鼩体内证实了hbv与afb1有协同致肝癌作用。glebe等［26~27］用纯化的hbv感染原代树鼩肝细胞，可检测出hbvcccDNA、hbvmRNA、hbcag、hbeag。第21页/共27页4.8其他模型hbv同属于嗜肝病毒科的还有地松鼠肝炎病毒（gshv）、北极地松鼠肝炎病毒（agshv）、树松鼠肝炎病毒（tshv）、雪鹅肝炎病毒（sghbv）、苍鹭肝炎病毒（hhbv）、白鹳肝炎病毒（sthbv）等，其中研究地松鼠感染gshv的模型较多见［33］。第22页/共27页5、其他从肝细胞分泌完整的病毒颗粒到具有感染能力的HBV病毒颗粒感染肝细胞的全过程第23页/共27页1、直接或间接与肝细胞的特异性受体结合NTCP2、以胞吞的方式进入肝细胞3、脱去包膜蛋白形成含有RCDNA的核心颗粒4、RCDNA脱蛋白化5、在此之前或同时核衣壳蛋白部分降解暴露核定位6、脱蛋白的RCDNA通过核孔复合体进入核内7、完全脱衣壳形成DP-DNA8、DP-DNA借助肝细胞的DNA聚合酶修复不完整的正链形成完整的双链DNA9、双链构象改变成ccc10、初始cccDNA在拓扑异构酶作用下解螺旋11、解旋后在解链酶作用下解双链（？）第24页/共27页12、以负链为模板在肝细胞的RNA聚合酶作用下合成病毒的各种mRNA13、各种mRNA通过核孔复合体进入细胞质中14、pgRNA的5‘的茎环结构与HBV的DNA聚合酶结合15、包裹入核心颗粒蛋白16、在HBV的DNA聚合酶介导下复制负链，期间经过5’到3‘的转位合成17、P蛋白的RNA酶Ｈ降解pgRNA18、以负链为模板残余的pgRNA的5’的核酸寡聚体与DNA负链内部的接