临床本科3溶贫检测

临床本科3溶贫检测第1页/共46页freeHb(a2b2

tetramers)HbdimersHaptoglobin（Hp）haptoglobin-hemoglobincomplexkidneyslivermetHbbindstohemopexin&albuminferriheme(Fe3+)globin第2页/共46页溶贫的临床表现急性：发热、畏寒，可出现Hb尿，肾功能改变慢性：贫血、黄疸、脾肿大、免疫指标异常，胆红素代谢异常第3页/共46页红细胞破坏增多的依据RBC寿命<15天血片见RBC碎片血浆游离Hb增高（血管内溶血）Hb尿检测（＋），酱油色尿含铁血黄素试验（＋）血清非结合胆红素增高尿胆原增高血清结合珠蛋白减低血浆高铁血红素白蛋白检测第4页/共46页球形红细胞第5页/共46页破碎红细胞、盔形红细胞等第6页/共46页一、溶贫筛查试验1、血浆游离Hb测定

正常值：<50mg/L

意义：血管内溶血的指征第7页/共46页2、血清结合珠蛋白测定正常值：0.7~1.5g/L各种溶血时结合珠蛋白均可减低，严重血管内溶血明显减低，甚至测不出（血浆游离血红蛋白超过1.3g/L时）。巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、先天性无结合珠蛋白血症等减低或消失。增高见于炎症、感染、组织坏死、恶性肿瘤、风湿性疾病、口服避孕药、类固醇激素治疗。第8页/共46页3、血浆高铁血红素清蛋白检测

正常：阴性严重血管内溶血时呈阳性4、RBC寿命测定（最佳）正常值：25~32天51Cr同位素标记，半衰期<15天，说明有溶血存在。第9页/共46页5、尿含铁血黄素试验（Roustest)正常值：阴性溶贫中阳性只占10~20%第10页/共46页第11页/共46页二、红细胞膜缺陷的检验1、RBC渗透脆性试验检测红细胞在不同浓度低渗盐水中的抵抗力RBC表面积/RBC容积比值与RBC脆性成反比第12页/共46页参考值：开始溶血0.42%~0.46%(NaCl液)完全溶血0.28%~0.32%(NaCl液)意义：脆性增高遗传性球形细胞增多症脆性减低地中海贫血、缺铁性贫血第13页/共46页2、自身溶血试验及其纠正试验正常人红细胞经孵育48h后，溶血率很低<4.0%，加葡萄糖或ATP后更低（<0.6%）膜缺陷性溶贫时，溶血率升高，但可被纠正G6PD缺陷：＋ATP：可纠正但不能纠至正常＋G：同上PK缺陷：＋ATP：可纠正＋G：不纠正第14页/共46页三、酶缺陷的检验1、高铁血红蛋白还原试验

G6PD高铁血红蛋白还原酶G6PNADP还原型美兰HbFe3+6PGNADPH氧化型美兰HbFe2+NaNO2

第15页/共46页正常值：定性法（－）半定量法还原率>75%G6PD缺陷：定性（＋），半定量<70%。第16页/共46页2、氰化物-抗坏血酸试验原理：略结果：正常血液几小时后变暗色意义：G6PD缺乏者血液变成棕色（巧克力色），纯合子在2h内即变色，杂合子要3~4h变化第17页/共46页3、变性珠蛋白小体生成试验受检RBC＋乙酰苯肼作活体染色（甲基紫）

37℃1~2h

有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒下一张G6PD缺乏致GSH减少，高铁Hb增多，形成Heinz小体第18页/共46页体外活体染色后，光镜下发现的1~2μm颗粒状折光小体。

结果：正常人<30%意义：见于不稳定血红蛋白病、G6PD缺陷症和芳香族苯胺或硝基类化合物中毒所致的溶贫。第19页/共46页4、G6PDPK活性测定第20页/共46页四、珠蛋白生成异常试验包括血红蛋白电泳、HbF定量测定（碱变性试验）等第21页/共46页五、免疫性溶血的检验1、抗人球蛋白试验（Coombs`test）直接法、间接法第22页/共46页直接抗人球蛋白试验（DAGT）测RBC表面结合的抗体（更重要，价值高）受检者RBC悬液+等量抗人球蛋白试剂

低速离心后观察凝集37℃，15min

第23页/共46页间接法（IAGT）：测游离特异的抗体（先使RBC致敏，再与抗人球蛋白血清结合）第24页/共46页Coombs`test临床意义正常人抗人球蛋白试验直接、间接均阴性自身免疫性溶血性贫血（温抗体型37℃条件下作用最强IgG）,(冷抗体型4℃条件下进行试验IgM)

新生儿同种免疫溶血病、SLE、RA、HD、NHL可阳性。第25页/共46页2、冷热溶血试验

检测补体依赖性冷热溶血素存在D-L双向抗体，则（+）正常为（-），（+）见于PNH

3、冷凝集素试验

参考值：效价<1:40意义：AIHA↑↑↑第26页/共46页六、PNH相关检测属于红细胞膜缺陷，慢性血管内溶血PNH不同时间尿样第27页/共46页1、酸化溶血试验（Hamtest）特异性高，是国内外公认的PNH确诊试验利用补体在弱酸性环境中激活，并攻击RBC膜，致溶血。正常人阴性，PNH阳性。第28页/共46页2、蔗糖溶血试验特异性敏感性均不如Ham试验，仅做筛选。参考值：阴性3、蛇毒因子溶血试验特异检测PNH第29页/共46页第四节血型鉴定与交叉配血第30页/共46页血型定义：红细胞系统血型：第31页/共46页一、ABO系统与临床意义

1、分型原则

根据红细胞膜上含有抗原和血浆中含有相应抗体分为A、B、AB、O四型

血型（表型）红细胞上抗原血浆中抗体基因型

AA抗BAA、AO

BB抗ABB、BO

O无

抗A、

抗B、抗ABOO

ABA、B无

AB

第32页/共46页第33页/共46页父母的血型与子女的血型关系

第34页/共46页2、抗原

A、B抗原（含H抗原）在胚胎期已形成，出生时抗原性不强，故胎儿、新生儿定血型时凝集性差。血型抗原终生不变。H抗原属分泌型物质，存在各组织中，以唾液为多，可辅助鉴定ABO血型。第35页/共46页3、抗体

抗A、抗B、抗AB属IgG或IgM型，天然性抗体以IgM为主，免疫性以IgG为主（如输血、妊娠后）。O血型血清内抗体属IgG。新生儿溶血与IgG有关。抗体也终生不变

抗A、抗B在生后3-6月才开始产生,5-6岁达高峰，故婴幼儿定血型时，抗体效价低，抗原位点少，易误定第36页/共46页

ABO亚型亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构或抗原位点数有一定差异。最多见的最有意义亚型是A型中的A1、A2（A1A、A1B、A2B)。A2B含有A1抗体。凡在血型鉴定过程中出现不明显或可疑结果时应做亚型鉴定。第37页/共46页4、血型鉴定第38页/共46页正向直接定型：用已知抗体血清检查红细胞的抗原反转定型：用已知血型的红细胞检查血清中抗体

正定型 反定型 抗A抗B抗AB A细胞B细胞O细胞

+-+ -+- A- ++ + -- B+++- -- AB- - - + +- O

血型第39页/共46页三、交叉配血、输血原则

1、交叉配血主侧交叉配血：次侧交叉配血:：第40页/共46页

2、输血原则

输血前复查血型，做交叉配血;输同型血，多个不同血源间互相交叉配血;

严格掌握输血指征;

提倡成分输血

第41页/共46页

意义输血；辅助诊断新生儿溶血病；器官移植；遗传分析；其他第42页/共46页二、Rh系统与临床意义

1900年发现ABO血型，1940年发现Rh血型。抗原有CcDEe五种，一般以D定型。含有D抗原的红细胞称为Rh阳性，不含D抗原的为Rh阴性.